野生罗布麻叶中总黄酮和槲皮素含量测定实验-天津中医药大学期刊
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东北松嫩草原和辽河入海口处野生罗布麻叶总黄酮和槲皮素含量均较高，并具有较强的抗氧化活性，可以作为提取用于药品、食品领域高效能天然抗氧化剂的潜在资源。罗布麻叶本身含有一定量的槲皮素，其主要的黄酮类化合物如金丝桃苷、异槲皮苷等均是以槲皮素为苷元的，水解后测定的槲皮素含量为槲皮素的总量，松嫩草原野生罗布麻叶总黄酮和槲皮素含量与黄河入海口处差异不显着，却具有较强的抗氧化活性，是否与槲皮素在总黄酮中较高比率有关，有待深入研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器
LC－10ATvp高效液相色谱仪（日本岛津）：双泵、柱温箱、SPD-10Avp检测器、SIL-10ADvp自动加样器、CLASS-VP色谱工作站；UV-2201紫外分光光度计（日本岛津）；RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
1.2 药品
1,1-二苯基苦基苯阱（DPPH·）和2-脱氧核糖购于西格玛公司上海办事处；槲皮素和芦丁购于中国药品生物制品检定所；除用于HPLC的乙醇和甲醇为色谱纯外，其余的药品和试剂均为国产分析纯。
1.3 材料
2006-08-30分别采集于辽河入海口的盘锦和松嫩草原长岭县的绿源草场、种马场（松嫩草原生境变化较大，分别在草甸和轻盐碱化草甸设两个采样点），样品经东北师范大学草地科学研究所植被生态教育部重点实验室李建东教授和李志坚副教授共同鉴定。
2 方法
2.1 超声波辅助法提取总黄酮鲜样用自来水冲净后于60℃恒温鼓风干燥箱中干燥至恒重，干燥的样品用粉碎机粉碎，过1.2 mm的筛子。取粉碎样品5.0 g，加无水甲醇150 ml，室温下超声波辅助提取30 min，过滤。滤渣重新加无水甲醇150 ml，相同条件下再提取一次。合并两次提取液，40℃减压蒸干。用50％的乙醇重新溶解，去除叶绿素，滤液用50％乙醇定容至50 ml，摇匀，作供试样品液备用。每个样品依上述条件重复3次。
2.2 比色法测定总黄酮含量总黄酮含量的测定用改进的Dowd方法［2］。精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品，配制浓度依次为0，10，20，30，40，50，60 mg·L-1的系列标准溶液，取标准溶液3.0 ml，加入同体积2% AlCl3甲醇溶液，室温下反应15 min，415 nm测定吸收值，做标准曲线，得出方程Y=0.011 3X+0.003 8，R2=0.999，线性范围为0～60 mg·L-1。
2.3DPPH·自由基清除活性测定方法配制浓度为0.1mol ·L-1的DPPH·甲醇溶液，1 ml提取液中加入2 ml的DPPH·溶液，室温下反应30min后用紫外分光光度计于517 nm处测定吸光值。每个样品平行测定3次。抑制率计算公式：
抑制率（%）=［（C-CB）-（S-SB）］（C-CB）×100%
C为标准液的吸光度值；CB为空白液的吸光度值；S为样品反应液的吸光度值；SB为对照液的吸光度值。
2.4 ·OH清除活性测定方法·OH清除活性的测定采用轻微改进的2－脱氧核糖氧化法。反应混合试剂包括5mmol· L-1 FeSO4，5mmol ·L-1 EDTA和5mmol ·L-1 2-脱氧核糖各0.2 ml，与0.2 ml提取液混合，加入0.1mol· L-1磷酸盐缓冲液（pH7.4）1.0 ml后，再加入0.2 ml的5mmol ·L-1 H2O2，37℃保温4 h后，加1.4%三氯乙酸、0.5%硫代巴比妥酸各1 ml。反应混合物放到沸水浴中煮沸10 min。532 nm处测吸光值。每个样品平行测3次。抑制率的计算公式：抑制率（%）=［（C-CB）-（S-SB）（C-CB）］×100%，C为标准液的吸光度值；CB为空白液的吸光度值；S为样品反应液的吸光度值；SB为对照液的吸光度值。
3 结果与分析
黄酮类化合物含量测定结果罗布麻生态适应能力强，分布广泛，生境差异较大，有效成分的积累与气候、土壤和降雨量等生态环境因素有关，与采收期也密切相关。从表1可见，辽河入海口和松嫩草原野生罗布麻叶总黄酮和槲皮素含量均较高。槲皮素在总黄酮中的比率松嫩草原显着高于辽河入海口处。DPPH·是一种人工合成的稳定自由基，由于其在可见光区有特征吸收峰，对DPPH·的淬灭能力可以有效地评价抗氧化剂的活性。羟自由基是最活泼，对机体危害最大的自由基。
各样品对DPPH·和·OH的抑制率折合计算为IC50值（不加样品的反应体系的清除率设为0%，清除50%DPPH·或·OH时抗氧化剂的浓度为此样品的IC50值）。用IC50显示不同样品清除DPPH·或·OH的能力，IC50值越小，样品对DPPH·或·OH清除能力越强。
