蒸发光散色检测技术测试黄芪甲苷含量实验研究-有关护理方面的论文
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1 仪器和试药
1.1 仪器
Agilent 1100高效液相色谱系统（美国Agilent 公司），Alltech500型ELSD系统（美国Alltech公司）和WYK-2无烟无油空压器 （天津市蓝珂科技实业公司）。Agilent HC-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）； C18固相萃取柱（美国Bestown公司）；电子天平BS223S（德国Sartorius公司）。
1.2 药品
贞灵固本片（河北医科大学提供，规格：每片0.26g复方提取物，批号：20060511，20060518，20060528）；黄芪甲苷对照品（批号：110781-200210）购自中国药品生物制品检定所。
2 方法与结果
2.1 溶液的配制
2.1.1 对照品溶液精密称取黄芪甲苷对照品2 mg，置10 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓度为200 μg/ml的对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液精密称取贞灵固本片细粉约4 g，置具塞三角瓶中，精密加入60%甲醇25 ml，称重，超声提取，用60%甲醇补足重量，4 000 r/min离心15 min，吸取上清液20 ml，加1%NaOH 1 ml，摇匀，4 000 r/min离心15min，洗涤沉淀，合并上清液上固相萃取小柱（已活化），先用3 ml水洗涤，然后甲醇洗脱，定容至5 ml，过0.45 μm微孔滤膜，作为供试品溶液［5］。阴性对照液除去黄芪药材，按处方量比例取各组分，制成黄芪阴性样品，按供试品溶液配置方法制得阴性对照液。
2.2 色谱条件
色谱柱为Agilent- C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为甲醇－水（74∶26）；蒸发光散射检测器；流速0.8 ml/min；漂移管温度95℃；空气流速3 ml/min；柱温30～40℃。取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液进样测定，色谱图见图1。从图l可见，黄芪甲苷的保留时间约为12 min，且与相邻色谱峰分离效果好（分离度2.45），柱效按黄芪甲苷计不低于5 000。
2.3 线性关系的考察
精密吸取对照品溶液（0.271 6 mg/ml）1，2，5，10，20 μl，进样，测定峰面积，以峰面积 （Y）对进样量（X）分别取对数后，进行线性回归，回归方程为：LnY = 1.702 6 LnX - 4.642 5，表明黄芪甲苷在0.272～5.432 μg范围内呈良好线性关系（r＝0.999 9）。
2.4 精密度实验
吸取对照品溶液及供试品溶液，各进样6次，5 μl/次，测定峰面积，检测结果对照品的RSD值为0.67%（n=6），样品的RSD值为0.81%（n=6），表明仪器的精密度良好。稳定性实验取对照品溶液及供试品溶液，在0，2，4，8，12，24 h内每隔一定时间进样，5 μl/次，记录峰面积，RSD值分别为1.47%（n=6）和1.21%（n=6）。检测结果表明在24 h内，对照品和样品的峰面积稳定。重复性实验同一批贞灵固本片，分别取样品6份，每份3 g，精密称定，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.8”项下方法测定计算含量。黄芪甲苷的平均含量为0.729 8 mg/g，RSD为1.92% （n=6），表明方法的精密度良好。
2.5 加样回收实验精密称取已知黄芪甲苷含量的3批样品细粉，各3份，分别精密加入对照品溶液0.8，1.0，1.2 ml。按“2.1.2”项下方法制备回收率实验用供试品溶液。测定含量，计算回收率为98.82%，RSD为1.57%。本实验采用蒸发光散色检测技术对样品中所含的黄芪甲苷进行了分析。因为黄芪甲苷在紫外吸收在末端吸收位置［7］ ，所设计的实验方法避免了紫外末端吸收波长造成的基线漂移等因素，提高了检测的灵敏度。我们对比了超声、冷浸、热回流等提取方法及提取时间对样品的提取率的影响，结果表明超声处理30 min效果最佳。实验表明，黄芪甲苷样品经固相萃取处理，HPLC分析结果具有较好的准确性和重复性，SPE-HPLC可作为黄芪或其它黄芪制剂中黄芪甲苷的含量分析方法。
