天花粉蛋白TCS对子宫颈磷癌细胞作用研究-压疮护理研究进展论文
压疮护理研究进展论文 压疮护理论文 医学护理论文 医学论文发表
子宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，约80%～95%为鳞状细胞癌，其次为腺癌或其它类型癌。自从Ru QH［2］发现TCS能引起人子宫颈腺癌细胞系HeLa细胞凋亡以来，有学者［4～6］对TCS引起HeLa细胞的凋亡机制进行了较为深入的探讨。发现TCS处理可以引起 HeLa细胞中多个基因的表达改变，其中Bcl-2蛋白表达减少、Bax蛋白增多和CREB蛋白的磷酸化；实验还显示TCS引起HeLa细胞凋亡与抑癌基因的去甲基化有关。但文献对发病率较高的子宫颈鳞状细胞癌的报告很少［7］，目前认为，TCS能抑制体外子宫颈鳞状细胞癌Caski细胞的生长，该过程可能与对OPCML、DAPK基因的去甲基化作用有关。本实验研究了TCS在体外对人子宫颈鳞癌Caski细胞的生长影响，通过吖啶橙荧光染色、TUNEL法和透射电镜等多种方法检测了细胞凋亡。结果显示，多种浓度的TCS均能诱导子宫颈鳞癌Caski细胞凋亡。
1 材料与仪器
TCS购自上海金山制药厂（1.2 mg/ml）；RPMI-1640培养基购自Gibcol公司；10%新生牛血清购自杭州四季青公司；吖啶橙购自Sigma公司；DNaseI购自上海博亚生物技术有限公司；Triton X-100购自华美生物工程公司；DAB试剂盒购自北京中山生物技术有限公司；TUNEL试剂盒购自Roche公司；倒置显微镜和多功能显微镜及图像分析系统购自德国Leica；H-7500型透射电镜购自日立。
2 方法
2.1 细胞培养人子宫颈鳞癌Caski细胞株（中国协和医科大学基础研究所生物物理教研室馈赠），培养于5%CO2，37℃湿化孵箱中。培养基RPMI-1640中含10%新生牛血清，0.1 U/L青霉素，0.1 U/L链霉素，所有实验均取对数生长期细胞。
2.2 倒置和荧光显微镜观察细胞的形态学变化体外培养的Caski细胞用PBS处理为阴性对照组、实验组分别用不同浓度（20,40，60，80，100 μg /ml）TCS处理24 h和48 h后，加入0.01%吖啶橙磷酸缓冲液（pH 6.0）50 μl，轻轻混匀，静置2 min后，于荧光显微镜下观察并记录图像。
2.3 透射电子显微镜观察实验组以60 μg /ml的TCS处理Caski细胞24 h和48 h，PBS处理为阴性对照组。2.5%戊二醛固定、包埋、超薄切片，醋酸双氧铀和枸橼酸钠硝酸铅双重染色后，倒置电镜下观察并拍照。
2.4 脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测实验组用不同浓度（20,40,60,80,100 μg /ml）TCS处理Caski细胞24 h。按TUNEL试剂盒说明操作。用DNaseⅠ处理Caski为阳性对照，试剂2替代TUNEL反应混合溶液为阴性对照。凋亡细胞的判断：胞核棕黄色染色为阳性，阴性细胞不显色。
2.5 图像分析软件定量分析每一玻片任选10个视野，计算在200倍光镜下检测凋亡阳性细胞的个数、平均面积和平均灰度［3］。数据统计学分析用SPSS 10. 0统计软件（t检验）。
3 结果
3.1 倒置显微镜下观察对照组细胞呈梭形，贴壁牢固、密集，折光性好，胞质饱满；实验组中经20 μg/ml TCS作用48 h后细胞间隔增大， 细胞体积缩小，胞浆凝缩，折光率增强，贴壁性差；60 μg/ml TCS浓度作用48 h脱落细胞数增加， 细胞表面出现发泡现象；TCS药物浓度达到100 μg/ml作用24 h后即出现上述特征。
3.2 荧光显微镜下观察经吖啶橙荧光染色后，长链的DNA在荧光显微镜592 nm波长紫外线激发下发出绿色荧光，而RNA发出黄色或黄绿色荧光。本实验的阴性对照组的细胞核DNA为绿色均匀荧光（图1）；各实验组均可见到凋亡的细胞：细胞膜完整，细胞核或细胞质可见致密浓染的黄色荧光，出现凋亡小体（图2）。
3.3 透射电镜观察阴性对照组细胞表面微绒毛丰富，胞质内可见线粒体、粗面内质网、游离核糖体，核仁明显，未发现凋亡细胞（图3）。TCS处理细胞可见明显的细胞凋亡：细胞膜完整，染色质局部增多且趋边凝聚，核固缩，有凋亡小体形成；部分细胞表面微绒毛减少或消失，胞质可见大量空泡结构；细胞核趋边，呈半月形；有的细胞核碎裂为一个或多个致密小体（图4）。
3.4 TUNEL法检测结果TCS处理细胞后24 h，采用TUNEL法染色细胞核呈棕黄色的细胞判为凋亡细胞，未被染色为非凋亡细胞。阴性对照组未见凋亡细胞，而阳性对照组和各实验组均可见大量的胞核棕黄色染色细胞，采用图像分析软件定量分析阳性细胞（表1）。
关于护理研究的论文 http://www.qikanba.com/
子宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，约80%～95%为鳞状细胞癌，其次为腺癌或其它类型癌。自从Ru QH［2］发现TCS能引起人子宫颈腺癌细胞系HeLa细胞凋亡以来，有学者［4～6］对TCS引起HeLa细胞的凋亡机制进行了较为深入的探讨。发现TCS处理可以引起 HeLa细胞中多个基因的表达改变，其中Bcl-2蛋白表达减少、Bax蛋白增多和CREB蛋白的磷酸化；实验还显示TCS引起HeLa细胞凋亡与抑癌基因的去甲基化有关。但文献对发病率较高的子宫颈鳞状细胞癌的报告很少［7］，目前认为，TCS能抑制体外子宫颈鳞状细胞癌Caski细胞的生长，该过程可能与对OPCML、DAPK基因的去甲基化作用有关。本实验研究了TCS在体外对人子宫颈鳞癌Caski细胞的生长影响，通过吖啶橙荧光染色、TUNEL法和透射电镜等多种方法检测了细胞凋亡。结果显示，多种浓度的TCS均能诱导子宫颈鳞癌Caski细胞凋亡。
1 材料与仪器
TCS购自上海金山制药厂（1.2 mg/ml）；RPMI-1640培养基购自Gibcol公司；10%新生牛血清购自杭州四季青公司；吖啶橙购自Sigma公司；DNaseI购自上海博亚生物技术有限公司；Triton X-100购自华美生物工程公司；DAB试剂盒购自北京中山生物技术有限公司；TUNEL试剂盒购自Roche公司；倒置显微镜和多功能显微镜及图像分析系统购自德国Leica；H-7500型透射电镜购自日立。
2 方法
2.1 细胞培养人子宫颈鳞癌Caski细胞株（中国协和医科大学基础研究所生物物理教研室馈赠），培养于5%CO2，37℃湿化孵箱中。培养基RPMI-1640中含10%新生牛血清，0.1 U/L青霉素，0.1 U/L链霉素，所有实验均取对数生长期细胞。
2.2 倒置和荧光显微镜观察细胞的形态学变化体外培养的Caski细胞用PBS处理为阴性对照组、实验组分别用不同浓度（20,40，60，80，100 μg /ml）TCS处理24 h和48 h后，加入0.01%吖啶橙磷酸缓冲液（pH 6.0）50 μl，轻轻混匀，静置2 min后，于荧光显微镜下观察并记录图像。
2.3 透射电子显微镜观察实验组以60 μg /ml的TCS处理Caski细胞24 h和48 h，PBS处理为阴性对照组。2.5%戊二醛固定、包埋、超薄切片，醋酸双氧铀和枸橼酸钠硝酸铅双重染色后，倒置电镜下观察并拍照。
2.4 脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测实验组用不同浓度（20,40,60,80,100 μg /ml）TCS处理Caski细胞24 h。按TUNEL试剂盒说明操作。用DNaseⅠ处理Caski为阳性对照，试剂2替代TUNEL反应混合溶液为阴性对照。凋亡细胞的判断：胞核棕黄色染色为阳性，阴性细胞不显色。
2.5 图像分析软件定量分析每一玻片任选10个视野，计算在200倍光镜下检测凋亡阳性细胞的个数、平均面积和平均灰度［3］。数据统计学分析用SPSS 10. 0统计软件（t检验）。
3 结果
3.1 倒置显微镜下观察对照组细胞呈梭形，贴壁牢固、密集，折光性好，胞质饱满；实验组中经20 μg/ml TCS作用48 h后细胞间隔增大， 细胞体积缩小，胞浆凝缩，折光率增强，贴壁性差；60 μg/ml TCS浓度作用48 h脱落细胞数增加， 细胞表面出现发泡现象；TCS药物浓度达到100 μg/ml作用24 h后即出现上述特征。
3.2 荧光显微镜下观察经吖啶橙荧光染色后，长链的DNA在荧光显微镜592 nm波长紫外线激发下发出绿色荧光，而RNA发出黄色或黄绿色荧光。本实验的阴性对照组的细胞核DNA为绿色均匀荧光（图1）；各实验组均可见到凋亡的细胞：细胞膜完整，细胞核或细胞质可见致密浓染的黄色荧光，出现凋亡小体（图2）。
3.3 透射电镜观察阴性对照组细胞表面微绒毛丰富，胞质内可见线粒体、粗面内质网、游离核糖体，核仁明显，未发现凋亡细胞（图3）。TCS处理细胞可见明显的细胞凋亡：细胞膜完整，染色质局部增多且趋边凝聚，核固缩，有凋亡小体形成；部分细胞表面微绒毛减少或消失，胞质可见大量空泡结构；细胞核趋边，呈半月形；有的细胞核碎裂为一个或多个致密小体（图4）。
3.4 TUNEL法检测结果TCS处理细胞后24 h，采用TUNEL法染色细胞核呈棕黄色的细胞判为凋亡细胞，未被染色为非凋亡细胞。阴性对照组未见凋亡细胞，而阳性对照组和各实验组均可见大量的胞核棕黄色染色细胞，采用图像分析软件定量分析阳性细胞（表1）。
关于护理研究的论文 http://www.qikanba.com/
我要分享到：
最新文章NEWS
- • 高职生道德信仰调查 本文版权由期刊吧所有
- • 医学论文中的统计问题
- • 医学论文投稿秘籍
- • 医学论文写作的程序介绍
- • 医学论文摘要的书写过程中存在的问题
- • 叙述医学研究论文标引用词的选择
- • 医学论文写作五大妙招
- • 如何进行儿科临床科学研究选题
- • 医学论文写作的流程
- • 医学论文统计设计方面存在问题总结
推荐期刊Tui Jian
Chinese Journal of Integrative Medicine
Journal of Genetics and Genomics
Journal of Bionic Engineering
Pedosphere
Chinese Journal of Structural Chemistry