葡萄糖对TBA反应的影响测定实验分析-护理高血压论文范文
护理高血压论文范文 护理学论文发表 高血压护理论文 医学护理论文
1 材料
1.1 动物清洁级昆明种雄性小鼠，18～20 g，由湖北省疾病预防控制中心实验动物研究中心提供。动物饲养室温度为22～25 ℃，湿度为65%～80%。
1.2 试剂丙二醛（MDA）测定试剂盒，购于南京建成工程研究所。其它化学试剂均为分析醇。
1.3 仪器752型紫外光栅分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；飞鸽牌TGL-16C离心机（上海安亭科学仪器厂）；解剖剪。
2 方法
2.1 动物分组及给药清洁级昆明雄性小鼠48只，体质量18～20 g。参照文献［3］的方法，将实验动物按体重随机等数分为4组，即对照组（control group，CG）、多糖高剂量组（high-dose group，HG）、多糖中剂量组（medial-dose group，MG）、多糖低剂量组（low-dose group，LG），每组12只。对照组0.3 ml/d生理盐水灌胃，其余3组以0.3 ml/d不同浓度的灵芝多糖溶液灌胃，多糖高、中、低剂量的服用量分别为200，100，50 mg/（kg·d）。实验期间小鼠自由摄食及饮水，每5天称量1次体重，根据体重调整灌胃量，连续灌胃30 d。
2.2 灵芝多糖的制备实验室固体发酵所得灵芝菌丝体100 g加入7 L蒸馏水，85 ℃水提50 min。过滤所得的上清用旋转蒸发仪浓缩到0.1 L后，加入0.1 L无水乙醇4 ℃过夜沉淀，4 000 r/min离心20 min后取沉淀用适量蒸馏水溶解，冷冻干燥得到的褐色粉末为灵芝粗多糖。
2.3 肝匀浆的制备动物禁食过夜，次日颈椎脱臼处死、开胸、剖开腹腔。用4℃生理盐水清洗肝脏，用滤纸吸干肝表面水分，称肝重，加20倍干重的0.05 mol/L PBS缓冲液在匀浆机内匀浆，即制成5%肝匀浆。所有操作均在冰浴中进行。
2.4 小鼠肝组织糖类物质含量的测定小鼠肝组织糖类物质含量利用苯酚硫酸法［4］进行测定。
2.5 葡萄糖对TBA反应的影响测定
2.5.1 葡萄糖与TBA反应的比色测定
因为肝组织存在较多的糖原，其在一定条件下可降解为葡萄糖，所以本实验以葡萄糖为标准探讨排除糖类物质对MDA-TBA反应干扰的情况。参照MDA测定试剂盒的测定方法，取200 μl 50 mg/ml葡萄糖溶液，加入0.6%TBA（50%冰醋酸溶解配制）3.2 ml，沸水浴80 min后4 000 r/min离心10 min，取上清液经752型紫外光栅分光光度计400～700 nm扫描并记录结果。
2.5.2 MDA测定条件对样品中肝糖原降解情况的影响
取0.5 ml 5%肝匀浆上清液，加入1.5 ml 50%冰醋酸后沸水浴20～80 min，并设置对照组：取0.5 ml 5%肝匀浆上清液，加入1.5 ml蒸馏水。将各组反应液pH调至7.0后，加入2 ml DNS溶液煮沸5min后［5］测定各样品在540 nm处吸收值的变化。
2.5.3 MDA-TBA反应中糖类物质干扰的排除（直线回归法）
取不同浓度（0～50 mg/ml）的葡萄糖溶液，按照丙二醛（MDA）测定试剂盒上的说明，加入0.6%TBA（50%冰醋酸溶解配制）3.2 ml，置沸水于中80 min后4 000 r/min离心5min后，测定上清液在450 nm和532 nm下的吸光度值，分析其中的相关关系［5］。
2.6 两种方法测定
小鼠肝组织MDA含量的比较方法1：步骤同试剂盒说明书所述一致，各组小鼠肝匀浆样品显色后测定450nm、532nm波长下的吸光度值OD450、OD532，根据直线回归方程求出各样品中糖分在532nm处的吸光度值Y532。D532与Y532之差即是MDA-TBA反应产物在532 nm下的吸光度值，用该值进一步计算得到样品中MDA含量。
方法2：以试剂盒上提供的传统方法测定MDA含量。
MDA能使DNA、膜蛋白、酶发生交联反应，使膜通透性增加，导致细胞膜结构、功能和代谢发生改变，对机体造成损害甚至死亡［7，8］。对MDA的准确测定可指导人们对机体的受损程度或耐受程度进行正确的评价，有助于医学、生物学、药理及工农业生产的发展。通过试验发现，葡萄糖与TBA反应产物在532 nm也有吸收，糖的存在干扰了样品中MDA含量的准确测定。通过直线回归法可排除糖类的影响。比较两种方法测定MDA的结果发现，由于糖类的存在，传统测定结果大于实际值，高出了4%～8%。尤其是当样品中糖类物质的含量间存在的差异越大，糖的干扰程度越大，可能导致对机体受损程度的正确评判。肝组织的糖原在酸性及高温条件下快速降解为葡萄糖，而后含量维持不变，这说明糖对MDA含量测定的干扰程度并不随时间的变化而变化，测定值稳定可靠。所以，改进后的方法更为科学、准确，可应用于动物肝组织丙二醛含量的测定。
