返魂草中微量元素的提取分离研究-卫生类副高职称期刊
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1 仪器与试剂
1.1 材料与试剂返魂草产自延边地区。乙醇、丙酮、乙醚、硫酸、蒽酮均为分析纯。硒标准储备液均为国家标准溶液（NCS），实验用水均为二次蒸馏水及娃哈哈纯净水。
1.2 仪器及工作条件FZ102型微型植物粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；数显式电热恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司） ；FA2104N电子天平（上海精密科学仪器公司）；CW-2000型微波超声波协同萃取仪（上海新拓微波溶样测试技术有限公司）；TAS-990型原子吸收分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。石墨炉原子吸收仪器的工作条件见表1～2。实验所用玻璃仪器均经稀硝酸浸泡12 h以上，然后经自来水、蒸馏水、去离子水依次洗净烘干备用。
2 方法与结果
2.1 样品处理用蒸馏水反复冲洗返魂草，于60 ℃恒温箱中干燥，然后用微型植物粉碎机粉碎装瓶备用。
2.2 返魂草中硒多糖的提取
2.2.1 回流提取法称取返魂草全草用30～100目粉碎机粉碎，称取10.0 g置圆底烧瓶中，加入乙醚200 ml，回流提取70 min，然后抽滤，弃去滤液，将滤渣小心转移至烧瓶内，用乙醚冲净滤纸上的滤渣一起转移至圆底烧瓶内，再加入乙醚200 ml，回流提取60 min，同样方法进行抽滤转移，再用150 ml乙醚回流提取60 min，使滤液基本无色。将滤渣风干除去其中乙醚，转移至干净的圆底烧瓶中，用200 ml去离子水沸水回流3次，30 min/次，趁热过滤，合并滤液，将滤液至电炉上浓缩至50 ml，加入无水乙醇200 ml，使醇含量为80%。静置过夜，滤过。沉淀再加水溶解，加乙醇至醇含量为80%静置过夜，取沉淀分别用无水乙醇、丙酮依次洗涤3次，20 ml/次，置45 ℃烘干后可得棕色粗多糖0.51 g。
2.2.2 微波超声波协同提取法精确称量返魂草样品6份各10.00 g，根据单因素实验和正交实验得出的最佳条件，在最佳优化方案下即料液比为1∶35，提取功率为250 W,提取时间为180 s条件下提取，按照“2.2.1”项方法进行平行测定6次，得到10.00 g返魂草中粗多糖提取率分别为5.41%，5.56%，5.33%，5.28%，5.34%，5.45%，粗多糖平均提取率5.395%。
2.3 返魂草中粗硒多糖纯度测定
2.3.1 葡萄糖标准曲线的绘制将一定量葡萄糖标准品粉末于107 ℃烘干至恒重，精确称取葡萄糖标准品粉末0.020 g于100 ml容量瓶中，定容、摇匀。精确量取葡萄糖标准品溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml,分别置10 ml量瓶中，纯化水定容，摇匀，再分别精密量取2.0 ml,置干燥具塞试管中，加入蒽酮-硫酸试剂4.0 ml,立刻摇匀，冷却至室温置于暗处。同时以2.0 ml去离子水，加蒽酮-硫酸试剂4.0 ml作空白。在620 nm波长处测定吸收度。以葡萄糖含量（μg/ml）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标进行回归，得回归方程为：Y = 0.007 2X+ 0.008 7,R2=0.998 5。
2.3.2 粗硒多糖溶液的制备及纯度测定精确量取粗硒多糖0.030 g，加入去离子水溶解，转移至100 ml容量瓶中。精密量取配好溶液1.0，2.0，3.0 ml各3份，置干燥具塞试管中，各加蒽酮--硫酸试剂4.0 ml,立即摇匀，冷却至室温，按“2.3.1”项下操作。
粗硒多糖纯度按下式计算： 粗硒多糖纯度（%）=（A-0.0087）×100/0.0072×VW×106
（A:吸光度；W:量取粗硒多糖质量；V:取液量）
根据三组数据0.351,0.698,1.040计算得粗硒多糖平均纯度为15.9%，由返魂草中粗硒多糖平均提取率为5.395%（“2.2.2”所得），所以返魂草中硒多糖含量为5.395%×15.9%=0.86%。
2.4 加样回收率实验精密量取粗硒多糖溶液1.0,2.0,3.0 ml,分别加入葡萄糖标准品溶液1.0,2.0,3.0 ml置10 ml量瓶中，再分别量取4.0 ml蒽酮-硫酸试剂置干燥具塞试管中在620 nm 波长处测定吸收度。
