鹅掌草根茎中皂苷含量的实验研究-护理科研设计论文
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鹅掌草可作药用的有竹节香附A. raddeana、鹅掌草A. flaccida、草玉梅A. rivularis等数种，多以根或根茎入药，具有祛风湿、消肿解毒等功效［1］。现代药理研究表明， 鹅掌草根茎（又名地乌）有抗肿瘤、抗炎、解热镇痛、镇静、抗惊厥等作用，其有效成分为三萜皂苷类 ［2～4］。
皂苷为鹅掌草根茎中含量较高的皂苷成分之一，该皂苷的结构经制备色谱分离纯化，并用紫外光谱、红外光谱、核磁共振波谱、质谱等方法结合文献数据确定其结构，本文笔者研究发现其具有诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用，研究结果另文发表。在了解其活性的基础上，建立anhuienoside E含量测定方法，这对于控制鹅掌草根茎的质量和将鹅掌草根茎中皂苷类成分进一步开发成抗肿瘤新药具有重要的意义。
1 仪器及试药
美国Agilent 1100serious高效液相色谱仪：四元泵、在线脱气机、柱温箱、可变波长紫外检测器；上海科导超声仪器有限公司BD-2型超声波清洗器（功率：450W，频率：59KHz）；赛多利斯公司BP211D型分析天平。所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。对照品由湖北省中药标准化工程技术研究中心提供［制备色谱分离得到，并经UV，IR，NMR，MS和文献对照［4］，检定为anhuienoside E，即3-O-α-L-吡喃鼠李糖 （1→2） -β-D-吡喃葡萄糖-齐墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖 （1→4） -β-D-吡喃葡萄糖 （1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷，经HPLC按峰面积归一化法检查纯度为99.5%］。鹅掌草根茎采集自湖北省五峰县，中国科学院武汉植物园袁晓博士鉴定，凭证标本保存于湖北中医学院中药标本馆（No.20075321）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件C18柱（Waters公司，Xterra RP18 3.5 μm，4.6 mm×150 mm），流动相：甲醇-水（58∶42），流速：1 ml/min，柱温：40℃，检测波长：209 nm。进样量：对照品溶液和供试品溶液各5 μl。理论塔板数以anhuienoside E峰计不低于2 000。结果见图1～2。
2.2 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的皂苷anhuienoside E对照品10.70 mg，置10 ml量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备取鹅掌草根茎粉末0.15 g，精密称定，置10 ml量瓶中，加入60%甲醇8 ml超声提取30 min，放冷，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.22 μm）滤过，即得。
2.4 线性关系考察取对照品溶液2，4，6，8，10 μl分别进样，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，以峰面积A对进样量m（μg）进行回归，标准曲线为：A=148.640 6m-1.375 41，r=0.999 6 ，其线性范围为2.14 ～10.70 μg。
2.5 精密度实验取第1批次本品粉末0.15 g，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，取该供试品溶液，连续进样5次，对峰面积进行考察，峰面积的RSD为1.17%，结果表明其精密度良好。稳定性实验取同一份供试品溶液，分别于0，1，2，4，8 h不同时间间隔点样进样分析，对峰面积进行考察，峰面积的RSD为1.22%，结果表明样品溶液在8 h稳定。
2.6 重复性实验取同一批次鹅掌草根茎粉末5份精密称定，分别按“2.3”项供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下分别测定其色谱图，并计算其皂苷anhuienoside E的含量，结果其平均含量为83.1 mg/g，RSD为1.03%，说明该法重复性较好。加样回收率实验精密称取已知皂苷anhuienoside E含量的鹅掌草根茎粉末6份各0.075 g，分别加入干燥至恒重的对照品适量，其余操作同“2.3”项中的方法，精密吸取5 μl注入高效液相色谱仪，按所设定的HPLC条件进行测定，结果表明平均回收率为100.6%，RSD=1.28% （n=6），说明本方法准确度较好。样品测定取鹅掌草根茎粉末，按“2.3”项下方法制备各供试品溶液。取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，按所设定的HPLC条件进行测定，每个样品重复测定3次，按外标法计算各样品中皂苷anhuienoside E的含量。