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1 仪器和试药
1.1 仪器
Agilent 1100高效液相色谱系统（美国Agilent 公司），Alltech500型ELSD系统（美国Alltech公司）和WYK-2无烟无油空压器 （天津市蓝珂科技实业公司）。Agilent HC-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）； C18固相萃取柱（美国Bestown公司）；电子天平BS223S（德国Sartorius公司）。
1.2 药品
贞灵固本片（河北医科大学提供，规格：每片0.26g复方提取物，批号：20060511，20060518，20060528）；黄芪甲苷对照品（批号：110781-200210）购自中国药品生物制品检定所。
2 方法与结果
2.1 溶液的配制
2.1.1 对照品溶液精密称取黄芪甲苷对照品2 mg，置10 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓度为200 μg/ml的对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液精密称取贞灵固本片细粉约4 g，置具塞三角瓶中，精密加入60%甲醇25 ml，称重，超声提取，用60%甲醇补足重量，4 000 r/min离心15 min，吸取上清液20 ml，加1%NaOH 1 ml，摇匀，4 000 r/min离心15min，洗涤沉淀，合并上清液上固相萃取小柱（已活化），先用3 ml水洗涤，然后甲醇洗脱，定容至5 ml，过0.45 μm微孔滤膜，作为供试品溶液［5］。阴性对照液除去黄芪药材，按处方量比例取各组分，制成黄芪阴性样品，按供试品溶液配置方法制得阴性对照液。
2.2 色谱条件
色谱柱为Agilent- C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为甲醇－水（74∶26）；蒸发光散射检测器；流速0.8 ml/min；漂移管温度95℃；空气流速3 ml/min；柱温30～40℃。取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液进样测定，色谱图见图1。从图l可见，黄芪甲苷的保留时间约为12 min，且与相邻色谱峰分离效果好（分离度2.45），柱效按黄芪甲苷计不低于5 000。
2.3 线性关系的考察
精密吸取对照品溶液（0.271 6 mg/ml）1，2，5，10，20 μl，进样，测定峰面积，以峰面积 （Y）对进样量（X）分别取对数后，进行线性回归，回归方程为：LnY = 1.702 6 LnX - 4.642 5，表明黄芪甲苷在0.272～5.432 μg范围内呈良好线性关系（r＝0.999 9）。
2.4 精密度实验
吸取对照品溶液及供试品溶液，各进样6次，5 μl/次，测定峰面积，检测结果对照品的RSD值为0.67%（n=6），样品的RSD值为0.81%（n=6），表明仪器的精密度良好。稳定性实验取对照品溶液及供试品溶液，在0，2，4，8，12，24 h内每隔一定时间进样，5 μl/次，记录峰面积，RSD值分别为1.47%（n=6）和1.21%（n=6）。检测结果表明在24 h内，对照品和样品的峰面积稳定。重复性实验同一批贞灵固本片，分别取样品6份，每份3 g，精密称定，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.8”项下方法测定计算含量。黄芪甲苷的平均含量为0.729 8 mg/g，RSD为1.92% （n=6），表明方法的精密度良好。
2.5 加样回收实验精密称取已知黄芪甲苷含量的3批样品细粉，各3份，分别精密加入对照品溶液0.8，1.0，1.2 ml。按“2.1.2”项下方法制备回收率实验用供试品溶液。测定含量，计算回收率为98.82%，RSD为1.57%。本实验采用蒸发光散色检测技术对样品中所含的黄芪甲苷进行了分析。因为黄芪甲苷在紫外吸收在末端吸收位置［7］ ，所设计的实验方法避免了紫外末端吸收波长造成的基线漂移等因素，提高了检测的灵敏度。我们对比了超声、冷浸、热回流等提取方法及提取时间对样品的提取率的影响，结果表明超声处理30 min效果最佳。实验表明，黄芪甲苷样品经固相萃取处理，HPLC分析结果具有较好的准确性和重复性，SPE-HPLC可作为黄芪或其它黄芪制剂中黄芪甲苷的含量分析方法。
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