2.5 精密度实验分别精密取同一供试液5 份，每份2.0 ml,置干燥具塞试管中，各加蒽酮-硫酸试剂4.0 ml,立即摇匀，冷却至室温， 按“2.3.1”项下操作，计算精密度。结果RSD为0.95%和1.17%。从表4中可以看出，本实验的相对标准偏差在5%以内，说明本实验的重现性好，测定结果可信。
2.6 返魂草粗硒多糖中硒元素的测定
2.6.1 硒标准曲线的绘制精确量取硒标准溶液1 ml,用纯水定容到1 000 ml,得到浓度为1μg/ml的母液，取母液0 , 0.4 , 0.8 , 1.2 ,1.6 , 2.0 ml定容到10 ml , 得Se浓度分别为0，0.04，0.08，0.12，0.16，0.20 μg/ml，用石墨炉原子吸收分光光度计在上述工作条件下测定其吸光度值。根据测定的吸光度值计算出回归方程和相关系数：回归方程Y=1.233 6X+0.002 1，（其中X为Se标准液浓度，Y为吸光度）；相关系数为0.999 8。
2.6.2 粗硒多糖溶液的配制精确称取返魂草粗硒多糖0.365 g，加纯净水定容于100 ml容量瓶中。然后分别取0.0，2.0，4.0，6.0，8.0 ml于10 ml容量瓶中，用纯净水定容至刻度。
2.6.3 硒元素的检测结果粗硒多糖中Se的含量计算公式为：
mSe=（A-0.0021） ×10×1001.2332×V×W
mSe——粗硒多糖中Se的含量；A——测定吸光度；V——取液量；W——称取粗多糖质量测定结果见表5。由以上4组数据得粗多糖平均含硒量为：mSe=24.33 +24.38+24.77+24.41）/4×0.365 = 24.47（μg / g）
2.7 精密度实验对粗糖样品液中Se元素进行吸光度值测定，结果见表6。从表6中可以看出，本实验的相对标准偏差RSD在5%以内，说明本实验的重复性好，测定结果可信。
2.8 准确度实验吸取一定量的样液进行返魂草粗多糖中Se的回收率实验。测定结果见表7。由表7可见，测量的回收率在一定范围之内，说明测量的准确度高。本文采用蒽酮-硫酸法测定返魂草中硒多糖的含量，用石墨炉原子吸收法测定硒多糖中的硒含量。
卫生类国家期刊 http://www.qikanba.com/
1 仪器与试剂
1.1 材料与试剂返魂草产自延边地区。乙醇、丙酮、乙醚、硫酸、蒽酮均为分析纯。硒标准储备液均为国家标准溶液（NCS），实验用水均为二次蒸馏水及娃哈哈纯净水。
1.2 仪器及工作条件FZ102型微型植物粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；数显式电热恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司） ；FA2104N电子天平（上海精密科学仪器公司）；CW-2000型微波超声波协同萃取仪（上海新拓微波溶样测试技术有限公司）；TAS-990型原子吸收分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。石墨炉原子吸收仪器的工作条件见表1～2。实验所用玻璃仪器均经稀硝酸浸泡12 h以上，然后经自来水、蒸馏水、去离子水依次洗净烘干备用。
2 方法与结果
2.1 样品处理用蒸馏水反复冲洗返魂草，于60 ℃恒温箱中干燥，然后用微型植物粉碎机粉碎装瓶备用。
2.2 返魂草中硒多糖的提取
2.2.1 回流提取法称取返魂草全草用30～100目粉碎机粉碎，称取10.0 g置圆底烧瓶中，加入乙醚200 ml，回流提取70 min，然后抽滤，弃去滤液，将滤渣小心转移至烧瓶内，用乙醚冲净滤纸上的滤渣一起转移至圆底烧瓶内，再加入乙醚200 ml，回流提取60 min，同样方法进行抽滤转移，再用150 ml乙醚回流提取60 min，使滤液基本无色。将滤渣风干除去其中乙醚，转移至干净的圆底烧瓶中，用200 ml去离子水沸水回流3次，30 min/次，趁热过滤，合并滤液，将滤液至电炉上浓缩至50 ml，加入无水乙醇200 ml，使醇含量为80%。静置过夜，滤过。沉淀再加水溶解，加乙醇至醇含量为80%静置过夜，取沉淀分别用无水乙醇、丙酮依次洗涤3次，20 ml/次，置45 ℃烘干后可得棕色粗多糖0.51 g。
