悦目金蛛粗毒组分和效价检测实验分析-高血压的症状论文
高血压的症状论文 高血压论文发表 医学论文发表 护理类论文写作
1 仪器与材料
1.1 仪器
上海精密A1004电子天平，Olympus CX41显微摄像系统，上海新苗DNP-9052BS-Ⅲ电热恒温培养箱和DHG-9073BS-Ⅲ恒温鼓风干燥箱，湖南星科TGL-16B台式高速离心机，江苏昆山KQ-50DB数控超声波清洗器，北京泰克0610-403体式显微镜，日本三丰560-108 NK20游标卡尺，上海光学显微镜测微尺和上海亚荣真空抽气泵与干燥器等。
2.3 悦目金蛛粗毒组分和效价检测
2.3.1 悦目金蛛粗毒组分及结构观察
常温下，提取制备到的悦目金蛛粗毒呈粉状；用光学显微镜观察粗毒，100和400倍下粗毒呈片状或片状均匀晶体，不含其它颗粒杂质。见图1。
2.3.2 悦目金蛛粗毒的凝聚和裂解作用检测
取50 μl制备好的泰和乌鸡血红细胞悬液（悬液细胞密度约为1.04×103 个/mm3）和200 μl PBS缓冲液加入1 ml的PVC离心管中，随后加入50 μl悦目金蛛毒液，振荡，摇匀。竖置于30℃的恒温培养箱中，每隔5 min，用移液枪取20 μl反应液于单凹载玻片上，用显微镜观察，并拍照。经多次重复梯度实验，结果表明悦目金蛛粗毒溶液对泰和乌鸡血红细胞有明显的促凝集和裂解作用，由此可说明粗毒中含有糖蛋白凝集素和磷酯酶成分，且它能介导红细胞粘连和促进细胞裂解。见图2。
2.3.3 悦目金蛛粗毒促离子通道成分的探索
分别在60 μl制备好泰和乌鸡血红细胞悬液（悬液细胞密度约为1.04×103 个/mm3）中加入相应的0.17 mol/L KCl和0.17 mol/L CaCl2溶液，调配至1.5 ml，分成3个对照组，前两份分别加入20 μl悦目金蛛毒液和20 μl大腹园蛛毒液，另外一份加入20 μl PBS缓冲液。设5 min，30 min，60 min，120 min和180 min 5个不同反应时段，分段取液于血球计数板上，用显微镜观察并计数。具体反应结果见图3～4。通过对图的比对分析，可以得知：悦目金蛛毒素和大腹园蛛毒素均有促进红细胞溶血的作用，且大腹园蛛毒素的作用更为明显。而且，毒素对红细胞的裂解作用在钙离子环境下要比钾离子环境下更强。推测其原因可能是两种粗毒中有钙离子配体门通道的激活成分，致使钙离子快速进入红细胞，加速溶血；另外，蛛毒中可能存在的磷脂酶裂解红细胞质膜也是其中原因之一。
3 结果
目前，蛛毒的采集多为诱导法和电击法，由于悦目金蛛个体相对较小，螯肢细短，活体采毒极为困难。本文在对悦目金蛛的生活习性和形态结构进行初步研究的基础上，用改良优化的毒腺解剖匀浆法，成功提取制备了具有稳定性质和生理活性的粗毒5 mg，为毒素的后续纯化和研究奠定了基础。后续实验表明，利用毒腺解剖匀浆法能够获得最大量更高纯度的蛛毒。在实体镜下，用解剖剪剪开螯肢和头胸甲取出毒囊，如用银针刺破毒囊，而不用匀浆法，可进一步避免非毒素蛋白的污染。用去离子水将毒液洗出，2 000 r/min离心15 min取上清液，冷冻干燥，获得的毒素在显微镜下可观察到均匀的结晶体。
通过蛛毒对鸡血红细胞的毒理反应研究，初步确定了蛛毒当中含有凝集素和磷脂酶两种成分。除此之外，还发现在钙离子环境下蛛毒对红细胞的溶血和凝集作用更为剧烈，其原因可能是蛛毒中含有某种物质作用于细胞质膜上的钙离子配体门通道，从而促使钙离子快速进入红细胞导致细胞膨胀溶血，或许蛛毒中的凝集素也是某种类钙粘蛋白，在钙离子激活后能促使红细胞粘连或凝集，降低O2/CO2交换率，造成机体呼吸窘迫甚至死亡。
