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中医治疗心肌缺血再灌注损伤的实验效果研究-中医临床本科论文

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1  材料与仪器
  1.1  动物日本大耳白家兔40只,体重(2.5±0.2)kg,购自于河北省实验动物中心。
  1.2  药物加味失笑散由蒲黄6 g,五灵脂6 g,川芎6 g,红花6 g,桃仁9 g,赤芍9 g,郁金9 g,冰片0.05 g组成。药材购自保定市中药材公司,经专家鉴定均为真品。将上述药物按比例组成10剂,水煎煮提取3次,提取液合并,4层纱布过滤,滤液浓缩至适量。冰片用适量乙醇溶解,与浓缩液混合,调整浓度为100%,即1ml相当于1g生药。
  1.3  试剂与仪器SOD,CK,MDA试剂盒,购自南京建成生物工程研究所,Bradford蛋白质定量试剂盒购自TIANGEN BIOTECH(BEIJING ),紫外分光光度计,TU1901(上海棱普仪器仪表有限公司);电热恒温水浴箱,SSW-420-2S(上海博迅实业有限公司);组织匀浆器,PRO200(美国)。
  2  方法
  2.1  实验动物分组与处理实验动物随机分为5组,假手术组和模型组用等同容积的自来水灌胃;加味失笑散低、中、高剂量组分别用1.19,2.38和3.57 g/kg的药物灌胃,1次/d,共7 d,末次灌胃后12 h,造模并检测指标。
  2.2  心肌缺血再灌注损伤模型的制备实验动物用1%的戊巴比妥钠(3.5 ml/kg)耳缘静脉注射麻醉,仰位固定,常规记录肢体Ⅱ导联,分离右侧颈动脉并插管用于取血。沿胸骨左缘剪断2~3肋软骨,用乳突牵开器撑开切口,并保持胸膜完整。剪开心包,用止血钳提起左心耳,用小弯针在冠状动脉左前降支根部穿一0号丝线,放置1 cm长、直径为1 mm的硅胶管并结扎,根据心电图检测S-T段的抬高,作为心肌缺血模型建立的标准。假手术组只穿线不结扎,余操作同造模组。
  观察30 min后,剪断结扎线,开始心肌再灌注,观察60 min。血清中SOD,CK,MDA的检测在缺血前、缺血30 min和再灌注60 min分别从颈总动脉取血1.5 ml,分离血清,按试剂盒说明检测血清中的SOD、CK活性和MDA含量。加味失笑散各剂量组SOD活性均显着高于模型组,且有剂量依赖性,用药组的MDA和CK水平明显低于模型组,结果表明,加味失笑散可通过提高SOD的活性,降低氧自由基的产生,抑制了脂质体的氧化,从而对心肌缺血再灌注损伤起到了保护作用。
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