丹参酮IIA血管性痴呆小鼠的治疗效果实验研究-手足外科护理论文
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1 材料与仪器
丹参酮IIA（红色结晶粉末， 纯度>98％），购于西安冠宇生物技术有限公司；谷氨酸和γ-氨基丁酸标准品均购自 Sigma 公司（St. Louis, MO, USA）； β-巯基乙醇购自 AMRESCO Inc. （Ohio, USA）； 邻苯二甲醛（O-phthaldialdehyde, OPA） 购自Sigma （St. Louis, MO, USA）； 甲醇（色谱纯）购自Fisher Scientific （USA）； 磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硼酸钠均为国产分析纯，实验前用四蒸水配成所需浓度；MDA, SOD,GSH-Px以及蛋白定量试剂盒（考马斯亮兰法）购自南京建成生物 工程公司（南京，中国）。 VARIAN Prostar高效液相色谱仪；VARIAN 363型荧光检测器；依利特ODS C18反相色谱柱（4.6 mm×250 mm, 5 μm）。 清洁级雄性昆明种小鼠， 体质量18～27 g, 由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。
2 方法
2.1 动物分组和模型制备方法将实验小鼠随机分为4组：①假手术组；②血管性痴呆组；③丹参酮IIA低剂量治疗组；④丹参酮ⅡA高剂量治疗组。
痴呆动物模型的制备：将小鼠适应性饲养 1周后， 参照文献［6］行双侧颈总动脉反复缺血/再灌注合并尾部放血降压方法建立VD小鼠模型。术前 12 h 禁食不禁水。用水合氯醛以350 mg/kg的浓度腹腔注射麻醉后， 将小鼠仰卧固定于手术台上。消毒后沿颈正中切口， 分离双侧颈总动脉 （CCA）， 丝线结扎阻断 CCA, 20 min后再灌注 10 min, 如此反复两次 , 第 1次缺血时在距小鼠尾尖 1 cm处剪断放血约 0.3 ml。术中保持动物肛温在 （37 ± 0.5） ℃。其中假手术组只分离CCA, 套丝扣， 但不阻断血流， 尾部不放血， 观察时间与其他组相同。丹参酮IIA治疗组，术后第2天开始腹腔注射给药，给予丹参酮IIA 4 mg/kg（低剂量组）或8 mg/kg（高剂量组）， 共20 d。
2.2 学习记忆功能测定利用Morris水迷宫对各组动物学习记忆能力进行检测， Morris水迷宫实验系统由中国医学科学院药物研究所研制。基本方法参照文献［7］。各组均于造模30 d后开始进行，每组取7～10只动物进行测试。数据由水迷宫实验软件系统获得， 实验数据以± s表示， 各组数据用SPSS 12.0统计软件处理， 采用重复测量方差分析结合Tukey's 检验， P< 0.05有统计学差异。
2.3 MDA含量，SOD及GPX活性的测定方法操作均按照试剂盒说明书进行。
2.4 高效液相色谱法测定海马组织内氨基酸含量
2.4.1 样本处理将各组小鼠快速断头取出全脑，在冰板上迅速分离出皮层和海马，用冰生理盐水1:9（mg/ml）匀浆，低温离心机4℃ 3 500r/min离心15 min，取上清液50 μl进行蛋白定量；取上清200 μl 加入4 倍体积的冰冷甲醇，充分混匀后，4℃放置2 h，13 400 r/min 离心20 min，取上清待测。
3 结果
丹参酮IIA对逃避潜伏期的影响实验过程中可见小鼠在第1，2轮训练中，各组找到平台时间均较长，从第3轮开始，随着训练次数增加，逃避潜伏期总趋势不断缩短。学习训练结束时，假手术组、血管性痴呆组、丹参酮IIA低剂量组、丹参酮IIA高剂量组逃避潜伏期分别为（3.69 ± 0.48） s，（40.28 ± 8.33 ）s，（14.28 ± 3.27 ）s，（7.18 ± 2.59 ）s。模型组与假手术组比较逃避潜伏期有显着性差异（P<0.05）；丹参酮IIA低剂量组、丹参酮IIA高剂量组明显缩短潜伏期，与模型组比较有显着性差异（P<0.05），但高剂量组与低剂量组之间并无统计学差异（P>0.05）。
丹参酮IIA对血管性痴呆小鼠MDA含量、SOD和GSH-Px的影响与假手术组相比，缺血性脑损伤30 d后，小鼠皮层和海马MDA含量均显着增加（P<0.01），丹参酮ⅡA明显降低缺血性脑损伤后MDA的产生（图3），而且丹参酮IIA作用呈剂量依赖性。
与假手术组相比，缺血性脑损伤30 d后，小鼠皮层和海马GSH-Px活性均显着降低（P<0.05），丹参酮IIA明显增加缺血性脑损伤后GSH-Px的活性（图4）， 而且丹参酮IIA作用呈剂量依赖性。与假手术组相比，缺血性脑损伤30 d后，小鼠皮层和海马SOD活性均显着降低（P<0.05），丹参酮IIA明显增加缺血性脑损伤后SOD的活性（图5）， 而且丹参酮IIA作用呈剂量依赖性。如图7所示，血管性痴呆小鼠海马谷氨酸和γ-氨基丁酸的含量均明显低于假手术组（P<0.05）；而丹参酮IIA组小鼠谷氨酸和γ-氨基丁酸含量与血管性痴呆组比较，均明显增加，具有统计学意义（P<0.05）。
