紫外分光光度法测定续断中总皂苷含量研究-关于护理研究的论文
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1 仪器与材料
1.1 仪器UV-1100紫外-可见分光光度仪（上海天美科学仪器有限公司），KQ-3200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），万分之一电子天平（德国赛多利斯BP-121S），十万分之一电子天平（日本岛津LIBROR AEG-45S）。
1.2 样品与试剂续断采自和购自全国9个省、市37个药材样品（见表2），均经成都中医药大学鉴定教研室卫莹芳教授鉴定为川续断的干燥根；齐墩果酸对照品（批号：110709-200505，购自中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙醇、冰乙酸、高氯酸、香草醛等试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 测定方法依据本文以齐墩果酸为对照品测定续断药材中总皂苷的含量，通过总皂苷和齐墩果酸皂苷元与香草醛-高氯酸反应在可见区都能获得稳定的特征吸收峰。
2.2 对照品溶液的配制称取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含0.141 mg的溶液，即得。
2.3 显色方法及测定波长的选择精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.5 ml至具塞试管中，水浴挥干溶剂， 以空白试剂为对照，加入新配制的5%香草醛－冰醋酸0.2 ml，高氯酸0.8 ml, 密塞摇匀，于60℃水浴中加热20 min，立即取出，冰水浴冷却后加入冰醋酸5 ml，摇匀。于200～800 nm 波长范围内进行扫描，选取最大吸收波长548 nm为测定波长。
2.4 标准曲线的制备分别精密吸取上述对照品溶液0.1，0.2，0.3，0.5，0.7，0.9,1.2 ml至具塞试管中，随行试剂做空白对照，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度，以吸光度（Y）为纵坐标，对照品含量（mg）（X）为横坐标，绘制标准曲线（见图1），并计算回归方程得：Y=5.726 2X+0.004 5，r＝0.999 8。
2.5 样品溶液的制备取续断样品粉末（过3号筛）约1.0 g，精密称定，加入20倍量50%乙醇，超声提取2次，30 min/次，滤过，滤液置50 ml容量瓶中，加入50％乙醇至刻度，摇匀，即得。
2.6 精密度实验精密吸取齐墩果酸对照品溶液适量于具塞试管中，平行6份，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度，测量结果分别为0.621，0.626，0.634，0.627，0.625，0.618，平均0.625，RSD为0.88%，表明精密度较好。
2.7 稳定性实验精密吸样品溶液适量于具塞试管中，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，显色后不同时间测定其吸光度变化，放置5，10，15，30，45，60，90，120，150 min后，分别测定其吸光度，测定结果分别为0.637，0.640，0.636，0.632，0.625，0.622，0.616，0.613，0.604，平均0.625，RSD为1.97%，结果表明此显色反应在5～150 min内稳定。
2.8 重复性实验取同一批续断样品6份，每份约1.0 g，精密称定，照样品溶液制备方法制备，精密吸取各样品溶液适量，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度，测定结果分别为0.601，0.598，0.603，0.607，0.593，0.614，平均0.603，RSD为1.21%。结果表明该方法重复性较好。
2.9 加样回收率实验取已知含量的续断样品5份，每份0.25 g,精密称定，分别加入一定量的齐墩果酸对照品，照样品溶液制备方法制备，精密吸取各样品溶液适量 , 参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度。
采用香草醛-高氯酸显色法测定续断中总皂苷的含量，在显色反应过程中吸光度会随水浴温度和加热时间的改变而变化，因此本实验通过考察不同的显色温度（50，55，60，65，70℃）、显色时间（5，10，15，20，25，30 min），确定水浴温度60℃，加热显色时间20 min。
总皂苷是续断补肝肾、强筋骨、续折伤的主要活性成分。本文研究了续断总皂苷的制备方法，对提取方式、提取溶剂、溶剂用量、提取时间、提取次数进行考察，最终确定提取条件为：20倍量的50%乙醇，超声提取2次，60 min/次。方法学研究结果表明，该含量测定方法准确度高、重复性好（RSD为1.21%） ,加样回收率为100.32%，RSD为1.78%。因此本法可作为续断中总皂苷的含量测定方法。
