千金藤药用植物中总多糖含量的测定实验-消化内科论文

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1 材料与设备
　　地不容和云南地不容药材购自云南永仁药材有限公司，经本实验室王治平鉴定为防己科千金藤属植物地不容Stephania epigeae H .So .Lo和云南地不容Stephania yunnanensis H. S. Lo的新鲜块根，切片干燥后备用；重蒸苯酚（北京鼎国生物技术发展中心），标准葡萄糖，其余试剂均为分析纯，实验用水为单蒸水。电子分析天平（瑞士Sartorius BP221S），核酸蛋白仪（美国Beckman DU600），台式冷冻离心机（德国universal 32R）。
　　2 方法与结果
　　2.1 标准溶液与标准曲线制备
　　2.1.1 标准葡萄糖溶液的配制
　　精密称取干燥至恒重的葡萄糖0.498 8 g，置50 ml量瓶中，加水溶解，定容，作为葡萄糖标准储备液（9.976 g/L）。取储备液1 ml，置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，配成浓度为99.76 mg/L的标准葡萄糖溶液备用。5％苯酚试剂的配制称取重蒸酚5.0 g，置100 ml棕色容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，放冰箱备用。
　　2.1.3 标准曲线制备
　　精密量取99.76 mg/L的标准葡萄糖溶液0，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 ml分别置于具塞试管中，准确补水至2.0 ml，再分别加入5 ％苯酚溶液1.0 ml，在旋转混合器上混匀，小心加入浓硫酸10.0 ml,于旋转混合器上混匀，置沸水浴中煮沸2 min，冷却后在485 nm波长处测定其最大光吸收值，同时以水做空白，以吸光度为纵坐标，糖浓度为横坐标，得标准曲线，经计算回归方程为A＝7.6094 C－0.0224，r＝0.9980（n=7），葡萄糖浓度在4.988～49.88 mg/L范围内与吸光度呈良好的线性关系。
　　2.2 苯酚硫酸法测定总多糖含量
　　2.2.1 样品溶液制备精密称取已经干燥好的药材粉末1 g，置圆底烧瓶中，加50 ml水，加热回流1 h，稍冷即过滤，滤液置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液5 ml，置于80 ml离心管中，加无水乙醇20 ml，混匀5 min后，以3 000 r/min离心5 min，弃去上清液。残渣用水溶解并定容至10 ml，混匀，即得样品测定母液。取母液1 ml，置25 ml量瓶中，加水稀释至刻度，即得样品测定液。
　　2.2.2 样品含量测定精密吸取样品测定液2.0 ml加入具塞试管，照“2.1.3”项下自“加入5 ％苯酚溶液1.0 ml”起，依法测定吸光度，随行空白，计算。结果见表1。
　　2.2.3 回收率精密称取药材粉末0.5 g，共3份，分别精密加入标准葡萄糖溶液2 ml（63.05 g/L），按上述方法测定，计算回收率。地不容总多糖的平均回收率为95.81％，云南地不容总多糖的平均回收率为93.22％。
　　苯酚硫酸法是最常用的测定粗多糖含量的一种方法，其测定值可反映样品中粗多糖的总含量。由于地不容和云南地不容采用的是块根作为药用部分，因此用苯酚硫酸法测定的总多糖含量中存在淀粉等物质的干扰。使用铜试剂沉淀法，可排除淀粉类物质对测定的干扰，将具有葡聚糖结构的多糖沉淀下来，测定药材中葡聚糖的含量。
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