2.2.2 微波超声波协同提取法精确称量返魂草样品6份各10.00 g，根据单因素实验和正交实验得出的最佳条件，在最佳优化方案下即料液比为1∶35，提取功率为250 W,提取时间为180 s条件下提取，按照“2.2.1”项方法进行平行测定6次，得到10.00 g返魂草中粗多糖提取率分别为5.41%，5.56%，5.33%，5.28%，5.34%，5.45%，粗多糖平均提取率5.395%。
2.3 返魂草中粗硒多糖纯度测定
2.3.1 葡萄糖标准曲线的绘制将一定量葡萄糖标准品粉末于107 ℃烘干至恒重，精确称取葡萄糖标准品粉末0.020 g于100 ml容量瓶中，定容、摇匀。精确量取葡萄糖标准品溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml,分别置10 ml量瓶中，纯化水定容，摇匀，再分别精密量取2.0 ml,置干燥具塞试管中，加入蒽酮-硫酸试剂4.0 ml,立刻摇匀，冷却至室温置于暗处。同时以2.0 ml去离子水，加蒽酮-硫酸试剂4.0 ml作空白。在620 nm波长处测定吸收度。以葡萄糖含量（μg/ml）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标进行回归，得回归方程为：Y = 0.007 2X+ 0.008 7,R2=0.998 5。
2.3.2 粗硒多糖溶液的制备及纯度测定精确量取粗硒多糖0.030 g，加入去离子水溶解，转移至100 ml容量瓶中。精密量取配好溶液1.0，2.0，3.0 ml各3份，置干燥具塞试管中，各加蒽酮--硫酸试剂4.0 ml,立即摇匀，冷却至室温，按“2.3.1”项下操作。
粗硒多糖纯度按下式计算： 粗硒多糖纯度（%）=（A-0.0087）×100/0.0072×VW×106
（A:吸光度；W:量取粗硒多糖质量；V:取液量）
根据三组数据0.351,0.698,1.040计算得粗硒多糖平均纯度为15.9%，由返魂草中粗硒多糖平均提取率为5.395%（“2.2.2”所得），所以返魂草中硒多糖含量为5.395%×15.9%=0.86%。
2.4 加样回收率实验精密量取粗硒多糖溶液1.0,2.0,3.0 ml,分别加入葡萄糖标准品溶液1.0,2.0,3.0 ml置10 ml量瓶中，再分别量取4.0 ml蒽酮-硫酸试剂置干燥具塞试管中在620 nm 波长处测定吸收度。
2.5 精密度实验分别精密取同一供试液5 份，每份2.0 ml,置干燥具塞试管中，各加蒽酮-硫酸试剂4.0 ml,立即摇匀，冷却至室温， 按“2.3.1”项下操作，计算精密度。结果RSD为0.95%和1.17%。从表4中可以看出，本实验的相对标准偏差在5%以内，说明本实验的重现性好，测定结果可信。
2.6 返魂草粗硒多糖中硒元素的测定
2.6.1 硒标准曲线的绘制精确量取硒标准溶液1 ml,用纯水定容到1 000 ml,得到浓度为1μg/ml的母液，取母液0 , 0.4 , 0.8 , 1.2 ,1.6 , 2.0 ml定容到10 ml , 得Se浓度分别为0，0.04，0.08，0.12，0.16，0.20 μg/ml，用石墨炉原子吸收分光光度计在上述工作条件下测定其吸光度值。根据测定的吸光度值计算出回归方程和相关系数：回归方程Y=1.233 6X+0.002 1，（其中X为Se标准液浓度，Y为吸光度）；相关系数为0.999 8。
2.6.2 粗硒多糖溶液的配制精确称取返魂草粗硒多糖0.365 g，加纯净水定容于100 ml容量瓶中。然后分别取0.0，2.0，4.0，6.0，8.0 ml于10 ml容量瓶中，用纯净水定容至刻度。
2.6.3 硒元素的检测结果粗硒多糖中Se的含量计算公式为：
mSe=（A-0.0021） ×10×1001.2332×V×W
mSe——粗硒多糖中Se的含量；A——测定吸光度；V——取液量；W——称取粗多糖质量测定结果见表5。由以上4组数据得粗多糖平均含硒量为：mSe=24.33 +24.38+24.77+24.41）/4×0.365 = 24.47（μg / g）
2.7 精密度实验对粗糖样品液中Se元素进行吸光度值测定，结果见表6。从表6中可以看出，本实验的相对标准偏差RSD在5%以内，说明本实验的重复性好，测定结果可信。
2.8 准确度实验吸取一定量的样液进行返魂草粗多糖中Se的回收率实验。测定结果见表7。由表7可见，测量的回收率在一定范围之内，说明测量的准确度高。本文采用蒽酮-硫酸法测定返魂草中硒多糖的含量，用石墨炉原子吸收法测定硒多糖中的硒含量。
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