高血压的护理论文 http://www.qikanba.com/
1 材料
1.1 动物清洁级昆明种雄性小鼠，18～20 g，由湖北省疾病预防控制中心实验动物研究中心提供。动物饲养室温度为22～25 ℃，湿度为65%～80%。
1.2 试剂丙二醛（MDA）测定试剂盒，购于南京建成工程研究所。其它化学试剂均为分析醇。
1.3 仪器752型紫外光栅分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；飞鸽牌TGL-16C离心机（上海安亭科学仪器厂）；解剖剪。
2 方法
2.1 动物分组及给药清洁级昆明雄性小鼠48只，体质量18～20 g。参照文献［3］的方法，将实验动物按体重随机等数分为4组，即对照组（control group，CG）、多糖高剂量组（high-dose group，HG）、多糖中剂量组（medial-dose group，MG）、多糖低剂量组（low-dose group，LG），每组12只。对照组0.3 ml/d生理盐水灌胃，其余3组以0.3 ml/d不同浓度的灵芝多糖溶液灌胃，多糖高、中、低剂量的服用量分别为200，100，50 mg/（kg·d）。实验期间小鼠自由摄食及饮水，每5天称量1次体重，根据体重调整灌胃量，连续灌胃30 d。
2.2 灵芝多糖的制备实验室固体发酵所得灵芝菌丝体100 g加入7 L蒸馏水，85 ℃水提50 min。过滤所得的上清用旋转蒸发仪浓缩到0.1 L后，加入0.1 L无水乙醇4 ℃过夜沉淀，4 000 r/min离心20 min后取沉淀用适量蒸馏水溶解，冷冻干燥得到的褐色粉末为灵芝粗多糖。
2.3 肝匀浆的制备动物禁食过夜，次日颈椎脱臼处死、开胸、剖开腹腔。用4℃生理盐水清洗肝脏，用滤纸吸干肝表面水分，称肝重，加20倍干重的0.05 mol/L PBS缓冲液在匀浆机内匀浆，即制成5%肝匀浆。所有操作均在冰浴中进行。
2.4 小鼠肝组织糖类物质含量的测定小鼠肝组织糖类物质含量利用苯酚硫酸法［4］进行测定。
2.5 葡萄糖对TBA反应的影响测定
2.5.1 葡萄糖与TBA反应的比色测定
因为肝组织存在较多的糖原，其在一定条件下可降解为葡萄糖，所以本实验以葡萄糖为标准探讨排除糖类物质对MDA-TBA反应干扰的情况。参照MDA测定试剂盒的测定方法，取200 μl 50 mg/ml葡萄糖溶液，加入0.6%TBA（50%冰醋酸溶解配制）3.2 ml，沸水浴80 min后4 000 r/min离心10 min，取上清液经752型紫外光栅分光光度计400～700 nm扫描并记录结果。
2.5.2 MDA测定条件对样品中肝糖原降解情况的影响
取0.5 ml 5%肝匀浆上清液，加入1.5 ml 50%冰醋酸后沸水浴20～80 min，并设置对照组：取0.5 ml 5%肝匀浆上清液，加入1.5 ml蒸馏水。将各组反应液pH调至7.0后，加入2 ml DNS溶液煮沸5min后［5］测定各样品在540 nm处吸收值的变化。
2.5.3 MDA-TBA反应中糖类物质干扰的排除（直线回归法）
取不同浓度（0～50 mg/ml）的葡萄糖溶液，按照丙二醛（MDA）测定试剂盒上的说明，加入0.6%TBA（50%冰醋酸溶解配制）3.2 ml，置沸水于中80 min后4 000 r/min离心5min后，测定上清液在450 nm和532 nm下的吸光度值，分析其中的相关关系［5］。
2.6 两种方法测定
小鼠肝组织MDA含量的比较方法1：步骤同试剂盒说明书所述一致，各组小鼠肝匀浆样品显色后测定450nm、532nm波长下的吸光度值OD450、OD532，根据直线回归方程求出各样品中糖分在532nm处的吸光度值Y532。D532与Y532之差即是MDA-TBA反应产物在532 nm下的吸光度值，用该值进一步计算得到样品中MDA含量。
方法2：以试剂盒上提供的传统方法测定MDA含量。
MDA能使DNA、膜蛋白、酶发生交联反应，使膜通透性增加，导致细胞膜结构、功能和代谢发生改变，对机体造成损害甚至死亡［7，8］。对MDA的准确测定可指导人们对机体的受损程度或耐受程度进行正确的评价，有助于医学、生物学、药理及工农业生产的发展。通过试验发现，葡萄糖与TBA反应产物在532 nm也有吸收，糖的存在干扰了样品中MDA含量的准确测定。通过直线回归法可排除糖类的影响。比较两种方法测定MDA的结果发现，由于糖类的存在，传统测定结果大于实际值，高出了4%～8%。尤其是当样品中糖类物质的含量间存在的差异越大，糖的干扰程度越大，可能导致对机体受损程度的正确评判。肝组织的糖原在酸性及高温条件下快速降解为葡萄糖，而后含量维持不变，这说明糖对MDA含量测定的干扰程度并不随时间的变化而变化，测定值稳定可靠。所以，改进后的方法更为科学、准确，可应用于动物肝组织丙二醛含量的测定。
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