酪氨酸对酪氨酸酶活性影响研究-膝关节镜手术护理论文
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中药成分十分复杂，酪氨酸也并非为激活酪氨酸酶活性的唯一化合物。据文献报道，咖啡酸也具有激活酪氨酸酶的作用［6］，黄芪中的山柰素［7］、女贞子中的酪醇和齐墩果酸［8］是它们显示激活作用的主要成分。中药治疗白癜风等皮肤病的作用原理，至今仍不清楚。每个具有激活作用的化合物之间是否存在共同点，作用机理如何，都值得进行探讨。
1 材料
1.1 药材山慈姑药材购自贵州省黔东南州信邦中药饮片有限责任公司；白及、金果榄、丽江山慈姑药材购自贵州省药材公司。由贵州省黔东南州信邦中药饮片有限责任公司贺定祥鉴定。
1.2 试剂和仪器L-多巴，蘑菇酪氨酸酶（Sigma公司产品），酪氨酸（从山慈姑中分离得到），其它试剂均为市售分析纯。T6新世纪紫外可见分光光度计（北京谱析通用仪器有限责任公司），FA2004电子分析天平（上海良平仪器仪表有限公司）。
2 方法
2.1 样品的制备山慈姑、白及、金果榄和丽江山慈姑生药粉碎（100目），各称取4 g，分别用50%乙醇40 ml浸泡14 d。过滤，取续滤液1 ml，用pH 6.8磷酸缓冲液定容至25 ml，备用。
2.2 酪氨酸酶活性测定参照Matsuda等［5］报道方法。分别取上述样品液2 ml，依次加入0.004 mol/L的L-多巴反应液2 ml与蘑菇酪氨酸酶2 ml（200 U），混合，立即置分光光度计上于475 nm处测吸收值，每分钟记录一次，连续记录20 min。同时，以pH 6.8磷酸缓冲液作为空白对照。酪氨酸酶激活率按下列公式计算。
激活率（%）=［（C-D）/t-（A-B）/t］/（A-B）/t×100%。其中，A=A475-药+酶； B= A475-药-酶；C= A475+药+酶；D= A475+药-酶，t为相对应的时间。
2.3 数据处理和统计方法采用配对计量资料t检验，实验重复3次。
2.4 薄层层析分别取白及、金果榄、山慈姑、丽江山慈姑、酪氨酸溶液点样于同一块硅胶薄层板上，编号为1、2、3、4、5。以正丁醇-水-乙酸（4∶1∶1）为展开剂，展开，晾干。喷以1%茚三酮乙醇溶液，吹干，显色。
3 结果
山慈姑和丽江山慈姑均有激活酪氨酸酶活性的作用，金果榄的作用不明显，白及则显示抑制酪氨酸酶活性的作用见表1。经显色后，在相同位置处，酪氨酸、金果榄、山慈姑和丽江山慈姑有一紫色斑点，白及则没有。表明金果榄、山慈姑和丽江山慈姑中有酪氨酸存在见图1。对呈现抑制作用的白及组中加入一定量的酪氨酸（其它条件相同），在475 nm处测量，抑制率为-11.88%。加入酪氨酸后虽然降低了抑制率，但并没有达到预期使其激活的效果。因此，酪氨酸含量的高低与激活作用是否呈正比关系，还有待进一步深入的研究。
消化内镜护理论文 http://www.qikanba.com/
中药成分十分复杂，酪氨酸也并非为激活酪氨酸酶活性的唯一化合物。据文献报道，咖啡酸也具有激活酪氨酸酶的作用［6］，黄芪中的山柰素［7］、女贞子中的酪醇和齐墩果酸［8］是它们显示激活作用的主要成分。中药治疗白癜风等皮肤病的作用原理，至今仍不清楚。每个具有激活作用的化合物之间是否存在共同点，作用机理如何，都值得进行探讨。
1 材料
1.1 药材山慈姑药材购自贵州省黔东南州信邦中药饮片有限责任公司；白及、金果榄、丽江山慈姑药材购自贵州省药材公司。由贵州省黔东南州信邦中药饮片有限责任公司贺定祥鉴定。
1.2 试剂和仪器L-多巴，蘑菇酪氨酸酶（Sigma公司产品），酪氨酸（从山慈姑中分离得到），其它试剂均为市售分析纯。T6新世纪紫外可见分光光度计（北京谱析通用仪器有限责任公司），FA2004电子分析天平（上海良平仪器仪表有限公司）。
2 方法
2.1 样品的制备山慈姑、白及、金果榄和丽江山慈姑生药粉碎（100目），各称取4 g，分别用50%乙醇40 ml浸泡14 d。过滤，取续滤液1 ml，用pH 6.8磷酸缓冲液定容至25 ml，备用。
2.2 酪氨酸酶活性测定参照Matsuda等［5］报道方法。分别取上述样品液2 ml，依次加入0.004 mol/L的L-多巴反应液2 ml与蘑菇酪氨酸酶2 ml（200 U），混合，立即置分光光度计上于475 nm处测吸收值，每分钟记录一次，连续记录20 min。同时，以pH 6.8磷酸缓冲液作为空白对照。酪氨酸酶激活率按下列公式计算。
激活率（%）=［（C-D）/t-（A-B）/t］/（A-B）/t×100%。其中，A=A475-药+酶； B= A475-药-酶；C= A475+药+酶；D= A475+药-酶，t为相对应的时间。
2.3 数据处理和统计方法采用配对计量资料t检验，实验重复3次。
2.4 薄层层析分别取白及、金果榄、山慈姑、丽江山慈姑、酪氨酸溶液点样于同一块硅胶薄层板上，编号为1、2、3、4、5。以正丁醇-水-乙酸（4∶1∶1）为展开剂，展开，晾干。喷以1%茚三酮乙醇溶液，吹干，显色。
3 结果
山慈姑和丽江山慈姑均有激活酪氨酸酶活性的作用，金果榄的作用不明显，白及则显示抑制酪氨酸酶活性的作用见表1。经显色后，在相同位置处，酪氨酸、金果榄、山慈姑和丽江山慈姑有一紫色斑点，白及则没有。表明金果榄、山慈姑和丽江山慈姑中有酪氨酸存在见图1。对呈现抑制作用的白及组中加入一定量的酪氨酸（其它条件相同），在475 nm处测量，抑制率为-11.88%。加入酪氨酸后虽然降低了抑制率，但并没有达到预期使其激活的效果。因此，酪氨酸含量的高低与激活作用是否呈正比关系，还有待进一步深入的研究。
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