DNA分子标记技术的发展与未来-护理管理论文
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此类技术的代表是限制性片断长度多态性 （RFLP）。RFLP是最早发展的分子标记，是由Bostein首先提出，Soller和Beckman最先应用于品种鉴别和品系纯度的测定，这是最早发展的分子标记技术。其基本原理是利用限制性内切酶酶切不同个体基因组DNA后，与同位素或非同位素探针标记杂交，从而显示与探针含同源顺序的酶切片段在长度上的差异。RFLP探针的来源主要是RG克隆和cDNA克隆，其中cDNA探针保守性较强，许多同科物种cDNA探针都可以作为通用探针。在实际应用过程中，人们普遍感到经典的RFLP技术须经酶切、电泳、Southern转移、与探针杂交、放射自显影等步骤， 在实际应用中很不方便，费时费力，并受到探针来源的限制，多态性检出效率低（只能检测探针长度内切酶识别位点上的变异）。同时要求的DNA量较大，实验材料必须新鲜， 因此难以适用于干燥药材的鉴定，目前在中药鉴定领域已很少使用，已归为被淘汰的技术。
中药材品质鉴定是中药质量控制的首要环节，多年来人们一直在寻找科学有效的鉴定中药材的方法，从应用的现状不难看出DNA分子标记技术在该领域的应用已经取得了一些成绩。DNA分子标记技术作为中药材品质鉴定方法之一具有以下几点优势：微量、快速、特异性强、准确可靠，且不受药材生长发育阶段、供试部位、环境条件、产地、采收季节、贮藏等因素的影响，对样本要求较低，无论是药材还是成药、甚至是粉末都可以用来鉴别；归纳起来DNA分子标记技术已应用于几个方面：①用于中药真伪、近缘药材及代用品鉴别，使用的方法主要有RFLP，RAPD，AP-PCR，ITS等标记；②药材的野生类型与栽培品种的研究，使用的方法主要有RAPD，AFLP；③粉末、中成药鉴别，使用的方法主要有RAPD，RT-PCR；④本草考证与出土中药研究，使用的方法主要是测序技术；⑤道地药材研究，使用的方法主要有RAPD，RFLP ，AFLP标记和ITS与rRNA基因序列分析技术。
在多源性中药材如伞形科北沙参、柴胡，菊科苍术属豆科甘草属，羽扇豆属（Lupinus sp.），Yamazaki M,茄科澳茄属（Duborsia s ） Mizukami H,3种苍术Mizukami H的基原鉴定、资源分析及其地理品系（居群）间亲缘关系研究方面有了一些报道。
从分子标记技术的发展来看，前后也就二十多年的时间，它也是随着分子生物学技术及信息技术的发展而发展的，不可否认的是分子标记技术肯定是本世纪的主流技术。除了以上分子标记技术外，现在还发展有单核苷酸多态性标记技术（SNP）、相关序列扩增多态性标记技术（SRAP）、靶位区域扩增多态性标记技术（TRAP）、荧光原位杂交技术（FISH）、变性梯度凝胶电泳技术（DGGE）等［50］，这些技术已被用于其它一些领域的研究之中，因此，作为方法学的研究，在中药鉴定领域还应该加大人力物力的投入，选择和发展出更适合中药鉴定或针对不同鉴定对象的鉴定方法，最终推动分子生物学技术对更多的中药品种或剂型进行鉴定。同时我们也看到，仅仅依靠分子标记技术在相当长的时期内还不可能解决中药材和中药制剂的鉴定和质量控制，那么我们就还必须要同时选择多种方法进行协同分析，比如分子标记技术与细胞学标记技术、生化标记技术、高效液相及核磁共振分析等技术的协同使用，通过多种技术的结合来达到最终准确鉴定中药材或中药复方制剂的目的。
文献报道的研究人员主要集中在中国、日本，但已显示了强劲的发展势头。另一方面，DNA分子标记技术在中药材鉴定中的应用也存在着明显的不足。主要表现在几个方面：
①作为鉴别药材的方法学的研究，投入的人力物力都还很有限，与中药其他方面研究的结合还未开展，所以从方法学上来讲，中药材的分子鉴定方法还需要发展才是。
②使用还很局限，由于分子标记技术对实验室硬件和从业人员的技术要求很高，再加上成本也较高，所以真正用于中药材鉴别的方法还很少，已涉及的中药品种也很有限，从文中可看出，仅RAPD、ISSR以及测序技术使用较多，涉及的中药品种也只有几十种；正因为技术复杂度的制约，此类鉴别技术对于生产收购第一线的人员仍然显得复杂，还无法推广使用。
③数据分析所使用的软件还很局限，测序后对数据进行分析，这是判断药物近缘关系的关键步骤，数据分析必须借助多种软件及适当的方法，以往多采用的Nei（1972）方法现已显单一了，目前用于其他生物技术的分析软件早已多元化了，且很多新的软件主要应用于中药材的遗传多样性分析当中。
④DNA分子标记技术对不同部位入药的药材仍然难以区分，各部具有同样DNA标记式样。对于成药、复方、提取液的DNA标记还未见报道。
