八爪金龙不提取物的抗菌性试验研究-五官科护理论文范文
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1 仪器与材料
高效液相色谱仪（Agilent 1100高效液相色谱仪、二极管阵列检测器、原装色谱工作站）；色谱柱：DiamonsilTM（钻石）C18 （250 mm×4.6 mm, 5 μm）；PHS2-3C型精密pH计（上海雷磁仪器厂）；AUW220D电子分析天平（岛津）；RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣）；ES-315 TOMY高压蒸气灭菌锅（基因公司）；BCN-1360B生物洁净工作台（广东半球仪器厂）；GNP-9000系列生化培养箱（嘉兴中新医疗仪器公司）。
八爪金龙样品于2006-12采集于贵阳市乌当区，经贵阳学院生物教研室高蓬明副教授鉴定为紫金牛科朱砂根Ardisia crenata Sims植物，规范炮制。岩白菜素标准品（中国药品生物制品检定所，批号为：111532-2002-02）；甲醇（美国TEDIA公司，色谱纯）；水为娃哈哈纯净水；大肠杆菌（Escherichia coli.）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococus aureus）由贵州大学生命科学院提供。抑菌活性实验中所使用培养基为牛肉膏蛋白胨培养基。其余试剂均为分析纯。
2.2 八爪金龙不同工艺提取物的制备
2.2.1 水提（Water Extraction method, WE）法产物的制备称取八爪金龙粗粉30 g两份，进行平行实验，加入其质量8，8，6倍水，依次加热回流3次，2 h/次。提取液用6层纱布过滤，滤液经离心处理（2 000 r·min-1，20 min），合并滤液并经旋转蒸发仪蒸发浓缩，再放入真空干燥箱（60℃）内制成干浸膏，称重，置于干燥器皿内备用，按“2.1.1”项法计算干浸膏得率及测定提取物中岩白菜素含量。
2.2.2 醇提法（Alcohol Extraction method,AE）产物的制备依次使用8，8，6倍乙醇对30 g八爪金龙粗粉回流浸提，2 h/次，其余处理同上。
2.3.4 抑菌活性研究（杯碟法）
供试样品的制备：取3种工艺提取物分别稀释成一定浓度梯度的水溶液（见表3），备用。培养基与菌种液的制备：培养基：蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，琼脂粉15 g，NaC1 5 g，葡萄糖5 g，蒸馏水1 000 ml，pH 7.2。菌种液：将菌种进行斜面活化3次后，于培养基斜面37℃培养24 h。用接种环挑取具有代表性菌体于肉汤培养基中混匀、37 ℃培养24 h，取出作为原菌液。再用无菌生理盐水稀释，振荡几分种，调整菌浓度约为105 ～106 cfu/ml。抑菌圈的测定：采用杯碟法比较八爪金龙不同工艺提取物的抑菌活性。取牛津杯（ID = 0.6 cm），高压灭菌，37 ℃培养24 h。蒸馏水为空白对照，每样品重复两次，测量抑菌圈直径，取平均值。
3 结果
对3种工艺的岩白菜素含量、HPLC总面积及干浸膏得率进行标准化处理并对综合评价指标进行比较 （表4）， AE法所得产物各项指标最优，而SBE法的综合评判指标较WE法更为接近AE法。八爪金龙提取物对金色葡萄球菌具有明显抑菌活性，大肠杆菌次之（表3），3种工艺提取物对以上两种菌的抑菌活性顺序为：AE>SBE>WE。而SBE、WE法提取物对枯草芽孢杆菌略高于AE法，结合HPLC谱图（图2～4），推测为不同溶剂对有效成分的浸出选择性差异所致。
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1 仪器与材料
高效液相色谱仪（Agilent 1100高效液相色谱仪、二极管阵列检测器、原装色谱工作站）；色谱柱：DiamonsilTM（钻石）C18 （250 mm×4.6 mm, 5 μm）；PHS2-3C型精密pH计（上海雷磁仪器厂）；AUW220D电子分析天平（岛津）；RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣）；ES-315 TOMY高压蒸气灭菌锅（基因公司）；BCN-1360B生物洁净工作台（广东半球仪器厂）；GNP-9000系列生化培养箱（嘉兴中新医疗仪器公司）。
八爪金龙样品于2006-12采集于贵阳市乌当区，经贵阳学院生物教研室高蓬明副教授鉴定为紫金牛科朱砂根Ardisia crenata Sims植物，规范炮制。岩白菜素标准品（中国药品生物制品检定所，批号为：111532-2002-02）；甲醇（美国TEDIA公司，色谱纯）；水为娃哈哈纯净水；大肠杆菌（Escherichia coli.）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococus aureus）由贵州大学生命科学院提供。抑菌活性实验中所使用培养基为牛肉膏蛋白胨培养基。其余试剂均为分析纯。
2.2 八爪金龙不同工艺提取物的制备
2.2.1 水提（Water Extraction method, WE）法产物的制备称取八爪金龙粗粉30 g两份，进行平行实验，加入其质量8，8，6倍水，依次加热回流3次，2 h/次。提取液用6层纱布过滤，滤液经离心处理（2 000 r·min-1，20 min），合并滤液并经旋转蒸发仪蒸发浓缩，再放入真空干燥箱（60℃）内制成干浸膏，称重，置于干燥器皿内备用，按“2.1.1”项法计算干浸膏得率及测定提取物中岩白菜素含量。
2.2.2 醇提法（Alcohol Extraction method,AE）产物的制备依次使用8，8，6倍乙醇对30 g八爪金龙粗粉回流浸提，2 h/次，其余处理同上。
2.3.4 抑菌活性研究（杯碟法）
供试样品的制备：取3种工艺提取物分别稀释成一定浓度梯度的水溶液（见表3），备用。培养基与菌种液的制备：培养基：蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，琼脂粉15 g，NaC1 5 g，葡萄糖5 g，蒸馏水1 000 ml，pH 7.2。菌种液：将菌种进行斜面活化3次后，于培养基斜面37℃培养24 h。用接种环挑取具有代表性菌体于肉汤培养基中混匀、37 ℃培养24 h，取出作为原菌液。再用无菌生理盐水稀释，振荡几分种，调整菌浓度约为105 ～106 cfu/ml。抑菌圈的测定：采用杯碟法比较八爪金龙不同工艺提取物的抑菌活性。取牛津杯（ID = 0.6 cm），高压灭菌，37 ℃培养24 h。蒸馏水为空白对照，每样品重复两次，测量抑菌圈直径，取平均值。
3 结果
对3种工艺的岩白菜素含量、HPLC总面积及干浸膏得率进行标准化处理并对综合评价指标进行比较 （表4）， AE法所得产物各项指标最优，而SBE法的综合评判指标较WE法更为接近AE法。八爪金龙提取物对金色葡萄球菌具有明显抑菌活性，大肠杆菌次之（表3），3种工艺提取物对以上两种菌的抑菌活性顺序为：AE>SBE>WE。而SBE、WE法提取物对枯草芽孢杆菌略高于AE法，结合HPLC谱图（图2～4），推测为不同溶剂对有效成分的浸出选择性差异所致。
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