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大蒜素对弓形虫感染的抵抗作用研究-河南省级医药期刊

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1   材料与方法
  1.1  弓形虫RH株购自天津医科大学寄生虫学教研室,由河北大学医学部实验中心保种。
  1.2 动物
  SPF级BALB/c小鼠购自河北医科大学,由河北大学医学部实验中心动物室繁殖,8周龄。颗粒饲料喂养,自然光照、自由进食饮水。
  1.3 药物
  大蒜素,针剂,30 mg/支,上海禾丰制药有限公司产品,批号070802。
  1.4 分组126只BALB/c小鼠,随机分成感染组、治疗组和对照组,每组42只。RH株弓形虫速殖子5×104个/只经口感染小鼠,对照组灌服生理盐水,治疗组感染当天给大蒜素80 μg/只,1次/d,连续14 d,感染组灌服生理盐水替代。
  1.5  指标及测定方法
  1.5.1 脾T淋巴细胞分离与计数将脾置于300目不锈钢网上研磨,用PBS洗涤离心,淋巴细胞分离液分离试管内中层白色膜状淋巴细胞;用2%台盼蓝染色,计数淋巴细胞。
  1.5.2 小肠PP结分离与计数摘取小肠,置于5%FBS-PBS中,计数小肠浆膜表面PP结数目(通常在肠系膜附着处对侧,丘状隆起,色泽较白)。
  1.5.3 小肠上皮内淋巴细胞(IEL)分离与计数将去除PP结和冲洗肠液后的小肠剪成1~2 cm的小段,并纵行剪开,将洗过的肠段悬浮在含EDTA的PBS烧杯中,37℃磁力搅拌1 500 r/min×30 min。300目不锈钢网过滤,再用内装脱脂棉过滤,过滤后2 500 r/min×8 min离心,沉淀物用Percoll密度梯度离心法将IEL与肠上皮细胞分离。用微量移液器吸出白色雾状IEL层,2%台盼蓝染色后计数IEL。
  1.5.4 对再攻击感染免疫力测定取对照组、感染组和治疗组各42只共126只小鼠,于实验第8周用1×106个/只速殖子再次感染小鼠,观察至43周结束,记录活动情况、计算存活率。
  2  结果
  2.1 脾T淋巴细胞数变化在观察的实验周期中,对照组小鼠脾淋巴细胞总数无明显变化,感染组、治疗组在感染后第2周开始增生,第4周达高峰,第6周降至对照组水平,第4周明显高于对照组(P<0.01)。肠PP结数变化在观察的实验周期中,各组小鼠小肠PP结数目均无明显变化,治疗组平均为8.60个,感染组为8.34个,对照组8.46个,3组比较无显着差异(P>0.05)。小肠上皮内淋巴细胞(IEL)数变化实验周期内对照组小鼠IEL数量有轻微变化,但无显着性。感染组和治疗组显着增生,第4周有显着性差异,随后逐渐下降,第8周降至对照组水平。第4,6周组间比较有显着性差异(P<0.01)。
国家级医药卫生期刊      http://www.qikanba.com/
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