地不容和云南地不容中葡聚糖含量的测定实验研究-消化内科医学论文
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地不容和云南地不容为防己科千金藤属下的两种药用植物。地不容为云南着名的传统中草药，民间常以山乌龟、金不换、地胆、白地胆称之。其味苦、辛，性寒，有小毒，具有清热、解毒、镇静、止痛、理气等功能；民间用于治疗风湿骨痛，胃痛，毒蛇咬伤等。研究表明地不容含有轮环藤宁、千金藤素、箭毒碱和异紫堇定碱［4］等生物碱成分。云南地不容的块根含有颅痛定（rotundine）和青藤碱（sinomenine），前者有镇静作用，后者有肌松作用［5］。
我们采集地不容和云南地不容的块根，用苯酚硫酸法对其总多糖含量进行测定，同时采用铜试剂沉淀法对其具葡聚糖结构的多糖进行了含量测定。为该两种植物多糖的分离纯化及多糖成分的结构、活性研究提供一定依据。
1 材料与设备
地不容和云南地不容药材购自云南永仁药材有限公司，经本实验室王治平鉴定为防己科千金藤属植物地不容Stephania epigeae H .So .Lo和云南地不容Stephania yunnanensis H. S. Lo的新鲜块根，切片干燥后备用；重蒸苯酚（北京鼎国生物技术发展中心），标准葡萄糖，其余试剂均为分析纯，实验用水为单蒸水。电子分析天平（瑞士Sartorius BP221S），核酸蛋白仪（美国Beckman DU600），台式冷冻离心机（德国universal 32R）。
2.3 铜试剂沉淀法测定葡聚糖含量
2.3.1 试剂①氢氧化钠溶液（100 g/L）：称取100 g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1 L，加入无水硫酸钠至饱和，备用。②铜试剂储备液：称取3.0 g CuSO4·5H2O，30.0 g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1 L，混匀，备用。③铜试剂溶液：取铜试剂储备液50 ml，加水50 ml，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5 g并使其溶解。临用新配。④洗涤剂：取水50 ml，加入10 ml铜试剂溶液、10 ml氢氧化钠溶液，混匀。⑤硫酸溶液（10 ％）：取10 ml硫酸加入到80 ml左右的水中，混匀，冷却后稀释至100 ml。
2.3.2 样品溶液制备精密称取已经干燥的药材粉末1 g，置圆底烧瓶中，加50 ml水，加热回流1 h，稍冷即过滤，滤液置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液5 ml，置于80 ml离心管中，加无水乙醇20 ml，混匀5 min后，以3 000 r/min离心5 min，弃去上清液。残渣用水溶解并定容至10 ml，混匀，取该溶液2 ml，置于离心管中，加入100 g/L氢氧化钠溶液2.0 ml，铜试剂2.0 ml，沸水浴中煮沸2 min，冷却，以3000 r/min离心5 min，弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，残渣用10 ％硫酸溶液2.0 ml溶解并转移至10 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，即得样品测定液。
2.3.3 样品含量测定精密吸取样品测定液2.0 ml加入具塞试管，照“2.1.3”项下自“加入5 ％苯酚溶液1.0 ml”起，依法测定吸光度，随行空白，计算。结果见表1。表1 地不容和云南地不容中总多糖和葡聚糖含量测定结果（略）
2.3.4 回收率精密称取药材粉末0.5 g，共3份，分别精密加入标准葡萄糖溶液1 ml（63.05 g/L），按上述方法测定，计算回收率。地不容葡聚糖的平均回收率为90.6 ％，云南地不容葡聚糖的平均回收率为92.74 ％。上述实验结果表明，采用苯酚硫酸法测定两种药材中的总多糖含量以及采用铜试剂沉淀法测定药材中的葡聚糖含量是稳定可行的。
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地不容和云南地不容为防己科千金藤属下的两种药用植物。地不容为云南着名的传统中草药，民间常以山乌龟、金不换、地胆、白地胆称之。其味苦、辛，性寒，有小毒，具有清热、解毒、镇静、止痛、理气等功能；民间用于治疗风湿骨痛，胃痛，毒蛇咬伤等。研究表明地不容含有轮环藤宁、千金藤素、箭毒碱和异紫堇定碱［4］等生物碱成分。云南地不容的块根含有颅痛定（rotundine）和青藤碱（sinomenine），前者有镇静作用，后者有肌松作用［5］。
我们采集地不容和云南地不容的块根，用苯酚硫酸法对其总多糖含量进行测定，同时采用铜试剂沉淀法对其具葡聚糖结构的多糖进行了含量测定。为该两种植物多糖的分离纯化及多糖成分的结构、活性研究提供一定依据。
1 材料与设备
地不容和云南地不容药材购自云南永仁药材有限公司，经本实验室王治平鉴定为防己科千金藤属植物地不容Stephania epigeae H .So .Lo和云南地不容Stephania yunnanensis H. S. Lo的新鲜块根，切片干燥后备用；重蒸苯酚（北京鼎国生物技术发展中心），标准葡萄糖，其余试剂均为分析纯，实验用水为单蒸水。电子分析天平（瑞士Sartorius BP221S），核酸蛋白仪（美国Beckman DU600），台式冷冻离心机（德国universal 32R）。
2.3 铜试剂沉淀法测定葡聚糖含量
2.3.1 试剂①氢氧化钠溶液（100 g/L）：称取100 g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1 L，加入无水硫酸钠至饱和，备用。②铜试剂储备液：称取3.0 g CuSO4·5H2O，30.0 g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1 L，混匀，备用。③铜试剂溶液：取铜试剂储备液50 ml，加水50 ml，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5 g并使其溶解。临用新配。④洗涤剂：取水50 ml，加入10 ml铜试剂溶液、10 ml氢氧化钠溶液，混匀。⑤硫酸溶液（10 ％）：取10 ml硫酸加入到80 ml左右的水中，混匀，冷却后稀释至100 ml。
2.3.2 样品溶液制备精密称取已经干燥的药材粉末1 g，置圆底烧瓶中，加50 ml水，加热回流1 h，稍冷即过滤，滤液置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液5 ml，置于80 ml离心管中，加无水乙醇20 ml，混匀5 min后，以3 000 r/min离心5 min，弃去上清液。残渣用水溶解并定容至10 ml，混匀，取该溶液2 ml，置于离心管中，加入100 g/L氢氧化钠溶液2.0 ml，铜试剂2.0 ml，沸水浴中煮沸2 min，冷却，以3000 r/min离心5 min，弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，残渣用10 ％硫酸溶液2.0 ml溶解并转移至10 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，即得样品测定液。
2.3.3 样品含量测定精密吸取样品测定液2.0 ml加入具塞试管，照“2.1.3”项下自“加入5 ％苯酚溶液1.0 ml”起，依法测定吸光度，随行空白，计算。结果见表1。表1 地不容和云南地不容中总多糖和葡聚糖含量测定结果（略）
2.3.4 回收率精密称取药材粉末0.5 g，共3份，分别精密加入标准葡萄糖溶液1 ml（63.05 g/L），按上述方法测定，计算回收率。地不容葡聚糖的平均回收率为90.6 ％，云南地不容葡聚糖的平均回收率为92.74 ％。上述实验结果表明，采用苯酚硫酸法测定两种药材中的总多糖含量以及采用铜试剂沉淀法测定药材中的葡聚糖含量是稳定可行的。
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