白首乌多糖的提取分离试验研究-开展优质护理服务论文
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1 器材
1.1 药品与试剂
白首乌购自江苏滨海，经湖南省药检所方石林教授鉴定为萝摩科植物耳叶牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight，实验用酒精（AR），谷草转氨酶（ALT）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。谷丙转氨酶酶（AST）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。氯仿、丙酮、乙醚、正丁醇均为分析纯。护肝片为北京亚东生物制药有限公司生产。
1.2 仪器与设备
电热恒温干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）202－3AB型；电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）DK－98-1A；真空旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）RE 52－99；抽滤机（郑州长城科工贸有限公司）SHB－B95型；离心沉淀机（上海医用分析仪器厂）LXT－II；分析天平（湘仪天平仪器厂）TG328B。
1.3 实验动物ICR小鼠（长沙市开福区实验动物科技服务部提供，动物合格证号：湘000468）。
2 方法
2.1 多糖的提取分离
2.1.1 预处理脱脂
取60 g白首乌Cynanchum auriculatum Royle ex Wight粉末，加180 ml乙醇（85%），加热回流1 h，过滤，滤渣于恒温箱中80℃干燥过夜［2］，得淡黄色滤渣52.5 g。
2.1.2 初多糖的提取浸提
将黄色滤渣52.5 g均分于两个1 000 ml圆底烧瓶中，A瓶为26.2 g，B瓶为26.3 g。A、B瓶各加520 ml水，在恒温水浴中回流1 h，过滤，滤渣在相同条件下重复浸提1次，合并滤液。
离心：将两次浸液离心机离心10 min（2 500 r/min），合并滤液。
减压浓缩：将合并滤液在真空旋转蒸发器中浓缩至75 ml。
真空干燥：在浓缩后的多糖溶液中加入3倍量95％乙醇（AR）225 ml，抽滤，真空干燥后得淡黄色粗多糖。
2.2 粗多糖的纯化
2.2.1 脱蛋白
粗多糖加蒸馏水200 ml复溶后经过Sevag试剂（氯仿20 ml，正丁醇4 ml）除蛋白，连续操作4次，得150 ml多糖溶液。
2.2.2 醇沉
在脱蛋白后的多糖溶液中加入3倍95％乙醇，沉淀用乙醇洗涤3次，经抽滤、真空干燥后得到浅灰色粉末状结晶。
2.2.3 纯化
将灰白色结晶用乙醇、丙酮及乙醚反复洗涤，抽滤、真空干燥后得到浅灰色粉末状结晶。
2.3 多糖的验证
2.3.1 多糖检测反应
取多糖粉末少许用蒸馏水溶解，取1 ml于试管中，再加10% α-萘酚的乙醇溶液3滴，均匀混合，沿管壁加浓硫酸1 ml，使集于下层，在两层交界面有棕色环出现，证明此为多糖。
2.3.2 水解
取上述粉末20 mg置锥形瓶内，加入2 mol／L的硫酸甲醇溶液2 ml，封口，置85℃水浴中水解24 h，冷却，用饱和Ba（OH）2中和，离心，取上清液，减压浓缩至干，待用。
2.3.3 单糖组分的纸色谱层析
用微量点样器分别取样品水解液和标准葡萄糖液各4～5 μl，在纸色谱上点样，置于展开筒中展开，展开系统为：正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶5） 上层， 自然风干后用邻苯二甲酸苯胺显色，样品水解液出现4个棕色点，如图1，其中有一个点与标准葡萄糖溶液的点Rf值一样，说明样品中确含多糖。
多糖中、高剂量均可使小鼠酒精肝损伤血清ALT，AST升高的水平降低。模型对照组ALT，AST活性较正常对照组明显升高（P<0.01），说明酒精致小鼠肝损伤造模成功。多糖低剂量组与模型组对照比较，P>0.05,不能说明有显着差异，说明低剂量组对酒精性肝损伤有一定的保护作用，但作用效果不明显。多糖中剂量组，高剂量组与模型组比较，P<0.01，有显着差异，说明多糖中浓度（250 mg/ml），高浓度（500 mg/ml）均对酒精性肝损伤有很好的保护作用。高剂量组与阳性对照组比较，P <0.05,有差异，说明多糖高浓度（500 mg/ml）具有与护肝片相同的对酒精性肝损伤有很好的保护作用，甚至效果更好。