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此类技术的代表是限制性片断长度多态性 （RFLP）。RFLP是最早发展的分子标记，是由Bostein首先提出，Soller和Beckman最先应用于品种鉴别和品系纯度的测定，这是最早发展的分子标记技术。其基本原理是利用限制性内切酶酶切不同个体基因组DNA后，与同位素或非同位素探针标记杂交，从而显示与探针含同源顺序的酶切片段在长度上的差异。RFLP探针的来源主要是RG克隆和cDNA克隆，其中cDNA探针保守性较强，许多同科物种cDNA探针都可以作为通用探针。在实际应用过程中，人们普遍感到经典的RFLP技术须经酶切、电泳、Southern转移、与探针杂交、放射自显影等步骤， 在实际应用中很不方便，费时费力，并受到探针来源的限制，多态性检出效率低（只能检测探针长度内切酶识别位点上的变异）。同时要求的DNA量较大，实验材料必须新鲜， 因此难以适用于干燥药材的鉴定，目前在中药鉴定领域已很少使用，已归为被淘汰的技术。
中药材品质鉴定是中药质量控制的首要环节，多年来人们一直在寻找科学有效的鉴定中药材的方法，从应用的现状不难看出DNA分子标记技术在该领域的应用已经取得了一些成绩。DNA分子标记技术作为中药材品质鉴定方法之一具有以下几点优势：微量、快速、特异性强、准确可靠，且不受药材生长发育阶段、供试部位、环境条件、产地、采收季节、贮藏等因素的影响，对样本要求较低，无论是药材还是成药、甚至是粉末都可以用来鉴别；归纳起来DNA分子标记技术已应用于几个方面：①用于中药真伪、近缘药材及代用品鉴别，使用的方法主要有RFLP，RAPD，AP-PCR，ITS等标记；②药材的野生类型与栽培品种的研究，使用的方法主要有RAPD，AFLP；③粉末、中成药鉴别，使用的方法主要有RAPD，RT-PCR；④本草考证与出土中药研究，使用的方法主要是测序技术；⑤道地药材研究，使用的方法主要有RAPD，RFLP ，AFLP标记和ITS与rRNA基因序列分析技术。
在多源性中药材如伞形科北沙参、柴胡，菊科苍术属豆科甘草属，羽扇豆属（Lupinus sp.），Yamazaki M,茄科澳茄属（Duborsia s ） Mizukami H,3种苍术Mizukami H的基原鉴定、资源分析及其地理品系（居群）间亲缘关系研究方面有了一些报道。
从分子标记技术的发展来看，前后也就二十多年的时间，它也是随着分子生物学技术及信息技术的发展而发展的，不可否认的是分子标记技术肯定是本世纪的主流技术。除了以上分子标记技术外，现在还发展有单核苷酸多态性标记技术（SNP）、相关序列扩增多态性标记技术（SRAP）、靶位区域扩增多态性标记技术（TRAP）、荧光原位杂交技术（FISH）、变性梯度凝胶电泳技术（DGGE）等［50］，这些技术已被用于其它一些领域的研究之中，因此，作为方法学的研究，在中药鉴定领域还应该加大人力物力的投入，选择和发展出更适合中药鉴定或针对不同鉴定对象的鉴定方法，最终推动分子生物学技术对更多的中药品种或剂型进行鉴定。同时我们也看到，仅仅依靠分子标记技术在相当长的时期内还不可能解决中药材和中药制剂的鉴定和质量控制，那么我们就还必须要同时选择多种方法进行协同分析，比如分子标记技术与细胞学标记技术、生化标记技术、高效液相及核磁共振分析等技术的协同使用，通过多种技术的结合来达到最终准确鉴定中药材或中药复方制剂的目的。
文献报道的研究人员主要集中在中国、日本，但已显示了强劲的发展势头。另一方面，DNA分子标记技术在中药材鉴定中的应用也存在着明显的不足。主要表现在几个方面：
①作为鉴别药材的方法学的研究，投入的人力物力都还很有限，与中药其他方面研究的结合还未开展，所以从方法学上来讲，中药材的分子鉴定方法还需要发展才是。
②使用还很局限，由于分子标记技术对实验室硬件和从业人员的技术要求很高，再加上成本也较高，所以真正用于中药材鉴别的方法还很少，已涉及的中药品种也很有限，从文中可看出，仅RAPD、ISSR以及测序技术使用较多，涉及的中药品种也只有几十种；正因为技术复杂度的制约，此类鉴别技术对于生产收购第一线的人员仍然显得复杂，还无法推广使用。
③数据分析所使用的软件还很局限，测序后对数据进行分析，这是判断药物近缘关系的关键步骤，数据分析必须借助多种软件及适当的方法，以往多采用的Nei（1972）方法现已显单一了，目前用于其他生物技术的分析软件早已多元化了，且很多新的软件主要应用于中药材的遗传多样性分析当中。
④DNA分子标记技术对不同部位入药的药材仍然难以区分，各部具有同样DNA标记式样。对于成药、复方、提取液的DNA标记还未见报道。
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