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1 仪器与材料
1.1 仪器UV-1100紫外-可见分光光度仪（上海天美科学仪器有限公司），KQ-3200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），万分之一电子天平（德国赛多利斯BP-121S），十万分之一电子天平（日本岛津LIBROR AEG-45S）。
1.2 样品与试剂续断采自和购自全国9个省、市37个药材样品（见表2），均经成都中医药大学鉴定教研室卫莹芳教授鉴定为川续断的干燥根；齐墩果酸对照品（批号：110709-200505，购自中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙醇、冰乙酸、高氯酸、香草醛等试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 测定方法依据本文以齐墩果酸为对照品测定续断药材中总皂苷的含量，通过总皂苷和齐墩果酸皂苷元与香草醛-高氯酸反应在可见区都能获得稳定的特征吸收峰。
2.2 对照品溶液的配制称取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含0.141 mg的溶液，即得。
2.3 显色方法及测定波长的选择精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.5 ml至具塞试管中，水浴挥干溶剂， 以空白试剂为对照，加入新配制的5%香草醛－冰醋酸0.2 ml，高氯酸0.8 ml, 密塞摇匀，于60℃水浴中加热20 min，立即取出，冰水浴冷却后加入冰醋酸5 ml，摇匀。于200～800 nm 波长范围内进行扫描，选取最大吸收波长548 nm为测定波长。
2.4 标准曲线的制备分别精密吸取上述对照品溶液0.1，0.2，0.3，0.5，0.7，0.9,1.2 ml至具塞试管中，随行试剂做空白对照，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度，以吸光度（Y）为纵坐标，对照品含量（mg）（X）为横坐标，绘制标准曲线（见图1），并计算回归方程得：Y=5.726 2X+0.004 5，r＝0.999 8。
2.5 样品溶液的制备取续断样品粉末（过3号筛）约1.0 g，精密称定，加入20倍量50%乙醇，超声提取2次，30 min/次，滤过，滤液置50 ml容量瓶中，加入50％乙醇至刻度，摇匀，即得。
2.6 精密度实验精密吸取齐墩果酸对照品溶液适量于具塞试管中，平行6份，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度，测量结果分别为0.621，0.626，0.634，0.627，0.625，0.618，平均0.625，RSD为0.88%，表明精密度较好。
2.7 稳定性实验精密吸样品溶液适量于具塞试管中，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，显色后不同时间测定其吸光度变化，放置5，10，15，30，45，60，90，120，150 min后，分别测定其吸光度，测定结果分别为0.637，0.640，0.636，0.632，0.625，0.622，0.616，0.613，0.604，平均0.625，RSD为1.97%，结果表明此显色反应在5～150 min内稳定。
2.8 重复性实验取同一批续断样品6份，每份约1.0 g，精密称定，照样品溶液制备方法制备，精密吸取各样品溶液适量，参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度，测定结果分别为0.601，0.598，0.603，0.607，0.593，0.614，平均0.603，RSD为1.21%。结果表明该方法重复性较好。
2.9 加样回收率实验取已知含量的续断样品5份，每份0.25 g,精密称定，分别加入一定量的齐墩果酸对照品，照样品溶液制备方法制备，精密吸取各样品溶液适量 , 参照“2.3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度。
采用香草醛-高氯酸显色法测定续断中总皂苷的含量，在显色反应过程中吸光度会随水浴温度和加热时间的改变而变化，因此本实验通过考察不同的显色温度（50，55，60，65，70℃）、显色时间（5，10，15，20，25，30 min），确定水浴温度60℃，加热显色时间20 min。
总皂苷是续断补肝肾、强筋骨、续折伤的主要活性成分。本文研究了续断总皂苷的制备方法，对提取方式、提取溶剂、溶剂用量、提取时间、提取次数进行考察，最终确定提取条件为：20倍量的50%乙醇，超声提取2次，60 min/次。方法学研究结果表明，该含量测定方法准确度高、重复性好（RSD为1.21%） ,加样回收率为100.32%，RSD为1.78%。因此本法可作为续断中总皂苷的含量测定方法。
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