优质护理相关论文 http://www.qikanba.com/
1 器材
1.1 药品与试剂
白首乌购自江苏滨海，经湖南省药检所方石林教授鉴定为萝摩科植物耳叶牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight，实验用酒精（AR），谷草转氨酶（ALT）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。谷丙转氨酶酶（AST）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。氯仿、丙酮、乙醚、正丁醇均为分析纯。护肝片为北京亚东生物制药有限公司生产。
1.2 仪器与设备
电热恒温干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）202－3AB型；电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）DK－98-1A；真空旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）RE 52－99；抽滤机（郑州长城科工贸有限公司）SHB－B95型；离心沉淀机（上海医用分析仪器厂）LXT－II；分析天平（湘仪天平仪器厂）TG328B。
1.3 实验动物ICR小鼠（长沙市开福区实验动物科技服务部提供，动物合格证号：湘000468）。
2 方法
2.1 多糖的提取分离
2.1.1 预处理脱脂
取60 g白首乌Cynanchum auriculatum Royle ex Wight粉末，加180 ml乙醇（85%），加热回流1 h，过滤，滤渣于恒温箱中80℃干燥过夜［2］，得淡黄色滤渣52.5 g。
2.1.2 初多糖的提取浸提
将黄色滤渣52.5 g均分于两个1 000 ml圆底烧瓶中，A瓶为26.2 g，B瓶为26.3 g。A、B瓶各加520 ml水，在恒温水浴中回流1 h，过滤，滤渣在相同条件下重复浸提1次，合并滤液。
离心：将两次浸液离心机离心10 min（2 500 r/min），合并滤液。
减压浓缩：将合并滤液在真空旋转蒸发器中浓缩至75 ml。
真空干燥：在浓缩后的多糖溶液中加入3倍量95％乙醇（AR）225 ml，抽滤，真空干燥后得淡黄色粗多糖。
2.2 粗多糖的纯化
2.2.1 脱蛋白
粗多糖加蒸馏水200 ml复溶后经过Sevag试剂（氯仿20 ml，正丁醇4 ml）除蛋白，连续操作4次，得150 ml多糖溶液。
2.2.2 醇沉
在脱蛋白后的多糖溶液中加入3倍95％乙醇，沉淀用乙醇洗涤3次，经抽滤、真空干燥后得到浅灰色粉末状结晶。
2.2.3 纯化
将灰白色结晶用乙醇、丙酮及乙醚反复洗涤，抽滤、真空干燥后得到浅灰色粉末状结晶。
2.3 多糖的验证
2.3.1 多糖检测反应
取多糖粉末少许用蒸馏水溶解，取1 ml于试管中，再加10% α-萘酚的乙醇溶液3滴，均匀混合，沿管壁加浓硫酸1 ml，使集于下层，在两层交界面有棕色环出现，证明此为多糖。
2.3.2 水解
取上述粉末20 mg置锥形瓶内，加入2 mol／L的硫酸甲醇溶液2 ml，封口，置85℃水浴中水解24 h，冷却，用饱和Ba（OH）2中和，离心，取上清液，减压浓缩至干，待用。
2.3.3 单糖组分的纸色谱层析
用微量点样器分别取样品水解液和标准葡萄糖液各4～5 μl，在纸色谱上点样，置于展开筒中展开，展开系统为：正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶5） 上层， 自然风干后用邻苯二甲酸苯胺显色，样品水解液出现4个棕色点，如图1，其中有一个点与标准葡萄糖溶液的点Rf值一样，说明样品中确含多糖。
多糖中、高剂量均可使小鼠酒精肝损伤血清ALT，AST升高的水平降低。模型对照组ALT，AST活性较正常对照组明显升高（P<0.01），说明酒精致小鼠肝损伤造模成功。多糖低剂量组与模型组对照比较，P>0.05,不能说明有显着差异，说明低剂量组对酒精性肝损伤有一定的保护作用，但作用效果不明显。多糖中剂量组，高剂量组与模型组比较，P<0.01，有显着差异，说明多糖中浓度（250 mg/ml），高浓度（500 mg/ml）均对酒精性肝损伤有很好的保护作用。高剂量组与阳性对照组比较，P <0.05,有差异，说明多糖高浓度（500 mg/ml）具有与护肝片相同的对酒精性肝损伤有很好的保护作用，甚至效果更好。
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