复方中药对小鼠子宫调节功能的实验分析-神经内科护理学论文
神经内科护理学论文 内科医学论文 神经内科论文 医学护理论文发表
1 材料与仪器
1.1 动物
雌性昆明种小鼠60只，8～12周龄，体质量25 ～30 g，由河南省南阳医专实验动物中心提供。饲养环境安静，温度25～35℃，相对湿度为50％～60％，自由进食、水。
1.2 药品与试剂
六味地黄汤草药药材购于河南省南阳市医药公司，由南阳医学高等专科学校药理教研室按比例组方 ，经煎制、过滤、浓缩为1 g/ml （以生药汁） 六味地黄汤口服液，高压灭菌，O℃冰箱保存备用。D - 半乳糖为上海恒信制药厂产品，批号为20010218。 用灭菌生理盐水配制成50 g/L,0℃冰箱保存备用。乙烯雌酚由上海衡山药业有限公司生产，批号为000201。雌二醇（E2）放射免疫药盒购自天津德普公司；孕醇（P）放射免疫药盒购自中国医学科学院和医学技术中心；β-内啡肽（β-EP）放射免疫药盒购自海军放免技术中心。其他制剂均为国产分析纯。
1.3 仪器和设备
（2/2）VI普通Ⅰ类B型脱水机，孝感宏业TS-12L；日本原装进口（1/2）JVCTK-C921EC显微镜摄像机；日本原装进口OLYMPUSCX31显微镜；德国原装进口mICROMGMBH Hm200切片机；CSˉ摊片机。电子体温计，DT一ITB型；电子天平，JD2000 - 2 ;Y～计数器，GAMMA -C120。
2 方法
2.1 衰老动物模型的建立
采用D-半乳糖亚急性衰老模型建立法。D -半乳糖按每只小鼠经背部皮下注射D - 半乳糖0.3 ml/（kg·d），注射42 d。
2.2 实验分组
将60只小鼠随机分成正常对照组（A）、衰老模型组（B）、六味地黄汤治疗1组（C），六味地黄汤治疗2组（D），乙烯雌酚组（E），每组12只。A组、B组各鼠每天灌胃生理盐水20 g·kg-1，同时B组，C组，D组，E组各鼠每天经背部皮下注射D-半乳糖0.3 ml·kg-1，连续给药42 d。从11天开始，C组，D组分别灌服六味地黄汤（原汁1 g/ml浓度）20 g·kg-1·d-1或40 g·kg-1·d-1，E组乙烯雌酚0.7 mg·kg-1·d-1灌胃，连续给药32 d。
2.3 观察指标及方法
2.3.1 动情周期的测定给药两周，逐只连续观察受试动物外阴部、阴道上皮脱落细胞动情周期变化。用消毒棉签插入小鼠阴道约0.5 cm，轻轻转动后取出，将棉签上的阴道脱落细胞均匀涂于洁净的载玻片上，待涂片自然风干后用碱性美蓝溶液染色5 min，然后用蒸馏水冲洗，自然风干后镜检，观察细胞形态，确定动情周期。每日下午定时阴道涂片、H-E染色，细胞学检查。
2.3.2 P，E2，β-内啡肽检测各组连续灌胃治疗2周后，称量体重并在大鼠动情间期，按放射免疫药盒操作说明测定β-内啡肽及雌、孕激素的含量。每只鼠取血清200 μl，血清量不足的动物将血清合并后检测。成批检测P，E2,β-内啡肽，留样时要求用1%肝素和抑肽酶抗凝，迅速低温4℃离心，取血浆低温－20℃保存待测。生殖器官体质量观察42 d采血后断头法处死动物，摘取子宫、卵巢，剔除脂肪和其他组织，滤纸稍拭后，分别放入电子分析天平精确称出湿重。形态学观察分组编号并浸入10％福尔马林固定、包埋、切片、HE染色、封片，进行组织学观察 。
3 结果
小鼠阴道脱落细胞涂片的影响小鼠性周期一般为5 d。灌胃2周检测，除了E组有不同程度延长（5～6 d）外，其余各组周期均不相同。表现为B组与C组周期紊乱，长短不一。 D组与A组周期基本稳定为4～5 d。在灌胃4周检测，A组周期无明显改变、仍表现为4～5 d；而其余各组均有明显改变，表现为D组周期延长至6～7 d； E组延长至7～8 d；C组基本趋于正常，表现为4～5 d； B组周期仍不规则。结果显示，D,E组与A组角化上皮细胞最高值及表层细胞最高值比较差异显着（P<0.05），C组与A组比较无显着差异（P>0.05）， C,D,E组与B组比较有显着统计学差异（ P<0.05）。考虑是雌激素水平增高的表现，雌激素的作用是上皮增生、细胞成熟。其影响程度一般以角化细胞指数为依据。说明六味地黄汤可以提高雌激素水平，使其角化上皮细胞和表皮细胞增多。病理学变化说明六味地黄汤可使卵巢重量增加，色泽较红，促进卵泡发育，具雌激素样作用；并能增加致衰小鼠子宫中腺体及血管数量，使子宫内膜肌层增厚，纤维结缔组织减少，缓解子宫萎缩，表明六味地黄汤和雌激素均有营养子宫及改善其功能的作用。
