川芎内生真菌的分离鉴定实验研究-护理工作论文
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川芎自宋代以来就是着名的川产道地药材，主产于四川都江堰市（灌县）金马河上游以西地区［1］ 。内生真菌指那些其生活史中的某一段时期生活在植物组织内，对植物没有引起明显病害症状的微生物［2］。已有的研究表明，内生真菌在植物自然界中广泛存在，它们同植物的产区具有一定的联系，不同产地的同一种药用植物中内生真菌的种群结构存在较大的区别［3］，由于生长环境的不同表现出药用植物内生真菌具有地域性的特征。
1 材料
1.1 来源2006年和2007年的5～8月份分别在四川彭州敖平、四川都江堰石羊、四川彭州小鱼洞、四川阿坝汶川这4个产地采集健康植株的根茎，原植物经鉴定为川芎Ligusticum chuanxiong Hort.。
1.2 培养基PDA培养基［4］
（马铃薯葡糖糖培养基）＋青链霉素混合液［5］（用于分离）；PDA培养基；促孢培养基（KH2PO4 1g，KNO3 1g，MgSO4.7H2O 0.5 g，KCl 0.5 g，淀粉0.2 g，葡萄糖 0.2 g，蔗糖 0.2 g，琼脂15～20 g，蒸馏水 1 000 ml，pH自然）。
2 方法
2.1 内生真菌的分离
从每个产地样品中挑选新鲜川芎根茎20个，先去掉须根，用自来水洗净川芎根茎表面，用5%的NaClO溶液浸泡5min，然后用自来水反复地漂洗，稍干后切成适宜大小的小块，在无菌的条件下，用75％酒精中浸泡3～5 min，用无菌水冲洗3～4次，无菌滤纸吸干，然后用无菌刀片将表皮削去，分别切成5 mm×5 mm×1 mm的小块，种植于PDA培养基内，置25～28℃恒温箱中培养3～15 d，观察到培养基上从各植物组织块内部向周围长出菌丝并渐渐形成菌落时，采用尖端菌丝挑取法把真菌转移到另一个PDA的试管斜面或者平皿纯化培养，即得内生真菌。
2.2内生真菌的鉴定
采用插片培养法和点植法培养内生真菌，利用光学显微镜对分离获得的川芎内生真菌进行显微形态特征的观察、分类鉴定。分类检索参照文献［6，7］。
本次实验是从四川产区的4个产地川芎中分离得到内生真菌64株，初步鉴定为1纲、3目、4科、17属，显示了川芎内生真菌在种类和数量上的多样性。两年分离的川芎内生真菌种群组成情况表明：川芎内生真菌在目、科、属的水平及其数量分布情况基本一致，其中丛梗孢目（Moniliales）包含菌株最多，占总菌株数的92.2％；在属的分类水平上以头孢霉属（Cephalosporium）、拟小卵孢属（Ovulariopsis）、镰孢属（Fusarium）为优势种群，包含菌株分别占总菌株数的20.3％，20.3％，15.6％，即优势种群菌株数占总量的56.3％；共有的7个属所含菌株数量占分离得到的内生真菌总数的81.3%，表明内生真菌在川芎中广泛分布，内生真菌种群结构是基本稳定的。不同产地川芎内生真菌的特有种群在种类上也较为丰富，体现植物内生真菌的种类和数量与植物所处的生长环境有密切关系。
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川芎自宋代以来就是着名的川产道地药材，主产于四川都江堰市（灌县）金马河上游以西地区［1］ 。内生真菌指那些其生活史中的某一段时期生活在植物组织内，对植物没有引起明显病害症状的微生物［2］。已有的研究表明，内生真菌在植物自然界中广泛存在，它们同植物的产区具有一定的联系，不同产地的同一种药用植物中内生真菌的种群结构存在较大的区别［3］，由于生长环境的不同表现出药用植物内生真菌具有地域性的特征。
1 材料
1.1 来源2006年和2007年的5～8月份分别在四川彭州敖平、四川都江堰石羊、四川彭州小鱼洞、四川阿坝汶川这4个产地采集健康植株的根茎，原植物经鉴定为川芎Ligusticum chuanxiong Hort.。
1.2 培养基PDA培养基［4］
（马铃薯葡糖糖培养基）＋青链霉素混合液［5］（用于分离）；PDA培养基；促孢培养基（KH2PO4 1g，KNO3 1g，MgSO4.7H2O 0.5 g，KCl 0.5 g，淀粉0.2 g，葡萄糖 0.2 g，蔗糖 0.2 g，琼脂15～20 g，蒸馏水 1 000 ml，pH自然）。
2 方法
2.1 内生真菌的分离
从每个产地样品中挑选新鲜川芎根茎20个，先去掉须根，用自来水洗净川芎根茎表面，用5%的NaClO溶液浸泡5min，然后用自来水反复地漂洗，稍干后切成适宜大小的小块，在无菌的条件下，用75％酒精中浸泡3～5 min，用无菌水冲洗3～4次，无菌滤纸吸干，然后用无菌刀片将表皮削去，分别切成5 mm×5 mm×1 mm的小块，种植于PDA培养基内，置25～28℃恒温箱中培养3～15 d，观察到培养基上从各植物组织块内部向周围长出菌丝并渐渐形成菌落时，采用尖端菌丝挑取法把真菌转移到另一个PDA的试管斜面或者平皿纯化培养，即得内生真菌。
2.2内生真菌的鉴定
采用插片培养法和点植法培养内生真菌，利用光学显微镜对分离获得的川芎内生真菌进行显微形态特征的观察、分类鉴定。分类检索参照文献［6，7］。
本次实验是从四川产区的4个产地川芎中分离得到内生真菌64株，初步鉴定为1纲、3目、4科、17属，显示了川芎内生真菌在种类和数量上的多样性。两年分离的川芎内生真菌种群组成情况表明：川芎内生真菌在目、科、属的水平及其数量分布情况基本一致，其中丛梗孢目（Moniliales）包含菌株最多，占总菌株数的92.2％；在属的分类水平上以头孢霉属（Cephalosporium）、拟小卵孢属（Ovulariopsis）、镰孢属（Fusarium）为优势种群，包含菌株分别占总菌株数的20.3％，20.3％，15.6％，即优势种群菌株数占总量的56.3％；共有的7个属所含菌株数量占分离得到的内生真菌总数的81.3%，表明内生真菌在川芎中广泛分布，内生真菌种群结构是基本稳定的。不同产地川芎内生真菌的特有种群在种类上也较为丰富，体现植物内生真菌的种类和数量与植物所处的生长环境有密切关系。
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