现代医药卫生期刊 http://www.qikanba.com/
东北松嫩草原和辽河入海口处野生罗布麻叶总黄酮和槲皮素含量均较高，并具有较强的抗氧化活性，可以作为提取用于药品、食品领域高效能天然抗氧化剂的潜在资源。罗布麻叶本身含有一定量的槲皮素，其主要的黄酮类化合物如金丝桃苷、异槲皮苷等均是以槲皮素为苷元的，水解后测定的槲皮素含量为槲皮素的总量，松嫩草原野生罗布麻叶总黄酮和槲皮素含量与黄河入海口处差异不显着，却具有较强的抗氧化活性，是否与槲皮素在总黄酮中较高比率有关，有待深入研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器
LC－10ATvp高效液相色谱仪（日本岛津）：双泵、柱温箱、SPD-10Avp检测器、SIL-10ADvp自动加样器、CLASS-VP色谱工作站；UV-2201紫外分光光度计（日本岛津）；RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
1.2 药品
1,1-二苯基苦基苯阱（DPPH·）和2-脱氧核糖购于西格玛公司上海办事处；槲皮素和芦丁购于中国药品生物制品检定所；除用于HPLC的乙醇和甲醇为色谱纯外，其余的药品和试剂均为国产分析纯。
1.3 材料
2006-08-30分别采集于辽河入海口的盘锦和松嫩草原长岭县的绿源草场、种马场（松嫩草原生境变化较大，分别在草甸和轻盐碱化草甸设两个采样点），样品经东北师范大学草地科学研究所植被生态教育部重点实验室李建东教授和李志坚副教授共同鉴定。
2 方法
2.1 超声波辅助法提取总黄酮鲜样用自来水冲净后于60℃恒温鼓风干燥箱中干燥至恒重，干燥的样品用粉碎机粉碎，过1.2 mm的筛子。取粉碎样品5.0 g，加无水甲醇150 ml，室温下超声波辅助提取30 min，过滤。滤渣重新加无水甲醇150 ml，相同条件下再提取一次。合并两次提取液，40℃减压蒸干。用50％的乙醇重新溶解，去除叶绿素，滤液用50％乙醇定容至50 ml，摇匀，作供试样品液备用。每个样品依上述条件重复3次。
2.2 比色法测定总黄酮含量总黄酮含量的测定用改进的Dowd方法［2］。精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品，配制浓度依次为0，10，20，30，40，50，60 mg·L-1的系列标准溶液，取标准溶液3.0 ml，加入同体积2% AlCl3甲醇溶液，室温下反应15 min，415 nm测定吸收值，做标准曲线，得出方程Y=0.011 3X+0.003 8，R2=0.999，线性范围为0～60 mg·L-1。
2.3DPPH·自由基清除活性测定方法配制浓度为0.1mol ·L-1的DPPH·甲醇溶液，1 ml提取液中加入2 ml的DPPH·溶液，室温下反应30min后用紫外分光光度计于517 nm处测定吸光值。每个样品平行测定3次。抑制率计算公式：
抑制率（%）=［（C-CB）-（S-SB）］（C-CB）×100%
C为标准液的吸光度值；CB为空白液的吸光度值；S为样品反应液的吸光度值；SB为对照液的吸光度值。
2.4 ·OH清除活性测定方法·OH清除活性的测定采用轻微改进的2－脱氧核糖氧化法。反应混合试剂包括5mmol· L-1 FeSO4，5mmol ·L-1 EDTA和5mmol ·L-1 2-脱氧核糖各0.2 ml，与0.2 ml提取液混合，加入0.1mol· L-1磷酸盐缓冲液（pH7.4）1.0 ml后，再加入0.2 ml的5mmol ·L-1 H2O2，37℃保温4 h后，加1.4%三氯乙酸、0.5%硫代巴比妥酸各1 ml。反应混合物放到沸水浴中煮沸10 min。532 nm处测吸光值。每个样品平行测3次。抑制率的计算公式：抑制率（%）=［（C-CB）-（S-SB）（C-CB）］×100%，C为标准液的吸光度值；CB为空白液的吸光度值；S为样品反应液的吸光度值；SB为对照液的吸光度值。
3 结果与分析
黄酮类化合物含量测定结果罗布麻生态适应能力强，分布广泛，生境差异较大，有效成分的积累与气候、土壤和降雨量等生态环境因素有关，与采收期也密切相关。从表1可见，辽河入海口和松嫩草原野生罗布麻叶总黄酮和槲皮素含量均较高。槲皮素在总黄酮中的比率松嫩草原显着高于辽河入海口处。DPPH·是一种人工合成的稳定自由基，由于其在可见光区有特征吸收峰，对DPPH·的淬灭能力可以有效地评价抗氧化剂的活性。羟自由基是最活泼，对机体危害最大的自由基。
各样品对DPPH·和·OH的抑制率折合计算为IC50值（不加样品的反应体系的清除率设为0%，清除50%DPPH·或·OH时抗氧化剂的浓度为此样品的IC50值）。用IC50显示不同样品清除DPPH·或·OH的能力，IC50值越小，样品对DPPH·或·OH清除能力越强。
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