高血压的医学论文 http://www.qikanba.com/
1 仪器与材料
1.1 仪器
上海精密A1004电子天平，Olympus CX41显微摄像系统，上海新苗DNP-9052BS-Ⅲ电热恒温培养箱和DHG-9073BS-Ⅲ恒温鼓风干燥箱，湖南星科TGL-16B台式高速离心机，江苏昆山KQ-50DB数控超声波清洗器，北京泰克0610-403体式显微镜，日本三丰560-108 NK20游标卡尺，上海光学显微镜测微尺和上海亚荣真空抽气泵与干燥器等。
2.3 悦目金蛛粗毒组分和效价检测
2.3.1 悦目金蛛粗毒组分及结构观察
常温下，提取制备到的悦目金蛛粗毒呈粉状；用光学显微镜观察粗毒，100和400倍下粗毒呈片状或片状均匀晶体，不含其它颗粒杂质。见图1。
2.3.2 悦目金蛛粗毒的凝聚和裂解作用检测
取50 μl制备好的泰和乌鸡血红细胞悬液（悬液细胞密度约为1.04×103 个/mm3）和200 μl PBS缓冲液加入1 ml的PVC离心管中，随后加入50 μl悦目金蛛毒液，振荡，摇匀。竖置于30℃的恒温培养箱中，每隔5 min，用移液枪取20 μl反应液于单凹载玻片上，用显微镜观察，并拍照。经多次重复梯度实验，结果表明悦目金蛛粗毒溶液对泰和乌鸡血红细胞有明显的促凝集和裂解作用，由此可说明粗毒中含有糖蛋白凝集素和磷酯酶成分，且它能介导红细胞粘连和促进细胞裂解。见图2。
2.3.3 悦目金蛛粗毒促离子通道成分的探索
分别在60 μl制备好泰和乌鸡血红细胞悬液（悬液细胞密度约为1.04×103 个/mm3）中加入相应的0.17 mol/L KCl和0.17 mol/L CaCl2溶液，调配至1.5 ml，分成3个对照组，前两份分别加入20 μl悦目金蛛毒液和20 μl大腹园蛛毒液，另外一份加入20 μl PBS缓冲液。设5 min，30 min，60 min，120 min和180 min 5个不同反应时段，分段取液于血球计数板上，用显微镜观察并计数。具体反应结果见图3～4。通过对图的比对分析，可以得知：悦目金蛛毒素和大腹园蛛毒素均有促进红细胞溶血的作用，且大腹园蛛毒素的作用更为明显。而且，毒素对红细胞的裂解作用在钙离子环境下要比钾离子环境下更强。推测其原因可能是两种粗毒中有钙离子配体门通道的激活成分，致使钙离子快速进入红细胞，加速溶血；另外，蛛毒中可能存在的磷脂酶裂解红细胞质膜也是其中原因之一。
3 结果
目前，蛛毒的采集多为诱导法和电击法，由于悦目金蛛个体相对较小，螯肢细短，活体采毒极为困难。本文在对悦目金蛛的生活习性和形态结构进行初步研究的基础上，用改良优化的毒腺解剖匀浆法，成功提取制备了具有稳定性质和生理活性的粗毒5 mg，为毒素的后续纯化和研究奠定了基础。后续实验表明，利用毒腺解剖匀浆法能够获得最大量更高纯度的蛛毒。在实体镜下，用解剖剪剪开螯肢和头胸甲取出毒囊，如用银针刺破毒囊，而不用匀浆法，可进一步避免非毒素蛋白的污染。用去离子水将毒液洗出，2 000 r/min离心15 min取上清液，冷冻干燥，获得的毒素在显微镜下可观察到均匀的结晶体。
通过蛛毒对鸡血红细胞的毒理反应研究，初步确定了蛛毒当中含有凝集素和磷脂酶两种成分。除此之外，还发现在钙离子环境下蛛毒对红细胞的溶血和凝集作用更为剧烈，其原因可能是蛛毒中含有某种物质作用于细胞质膜上的钙离子配体门通道，从而促使钙离子快速进入红细胞导致细胞膨胀溶血，或许蛛毒中的凝集素也是某种类钙粘蛋白，在钙离子激活后能促使红细胞粘连或凝集，降低O2/CO2交换率，造成机体呼吸窘迫甚至死亡。
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