天山花楸中有效成分的筛选试验结果分析-内科护理教育研究论文
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天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，是许多中草药的有效成分，具有很高的药用价值。黄酮类化合物具有消除疲劳、保护血管、预防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、活化大脑及其他脏器细胞的功能［3］。药理作用表现为抗炎镇痛、抗病毒，抗辐射、抗癌抗肿瘤［4］，抗氧化、抗衰老、抗心脑血管疾病［5］，免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松等。天山花楸为蔷薇科（Rosaceae）花楸属植物（Sorbus），系新疆维吾尔族和哈萨克族民间用药，常用于治疗肺结核、哮喘、咳嗽、胃痛等症［1］。实验研究表明天山花楸叶具有平喘镇咳祛痰、依赖性地抑制心肌收缩和保护心肌缺血等作用［2］。
传统的黄酮提取方法有浸渍法、索氏法、回流法等，提取时间较长， 并影响提出率。超声提取是目前比较新的技术，超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，都可加速药物有效成分进入溶剂，从而提高了有效成分提出率， 缩短了提取时间，节约了溶剂，并且避免了高温对有效成分的影响［6］，因此把超声技术用于中药有效成分的提取越来越受到重视。
黄酮类化合物的游离黄酮苷元和黄酮苷极性皆较大，因此较易溶于极性较大甲醇和乙醇以及相应的水溶液中，提出率较高；而醋酸乙酯和丙酮极性较小，相对提出率较低。乙醇相对甲醇而言毒性小，且本身具有杀菌作用，提取样品不易发霉变质，所以本实验选取乙醇为提取溶剂。
精密移取芦丁对照品溶液2.0 ml于25 ml量瓶中加60％乙醇至6.0 ml，加5%亚硝酸钠溶液1.0 ml放置6 min，加入8%硝酸铝溶液1.0 ml放置6 min，加入5％氢氧化钠试液10 ml定容，放置15 min后于400～800 nm波长范围进行紫外扫描。结果表明，芦丁显色后在510 nm处有最大吸收峰。
在预实验中参考有关文献的亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定总黄酮含量时，发现短时间内样品吸光度值变化较大，准确度、精密度、重现性及回收率结果均较差。故本实验又重新考察了显色剂加入量、显色温度和显色时间，对比色条件进行了改进，确立了新的测定条件，即“2.1”项中测样品中总黄酮含量的方法。经重复性、回收率等实验分析表明，以此方法测定天山花楸中总黄酮含量，能够取得较为满意的结果。
本实验以芦丁为对照品加入显色剂于400～800 nm波长范围内扫描，其在510 nm具有最大吸收，主要原因是其具有邻二酚羟基可与显色剂显色。但天山花楸叶醇提液中，除含有黄酮类化合物，绿原酸含量也较高［7］。绿原酸也具有邻二酚羟基可与显色剂显色，对天山花楸叶中总黄酮含量测定产生干扰［8］。实验表明以芦丁为对照品，以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH为显色剂，在510 nm测定天山花楸叶醇提液中总黄酮含量的方法专属性不强、有局限性、准确性较差。而HPLC图谱显示，样品中各组分的色谱峰分离度良好，可以避免样品中其它组分干扰目标化合物的分析，专属性较强。且经初步实验验证20～30 min为一系列黄酮类化合物的色谱峰。因此，本实验选择以HPLC图谱20～30 min相对积分峰面积为指标来分析天山花楸叶提取样品。
通过实验，以HPLC图谱中总黄酮相对积分峰面积为指标，确定了天山花楸叶中总黄酮的最佳提取工艺条件，其中料液比为1/8 g·ml-1。但考虑到干燥花楸叶粉末吸水性较大，影响样品流动性，不利于循环超声提取，且由表5可知，料液比对总黄酮的提取无显着性影响，综合分析考虑将料液比确定为1/10 g·ml-1。本课题组药效筛选实验发现天山花楸中有效成分主要为黄酮类化合物。
