反相高效液相色谱法测定白头翁皂苷B4含量研究-卫生类国家期刊
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1 仪器与试剂
美国Waters高效液相色谱仪（515泵，2487紫外检测器，ChromStation色谱工作站），KQ3200型超声仪（昆山市超声仪器有限公司）。白头翁皂苷B4对照品（中国药品生物制品检定所），白头翁药材由三九药业提供，甲醇为色谱纯（天津市康科德科技有限公司），水为自制重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-0.1%磷酸（28∶72）为流动相，流速为1.0 ml·min-1，检测波长为205 nm，柱温为30℃，进样量：10 μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品储备液的制备精密称取白头翁皂苷B4对照品1.47 mg，加甲醇定容至10 ml，制成每1 ml含白头翁皂苷B4 147μg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备白头翁药材粉碎后，精密称取药材粉末（过3号筛）0.12 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 ml，超声30 min，放冷，过滤，滤液置 50 ml量瓶中，用少量流动相洗涤容器及残渣，洗液并入同一量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，过0.2 μm滤膜即得。
2.3 系统适用性试验取供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，白头翁皂苷B4与相邻色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数不低于3 000（图1～2）。
2.4 线性关系考察取对照品储备液，按照不同比例稀释，使白头翁皂苷B4质量浓度分别为29.4，58.8，88.2，117.6，147 mg·L-1。分别取上述溶液各10 μl进样测定，记录色谱图。以对照品质量浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，回归方程为：Y = 2.8844X - 2.04 （r=0.999 9，n=5）。结果表明，白头翁皂苷B4质量浓度在29.4～147mg·L-1内呈良好线性关系。结果见表1。表1 标准曲线结果（略）
2.5 仪器精密度实验取同一对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样5次，计算白头翁皂苷B4色谱峰面积的RSD为0.32%（n=5）。
2.6 方法重复性实验取同一批号的样品，按“2.2.2”条方法平行制备5份样品按上述色谱条件进样分析，计算白头翁皂苷B4含量的RSD为1.37%（n=5）。
2.7 稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12h注入液相色谱仪，依法测定。计算白头翁皂苷B4色谱峰面积的RSD为1.47%（n=6）。
2.8 回收率实验精密称取已知含量的白头翁药材粉末（过3号筛）6份，分别精密加入高、中、低质量浓度的对照品（相当于药材含量的80%，100%，120%，每一质量浓度2份），按上述方法测定分析，白头翁皂苷B4平均回收率分别为99.7%（n=6）本文经过多次实验摸索，发现由乙腈-0.1%磷酸系统在205 nm波长下基线平稳，分别选用不同比例的该流动相系统：乙腈-0.1%磷酸（30∶70）；乙腈-0.1%磷酸（29∶71）；乙腈-0.1%磷酸（25∶75），发现乙腈-0.1%磷酸比例为28∶72能够使白头翁皂苷B4得到较好分离，且重复性好。
医学期刊目录 http://www.qikanba.com/
1 仪器与试剂
美国Waters高效液相色谱仪（515泵，2487紫外检测器，ChromStation色谱工作站），KQ3200型超声仪（昆山市超声仪器有限公司）。白头翁皂苷B4对照品（中国药品生物制品检定所），白头翁药材由三九药业提供，甲醇为色谱纯（天津市康科德科技有限公司），水为自制重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-0.1%磷酸（28∶72）为流动相，流速为1.0 ml·min-1，检测波长为205 nm，柱温为30℃，进样量：10 μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品储备液的制备精密称取白头翁皂苷B4对照品1.47 mg，加甲醇定容至10 ml，制成每1 ml含白头翁皂苷B4 147μg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备白头翁药材粉碎后，精密称取药材粉末（过3号筛）0.12 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 ml，超声30 min，放冷，过滤，滤液置 50 ml量瓶中，用少量流动相洗涤容器及残渣，洗液并入同一量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，过0.2 μm滤膜即得。
2.3 系统适用性试验取供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，白头翁皂苷B4与相邻色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数不低于3 000（图1～2）。
2.4 线性关系考察取对照品储备液，按照不同比例稀释，使白头翁皂苷B4质量浓度分别为29.4，58.8，88.2，117.6，147 mg·L-1。分别取上述溶液各10 μl进样测定，记录色谱图。以对照品质量浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，回归方程为：Y = 2.8844X - 2.04 （r=0.999 9，n=5）。结果表明，白头翁皂苷B4质量浓度在29.4～147mg·L-1内呈良好线性关系。结果见表1。表1 标准曲线结果（略）
2.5 仪器精密度实验取同一对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样5次，计算白头翁皂苷B4色谱峰面积的RSD为0.32%（n=5）。
2.6 方法重复性实验取同一批号的样品，按“2.2.2”条方法平行制备5份样品按上述色谱条件进样分析，计算白头翁皂苷B4含量的RSD为1.37%（n=5）。
2.7 稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12h注入液相色谱仪，依法测定。计算白头翁皂苷B4色谱峰面积的RSD为1.47%（n=6）。
2.8 回收率实验精密称取已知含量的白头翁药材粉末（过3号筛）6份，分别精密加入高、中、低质量浓度的对照品（相当于药材含量的80%，100%，120%，每一质量浓度2份），按上述方法测定分析，白头翁皂苷B4平均回收率分别为99.7%（n=6）本文经过多次实验摸索，发现由乙腈-0.1%磷酸系统在205 nm波长下基线平稳，分别选用不同比例的该流动相系统：乙腈-0.1%磷酸（30∶70）；乙腈-0.1%磷酸（29∶71）；乙腈-0.1%磷酸（25∶75），发现乙腈-0.1%磷酸比例为28∶72能够使白头翁皂苷B4得到较好分离，且重复性好。
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