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鹅掌草可作药用的有竹节香附A. raddeana、鹅掌草A. flaccida、草玉梅A. rivularis等数种，多以根或根茎入药，具有祛风湿、消肿解毒等功效［1］。现代药理研究表明， 鹅掌草根茎（又名地乌）有抗肿瘤、抗炎、解热镇痛、镇静、抗惊厥等作用，其有效成分为三萜皂苷类 ［2～4］。
皂苷为鹅掌草根茎中含量较高的皂苷成分之一，该皂苷的结构经制备色谱分离纯化，并用紫外光谱、红外光谱、核磁共振波谱、质谱等方法结合文献数据确定其结构，本文笔者研究发现其具有诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用，研究结果另文发表。在了解其活性的基础上，建立anhuienoside E含量测定方法，这对于控制鹅掌草根茎的质量和将鹅掌草根茎中皂苷类成分进一步开发成抗肿瘤新药具有重要的意义。
1 仪器及试药
美国Agilent 1100serious高效液相色谱仪：四元泵、在线脱气机、柱温箱、可变波长紫外检测器；上海科导超声仪器有限公司BD-2型超声波清洗器（功率：450W，频率：59KHz）；赛多利斯公司BP211D型分析天平。所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。对照品由湖北省中药标准化工程技术研究中心提供［制备色谱分离得到，并经UV，IR，NMR，MS和文献对照［4］，检定为anhuienoside E，即3-O-α-L-吡喃鼠李糖 （1→2） -β-D-吡喃葡萄糖-齐墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖 （1→4） -β-D-吡喃葡萄糖 （1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷，经HPLC按峰面积归一化法检查纯度为99.5%］。鹅掌草根茎采集自湖北省五峰县，中国科学院武汉植物园袁晓博士鉴定，凭证标本保存于湖北中医学院中药标本馆（No.20075321）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件C18柱（Waters公司，Xterra RP18 3.5 μm，4.6 mm×150 mm），流动相：甲醇-水（58∶42），流速：1 ml/min，柱温：40℃，检测波长：209 nm。进样量：对照品溶液和供试品溶液各5 μl。理论塔板数以anhuienoside E峰计不低于2 000。结果见图1～2。
2.2 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的皂苷anhuienoside E对照品10.70 mg，置10 ml量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备取鹅掌草根茎粉末0.15 g，精密称定，置10 ml量瓶中，加入60%甲醇8 ml超声提取30 min，放冷，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.22 μm）滤过，即得。
2.4 线性关系考察取对照品溶液2，4，6，8，10 μl分别进样，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，以峰面积A对进样量m（μg）进行回归，标准曲线为：A=148.640 6m-1.375 41，r=0.999 6 ，其线性范围为2.14 ～10.70 μg。
2.5 精密度实验取第1批次本品粉末0.15 g，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，取该供试品溶液，连续进样5次，对峰面积进行考察，峰面积的RSD为1.17%，结果表明其精密度良好。稳定性实验取同一份供试品溶液，分别于0，1，2，4，8 h不同时间间隔点样进样分析，对峰面积进行考察，峰面积的RSD为1.22%，结果表明样品溶液在8 h稳定。
2.6 重复性实验取同一批次鹅掌草根茎粉末5份精密称定，分别按“2.3”项供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下分别测定其色谱图，并计算其皂苷anhuienoside E的含量，结果其平均含量为83.1 mg/g，RSD为1.03%，说明该法重复性较好。加样回收率实验精密称取已知皂苷anhuienoside E含量的鹅掌草根茎粉末6份各0.075 g，分别加入干燥至恒重的对照品适量，其余操作同“2.3”项中的方法，精密吸取5 μl注入高效液相色谱仪，按所设定的HPLC条件进行测定，结果表明平均回收率为100.6%，RSD=1.28% （n=6），说明本方法准确度较好。样品测定取鹅掌草根茎粉末，按“2.3”项下方法制备各供试品溶液。取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，按所设定的HPLC条件进行测定，每个样品重复测定3次，按外标法计算各样品中皂苷anhuienoside E的含量。
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