整形美容外科护理论文 http://www.qikanba.com/
1 材料与仪器
丹参酮IIA（红色结晶粉末， 纯度>98％），购于西安冠宇生物技术有限公司；谷氨酸和γ-氨基丁酸标准品均购自 Sigma 公司（St. Louis, MO, USA）； β-巯基乙醇购自 AMRESCO Inc. （Ohio, USA）； 邻苯二甲醛（O-phthaldialdehyde, OPA） 购自Sigma （St. Louis, MO, USA）； 甲醇（色谱纯）购自Fisher Scientific （USA）； 磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硼酸钠均为国产分析纯，实验前用四蒸水配成所需浓度；MDA, SOD,GSH-Px以及蛋白定量试剂盒（考马斯亮兰法）购自南京建成生物 工程公司（南京，中国）。 VARIAN Prostar高效液相色谱仪；VARIAN 363型荧光检测器；依利特ODS C18反相色谱柱（4.6 mm×250 mm, 5 μm）。 清洁级雄性昆明种小鼠， 体质量18～27 g, 由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。
2 方法
2.1 动物分组和模型制备方法将实验小鼠随机分为4组：①假手术组；②血管性痴呆组；③丹参酮IIA低剂量治疗组；④丹参酮ⅡA高剂量治疗组。
痴呆动物模型的制备：将小鼠适应性饲养 1周后， 参照文献［6］行双侧颈总动脉反复缺血/再灌注合并尾部放血降压方法建立VD小鼠模型。术前 12 h 禁食不禁水。用水合氯醛以350 mg/kg的浓度腹腔注射麻醉后， 将小鼠仰卧固定于手术台上。消毒后沿颈正中切口， 分离双侧颈总动脉 （CCA）， 丝线结扎阻断 CCA, 20 min后再灌注 10 min, 如此反复两次 , 第 1次缺血时在距小鼠尾尖 1 cm处剪断放血约 0.3 ml。术中保持动物肛温在 （37 ± 0.5） ℃。其中假手术组只分离CCA, 套丝扣， 但不阻断血流， 尾部不放血， 观察时间与其他组相同。丹参酮IIA治疗组，术后第2天开始腹腔注射给药，给予丹参酮IIA 4 mg/kg（低剂量组）或8 mg/kg（高剂量组）， 共20 d。
2.2 学习记忆功能测定利用Morris水迷宫对各组动物学习记忆能力进行检测， Morris水迷宫实验系统由中国医学科学院药物研究所研制。基本方法参照文献［7］。各组均于造模30 d后开始进行，每组取7～10只动物进行测试。数据由水迷宫实验软件系统获得， 实验数据以± s表示， 各组数据用SPSS 12.0统计软件处理， 采用重复测量方差分析结合Tukey's 检验， P< 0.05有统计学差异。
2.3 MDA含量，SOD及GPX活性的测定方法操作均按照试剂盒说明书进行。
2.4 高效液相色谱法测定海马组织内氨基酸含量
2.4.1 样本处理将各组小鼠快速断头取出全脑，在冰板上迅速分离出皮层和海马，用冰生理盐水1:9（mg/ml）匀浆，低温离心机4℃ 3 500r/min离心15 min，取上清液50 μl进行蛋白定量；取上清200 μl 加入4 倍体积的冰冷甲醇，充分混匀后，4℃放置2 h，13 400 r/min 离心20 min，取上清待测。
3 结果
丹参酮IIA对逃避潜伏期的影响实验过程中可见小鼠在第1，2轮训练中，各组找到平台时间均较长，从第3轮开始，随着训练次数增加，逃避潜伏期总趋势不断缩短。学习训练结束时，假手术组、血管性痴呆组、丹参酮IIA低剂量组、丹参酮IIA高剂量组逃避潜伏期分别为（3.69 ± 0.48） s，（40.28 ± 8.33 ）s，（14.28 ± 3.27 ）s，（7.18 ± 2.59 ）s。模型组与假手术组比较逃避潜伏期有显着性差异（P<0.05）；丹参酮IIA低剂量组、丹参酮IIA高剂量组明显缩短潜伏期，与模型组比较有显着性差异（P<0.05），但高剂量组与低剂量组之间并无统计学差异（P>0.05）。
丹参酮IIA对血管性痴呆小鼠MDA含量、SOD和GSH-Px的影响与假手术组相比，缺血性脑损伤30 d后，小鼠皮层和海马MDA含量均显着增加（P<0.01），丹参酮ⅡA明显降低缺血性脑损伤后MDA的产生（图3），而且丹参酮IIA作用呈剂量依赖性。
与假手术组相比，缺血性脑损伤30 d后，小鼠皮层和海马GSH-Px活性均显着降低（P<0.05），丹参酮IIA明显增加缺血性脑损伤后GSH-Px的活性（图4）， 而且丹参酮IIA作用呈剂量依赖性。与假手术组相比，缺血性脑损伤30 d后，小鼠皮层和海马SOD活性均显着降低（P<0.05），丹参酮IIA明显增加缺血性脑损伤后SOD的活性（图5）， 而且丹参酮IIA作用呈剂量依赖性。如图7所示，血管性痴呆小鼠海马谷氨酸和γ-氨基丁酸的含量均明显低于假手术组（P<0.05）；而丹参酮IIA组小鼠谷氨酸和γ-氨基丁酸含量与血管性痴呆组比较，均明显增加，具有统计学意义（P<0.05）。
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