探究香菇多糖的抗瘤效应-骨科相关论文题目
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1 材料
小鼠S180细胞株（Sarcoma180）由中国医学科学院医药研究所购进，本院科研中心传代培养。实验用56天龄昆明小鼠，由赣南医学院实验动物中心提供。注射用香菇多糖生产厂家：南京康海药业有限公司，批号：051107。Olympus显微镜。SPSS14.0统计软件包。
2 方法
2.1 荷瘤S180鼠模型的建立取已接种7 d肿瘤生长良好的S180腹水型小鼠，抽吸乳白色的浓稠腹水以无菌生理盐水稀释后，用血球计数板进行活细胞计数，调整细胞数为1×107，制成肿瘤细胞悬液（活细胞率 95%）。在小鼠右前腋皮下注射0.2 ml S180细胞悬液，制成实体瘤模型。
2.2 动物分组及处理昆明小鼠70只，随机分为7组，雌雄各半，后两组用作生存率实验。第1组为正常盐水对照组，右前腋皮下注射0.2 ml生理盐水，7 d后处死；第2组为肿瘤模型Ⅰ组，第3组为肿瘤模型Ⅱ组，第4组为香菇多糖实验Ⅰ组，第5组为香菇多糖实验Ⅱ组，这4组于接种肿瘤后第2天始分别隔日腹腔注射生理盐水0.2 ml和香菇多糖0.2 ml（每只每次0.025 mg），第2，4组腹腔注射3次，第3，5组腹腔注射7次，均于最后1次给药后第2日处死；第6，7组处理方法分别同第3，5组，但7次腹腔注射后不处死，继续按常规饲养，并每日观察记录一般情况。
2.3 取材小鼠2%戊巴比妥钠全身麻醉，称重后剪开颈部皮肤，注射器穿刺颈内静脉取血，分别置抗凝管中和作二张血涂片；开胸，从左心室灌注生理盐水，至右心房流出清亮液体后改用4%多聚甲醛溶液灌注固定，迅速剥离肿瘤并取脾，电子天平称重后记录。然后按每只小鼠的不同编号分别入4%多聚甲醛溶液中后固定。血涂片自然风干后，甲醇固定，瑞氏染液染色待检。
2.4 检测指标
2.4.1 生存质量和寿命延长率每日观察记录生存实验各组小鼠的一般情况和肿瘤生长情况。寿命延长率=（给药组平均生存时间－模型组平均生存时间）/ 模型组平均生存时间。
2.4.2 脾重及脾指数，肿瘤重、肿瘤指数及抑瘤率计算公式：脾指数（mg/g）= 脾体质量（mg）/小鼠体质量（g）；肿瘤指数（mg/g）= 肿瘤体质量（mg）/小鼠体质量（g）；抑瘤率（%）=（肿瘤模型组肿瘤平均体质量－给药组肿瘤平均体质量）/ 肿瘤模型组肿瘤平均体质量×100%。
2.4.3 脾白髓相对面积及脾单位面积中脾小体的个数所取各组脾脏固定24 h后，按常规脱水透明，低温石蜡包埋。作连续切片，片厚5 μm，隔10片取1片，每例取3片，HE染色，用体视学方法计量脾实质中结构的变化情况。计量方法如下：用物镜校准片校定方网系统中小方格的边长d及面积d2，以目镜测微尺测参照系脾组织面积测点数PS，参照系被测结构脾白髓交点数PW，计数脾小体的个数n。分别按公式AW = PW/PS ×100% 和NS = n÷（PS × d2）计算脾白髓相对面积AW及单位面积中脾小体的个数NS。外周血白细胞计数和分类按常规在Olympus显微镜下用血细胞计数板对抗凝血做白细胞计数；每个样本2张血涂片，每张血涂片观察100个白细胞，根据美国临床实验室标准化委员会推荐的标准区分淋巴细胞、中性幼雉细胞和中性分叶细胞，并做记录。
3 结果
3.1 香菇多糖对各组小鼠生存天数的影响小鼠接种肿瘤细胞4天后开始出现可触及肿瘤。肿瘤模型组小鼠成瘤率100%。小鼠饮食减少，毛发杂乱无光泽，竖毛现象明显，活动也明显减少。香菇多糖给药组小鼠成瘤率90%，肿瘤生长缓慢，且明显比肿瘤模型组小鼠活泼，皮毛有光泽，竖毛现象不明显，生存期明显延长。模型组小鼠50%死于20 d以内，而给药组小鼠只有20%死于20 d以内。到实验结束时（接种肿瘤后120 d），仍有二只小鼠存活，从外观看健康活泼，似无异常。但其中一只在右腹下可触及绿豆大肿块（已维持20多天未见增长）。各组小鼠生存情况见表1和图1。
3.3 香菇多糖对荷瘤鼠脾脏组织结构的影响肿瘤模型组脾白髓相对面积与单位面积脾结构中脾小体个数均比正常对照组下降，但在应用香菇多糖后，有明显回升。香菇多糖实验组小鼠的脾脏指数比正常盐水对照组及肿瘤模型组均有明显上升。以上情况随用药时间延长，改善更为明显。
中医骨科论文 http://www.qikanba.com/
