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绒柄牛肝菌的HPLC图谱测试研究-消化内科方面的论文

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  全世界已知的牛肝菌属约有1 024种或变种,我国已知的可食用的就有199种[2]。据文献记载,牛肝菌子实体富含蛋白质、碳水化合物、钙、磷、铁、核黄素等营养成分,含有人体必需的8种氨基酸,还含有腺嘌呤(adenine)、胆碱(choline)和腐胺(putrescine)等生物碱,可治疗腰腿疼痛、手足麻木、四肢抽搐,还可治疗妇女白带症[3] 。牛肝菌子实体的水提物对小鼠肉瘤S180的抑制率达90%,对艾氏腹水癌的抑制率为80%,是中成药“舒筋丸”的原料之一[4]。
  由于大型药用真菌所含化学成分多而复杂,其来源品种、产地、生长过程、采收时间、储藏条件等诸多因素对质量都有一定影响。大型药用真菌质量的传统评价方法已经不能满足质量评价的需要,因此采用现代的科学技术建立大型药用真菌定性定量标准已经非常必要和迫切。
  RP-HPLC法虽然是一种有效的分离分析方法,但由于绒柄牛肝菌成分复杂,性质各异,即使使用梯度洗脱也很难获得理想的分离结果。使用梯度洗脱增加了实验操作和重现性难度,而且难以突出地反映药用真菌与主要药理作用相关的有效成分群,从而在质量控制方面无法有效地做到“纲举目张”。本实验应用反相高效液相色谱技术,建立了以绒柄牛肝菌指纹图谱定性和有效成分定量的分析方法。这种方法是在物质基础上,以绒柄牛肝菌为质控对象,并利用现代仪器分析技术同时进行定性和定量分析,增强了方法的有效性和针对性。实验中采用等度洗脱方式,色谱条件容易控制,可保证分析结果的重复性。
  众多研究表明,同一物种不同个体由于来源和产地不同,其有效成分含量会有很大差异[5~7]。为了确保绒柄牛肝菌药理作用,本研究建立了以绒柄牛肝菌有效部位为基础的HPLC指纹图谱定性分析和有效成分定量分析方法,并通过对11个不同地区的样品分析测定研究,确定了绒柄牛肝菌指纹图谱的共有峰和指标峰以及腺苷的含量范围,为有效准确地定性和定量鉴别不同来源的大型药用真菌提供一种分析方法。
  在色谱条件下,绒柄牛肝菌的HPLC图谱中可以检出11个色谱峰。通过对11份绒柄牛肝菌供试样品的HPLC图谱中主要峰相对保留时间(a)分析,其相对误差(RSD)均小于3%,表明主要色谱峰在HPLC图谱中的相对位置是稳定的,可以作为定性鉴别的指标参数;同时,测定各样本主要峰的总面积(A总),以反映在不同样本中的绝对含量,而各总面积的相对偏差则可以比较在不同样本中的相对含量,舍去相对含量较小的样本,由其余样本确定了绒柄牛肝菌定性鉴别的指标峰有9个,相对保留时间分别为0.108,0.291,0.568,0.667,0.710,1,1.156,1.470,2.180,将其用于对11个样本的定性鉴别。结果表明,虽然11个样本中腺苷在含量上差别很大,但均含有9个指标峰,故认为它们是绒柄牛肝菌。
  本研究选用腺苷作为标准品,据文献资料报道,腺苷在大型真菌中的相对含量较为适中;腺苷为辅酶类药物,它能参与体内能量代谢及蛋白质的合成,具有提高各种酶(特别是辅酶A) 的活性及改善机体代谢作用,因此是生物体生长代谢所必须、普遍存在的物质,以其作为标准品具有可比性。
  在本实验中,我们将11个样本在相同实验条件下,以腺苷为对照品,通过HPLC检测出的腺苷成分含量在0.146%~0.493%之间。表明不同生长环境和贮藏时间对有效成分含量影响很大,绒柄牛肝菌质量须严格控制。在有效成分不完全明确的前提下,制定药用真菌的指纹图谱,对于有效地控制其质量,具有重要意义。
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