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天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，是许多中草药的有效成分，具有很高的药用价值。黄酮类化合物具有消除疲劳、保护血管、预防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、活化大脑及其他脏器细胞的功能［3］。药理作用表现为抗炎镇痛、抗病毒，抗辐射、抗癌抗肿瘤［4］，抗氧化、抗衰老、抗心脑血管疾病［5］，免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松等。天山花楸为蔷薇科（Rosaceae）花楸属植物（Sorbus），系新疆维吾尔族和哈萨克族民间用药，常用于治疗肺结核、哮喘、咳嗽、胃痛等症［1］。实验研究表明天山花楸叶具有平喘镇咳祛痰、依赖性地抑制心肌收缩和保护心肌缺血等作用［2］。
传统的黄酮提取方法有浸渍法、索氏法、回流法等，提取时间较长， 并影响提出率。超声提取是目前比较新的技术，超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，都可加速药物有效成分进入溶剂，从而提高了有效成分提出率， 缩短了提取时间，节约了溶剂，并且避免了高温对有效成分的影响［6］，因此把超声技术用于中药有效成分的提取越来越受到重视。
黄酮类化合物的游离黄酮苷元和黄酮苷极性皆较大，因此较易溶于极性较大甲醇和乙醇以及相应的水溶液中，提出率较高；而醋酸乙酯和丙酮极性较小，相对提出率较低。乙醇相对甲醇而言毒性小，且本身具有杀菌作用，提取样品不易发霉变质，所以本实验选取乙醇为提取溶剂。
精密移取芦丁对照品溶液2.0 ml于25 ml量瓶中加60％乙醇至6.0 ml，加5%亚硝酸钠溶液1.0 ml放置6 min，加入8%硝酸铝溶液1.0 ml放置6 min，加入5％氢氧化钠试液10 ml定容，放置15 min后于400～800 nm波长范围进行紫外扫描。结果表明，芦丁显色后在510 nm处有最大吸收峰。
在预实验中参考有关文献的亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定总黄酮含量时，发现短时间内样品吸光度值变化较大，准确度、精密度、重现性及回收率结果均较差。故本实验又重新考察了显色剂加入量、显色温度和显色时间，对比色条件进行了改进，确立了新的测定条件，即“2.1”项中测样品中总黄酮含量的方法。经重复性、回收率等实验分析表明，以此方法测定天山花楸中总黄酮含量，能够取得较为满意的结果。
本实验以芦丁为对照品加入显色剂于400～800 nm波长范围内扫描，其在510 nm具有最大吸收，主要原因是其具有邻二酚羟基可与显色剂显色。但天山花楸叶醇提液中，除含有黄酮类化合物，绿原酸含量也较高［7］。绿原酸也具有邻二酚羟基可与显色剂显色，对天山花楸叶中总黄酮含量测定产生干扰［8］。实验表明以芦丁为对照品，以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH为显色剂，在510 nm测定天山花楸叶醇提液中总黄酮含量的方法专属性不强、有局限性、准确性较差。而HPLC图谱显示，样品中各组分的色谱峰分离度良好，可以避免样品中其它组分干扰目标化合物的分析，专属性较强。且经初步实验验证20～30 min为一系列黄酮类化合物的色谱峰。因此，本实验选择以HPLC图谱20～30 min相对积分峰面积为指标来分析天山花楸叶提取样品。
通过实验，以HPLC图谱中总黄酮相对积分峰面积为指标，确定了天山花楸叶中总黄酮的最佳提取工艺条件，其中料液比为1/8 g·ml-1。但考虑到干燥花楸叶粉末吸水性较大，影响样品流动性，不利于循环超声提取，且由表5可知，料液比对总黄酮的提取无显着性影响，综合分析考虑将料液比确定为1/10 g·ml-1。本课题组药效筛选实验发现天山花楸中有效成分主要为黄酮类化合物。
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