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小鼠S180细胞株（Sarcoma180）由中国医学科学院医药研究所购进，本院科研中心传代培养。实验用56天龄昆明小鼠，由赣南医学院实验动物中心提供。注射用香菇多糖生产厂家：南京康海药业有限公司，批号：051107。Olympus显微镜。SPSS14.0统计软件包。
2 方法
2.1 荷瘤S180鼠模型的建立取已接种7 d肿瘤生长良好的S180腹水型小鼠，抽吸乳白色的浓稠腹水以无菌生理盐水稀释后，用血球计数板进行活细胞计数，调整细胞数为1×107，制成肿瘤细胞悬液（活细胞率 95%）。在小鼠右前腋皮下注射0.2 ml S180细胞悬液，制成实体瘤模型。
2.2 动物分组及处理昆明小鼠70只，随机分为7组，雌雄各半，后两组用作生存率实验。第1组为正常盐水对照组，右前腋皮下注射0.2 ml生理盐水，7 d后处死；第2组为肿瘤模型Ⅰ组，第3组为肿瘤模型Ⅱ组，第4组为香菇多糖实验Ⅰ组，第5组为香菇多糖实验Ⅱ组，这4组于接种肿瘤后第2天始分别隔日腹腔注射生理盐水0.2 ml和香菇多糖0.2 ml（每只每次0.025 mg），第2，4组腹腔注射3次，第3，5组腹腔注射7次，均于最后1次给药后第2日处死；第6，7组处理方法分别同第3，5组，但7次腹腔注射后不处死，继续按常规饲养，并每日观察记录一般情况。
2.3 取材小鼠2%戊巴比妥钠全身麻醉，称重后剪开颈部皮肤，注射器穿刺颈内静脉取血，分别置抗凝管中和作二张血涂片；开胸，从左心室灌注生理盐水，至右心房流出清亮液体后改用4%多聚甲醛溶液灌注固定，迅速剥离肿瘤并取脾，电子天平称重后记录。然后按每只小鼠的不同编号分别入4%多聚甲醛溶液中后固定。血涂片自然风干后，甲醇固定，瑞氏染液染色待检。
2.4 检测指标
2.4.1 生存质量和寿命延长率每日观察记录生存实验各组小鼠的一般情况和肿瘤生长情况。寿命延长率=（给药组平均生存时间－模型组平均生存时间）/ 模型组平均生存时间。
2.4.2 脾重及脾指数，肿瘤重、肿瘤指数及抑瘤率计算公式：脾指数（mg/g）= 脾体质量（mg）/小鼠体质量（g）；肿瘤指数（mg/g）= 肿瘤体质量（mg）/小鼠体质量（g）；抑瘤率（%）=（肿瘤模型组肿瘤平均体质量－给药组肿瘤平均体质量）/ 肿瘤模型组肿瘤平均体质量×100%。
2.4.3 脾白髓相对面积及脾单位面积中脾小体的个数所取各组脾脏固定24 h后，按常规脱水透明，低温石蜡包埋。作连续切片，片厚5 μm，隔10片取1片，每例取3片，HE染色，用体视学方法计量脾实质中结构的变化情况。计量方法如下：用物镜校准片校定方网系统中小方格的边长d及面积d2，以目镜测微尺测参照系脾组织面积测点数PS，参照系被测结构脾白髓交点数PW，计数脾小体的个数n。分别按公式AW = PW/PS ×100% 和NS = n÷（PS × d2）计算脾白髓相对面积AW及单位面积中脾小体的个数NS。外周血白细胞计数和分类按常规在Olympus显微镜下用血细胞计数板对抗凝血做白细胞计数；每个样本2张血涂片，每张血涂片观察100个白细胞，根据美国临床实验室标准化委员会推荐的标准区分淋巴细胞、中性幼雉细胞和中性分叶细胞，并做记录。
3 结果
3.1 香菇多糖对各组小鼠生存天数的影响小鼠接种肿瘤细胞4天后开始出现可触及肿瘤。肿瘤模型组小鼠成瘤率100%。小鼠饮食减少，毛发杂乱无光泽，竖毛现象明显，活动也明显减少。香菇多糖给药组小鼠成瘤率90%，肿瘤生长缓慢，且明显比肿瘤模型组小鼠活泼，皮毛有光泽，竖毛现象不明显，生存期明显延长。模型组小鼠50%死于20 d以内，而给药组小鼠只有20%死于20 d以内。到实验结束时（接种肿瘤后120 d），仍有二只小鼠存活，从外观看健康活泼，似无异常。但其中一只在右腹下可触及绿豆大肿块（已维持20多天未见增长）。各组小鼠生存情况见表1和图1。
3.3 香菇多糖对荷瘤鼠脾脏组织结构的影响肿瘤模型组脾白髓相对面积与单位面积脾结构中脾小体个数均比正常对照组下降，但在应用香菇多糖后，有明显回升。香菇多糖实验组小鼠的脾脏指数比正常盐水对照组及肿瘤模型组均有明显上升。以上情况随用药时间延长，改善更为明显。
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