中医护理学论文 http://www.qikanba.com/
1 材料与仪器
1.1 动物
雌性昆明种小鼠60只，8～12周龄，体质量25 ～30 g，由河南省南阳医专实验动物中心提供。饲养环境安静，温度25～35℃，相对湿度为50％～60％，自由进食、水。
1.2 药品与试剂
六味地黄汤草药药材购于河南省南阳市医药公司，由南阳医学高等专科学校药理教研室按比例组方 ，经煎制、过滤、浓缩为1 g/ml （以生药汁） 六味地黄汤口服液，高压灭菌，O℃冰箱保存备用。D - 半乳糖为上海恒信制药厂产品，批号为20010218。 用灭菌生理盐水配制成50 g/L,0℃冰箱保存备用。乙烯雌酚由上海衡山药业有限公司生产，批号为000201。雌二醇（E2）放射免疫药盒购自天津德普公司；孕醇（P）放射免疫药盒购自中国医学科学院和医学技术中心；β-内啡肽（β-EP）放射免疫药盒购自海军放免技术中心。其他制剂均为国产分析纯。
1.3 仪器和设备
（2/2）VI普通Ⅰ类B型脱水机，孝感宏业TS-12L；日本原装进口（1/2）JVCTK-C921EC显微镜摄像机；日本原装进口OLYMPUSCX31显微镜；德国原装进口mICROMGMBH Hm200切片机；CSˉ摊片机。电子体温计，DT一ITB型；电子天平，JD2000 - 2 ;Y～计数器，GAMMA -C120。
2 方法
2.1 衰老动物模型的建立
采用D-半乳糖亚急性衰老模型建立法。D -半乳糖按每只小鼠经背部皮下注射D - 半乳糖0.3 ml/（kg·d），注射42 d。
2.2 实验分组
将60只小鼠随机分成正常对照组（A）、衰老模型组（B）、六味地黄汤治疗1组（C），六味地黄汤治疗2组（D），乙烯雌酚组（E），每组12只。A组、B组各鼠每天灌胃生理盐水20 g·kg-1，同时B组，C组，D组，E组各鼠每天经背部皮下注射D-半乳糖0.3 ml·kg-1，连续给药42 d。从11天开始，C组，D组分别灌服六味地黄汤（原汁1 g/ml浓度）20 g·kg-1·d-1或40 g·kg-1·d-1，E组乙烯雌酚0.7 mg·kg-1·d-1灌胃，连续给药32 d。
2.3 观察指标及方法
2.3.1 动情周期的测定给药两周，逐只连续观察受试动物外阴部、阴道上皮脱落细胞动情周期变化。用消毒棉签插入小鼠阴道约0.5 cm，轻轻转动后取出，将棉签上的阴道脱落细胞均匀涂于洁净的载玻片上，待涂片自然风干后用碱性美蓝溶液染色5 min，然后用蒸馏水冲洗，自然风干后镜检，观察细胞形态，确定动情周期。每日下午定时阴道涂片、H-E染色，细胞学检查。
2.3.2 P，E2，β-内啡肽检测各组连续灌胃治疗2周后，称量体重并在大鼠动情间期，按放射免疫药盒操作说明测定β-内啡肽及雌、孕激素的含量。每只鼠取血清200 μl，血清量不足的动物将血清合并后检测。成批检测P，E2,β-内啡肽，留样时要求用1%肝素和抑肽酶抗凝，迅速低温4℃离心，取血浆低温－20℃保存待测。生殖器官体质量观察42 d采血后断头法处死动物，摘取子宫、卵巢，剔除脂肪和其他组织，滤纸稍拭后，分别放入电子分析天平精确称出湿重。形态学观察分组编号并浸入10％福尔马林固定、包埋、切片、HE染色、封片，进行组织学观察 。
3 结果
小鼠阴道脱落细胞涂片的影响小鼠性周期一般为5 d。灌胃2周检测，除了E组有不同程度延长（5～6 d）外，其余各组周期均不相同。表现为B组与C组周期紊乱，长短不一。 D组与A组周期基本稳定为4～5 d。在灌胃4周检测，A组周期无明显改变、仍表现为4～5 d；而其余各组均有明显改变，表现为D组周期延长至6～7 d； E组延长至7～8 d；C组基本趋于正常，表现为4～5 d； B组周期仍不规则。结果显示，D,E组与A组角化上皮细胞最高值及表层细胞最高值比较差异显着（P<0.05），C组与A组比较无显着差异（P>0.05）， C,D,E组与B组比较有显着统计学差异（ P<0.05）。考虑是雌激素水平增高的表现，雌激素的作用是上皮增生、细胞成熟。其影响程度一般以角化细胞指数为依据。说明六味地黄汤可以提高雌激素水平，使其角化上皮细胞和表皮细胞增多。病理学变化说明六味地黄汤可使卵巢重量增加，色泽较红，促进卵泡发育，具雌激素样作用；并能增加致衰小鼠子宫中腺体及血管数量，使子宫内膜肌层增厚，纤维结缔组织减少，缓解子宫萎缩，表明六味地黄汤和雌激素均有营养子宫及改善其功能的作用。
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