高良姜抗炎症及细菌药力作用研究-畜牧兽医杂志核心期刊
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1 材料
1.1 材料与试剂
高良姜，人工种植3年，采于广东徐闻龙塘镇八角村。注射用双黄连冻干粉剂（哈药集团中药二厂）；消炎痛（山西云鹏制药有限公司）；伊文思蓝（Fluka，进口分装）；牛肉膏、蛋白胨、水解酪蛋白、琼脂粉（北京奥博星生物技术有限责任公司）；醋酸乙酯、无水乙醇、石油醚等均为国产分析纯。
1.2 动物
SPF级KM雌性小鼠，（20±2）g，1～1.5月龄，由本院实验动物中心提供。
1.3 菌种
金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，白色念珠菌，由本院病原生物学实验室提供。其中金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌和大肠杆菌采用MH培养基，培养24 h；白色念珠菌采用沙保培养基，培养48 h。
1.4 仪器
高效液相色谱-质谱联用仪（岛津LCMS-8000α型），旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司）；超声清洗仪（上海必能信超声有限公司）；电热恒温水浴锅（上海悦丰仪器有限公司）；752C紫外可见分光光度计（上海第三分析仪器厂）；电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）。
2.3 抗炎实验
2.3.1 对二甲苯致小鼠耳片肿胀的影响
雌性小鼠99只，（20±2）g，随机分为11组。按剂量腹腔注射给药，给药后30 min，于每只小鼠右耳片（两面）均匀涂抹二甲苯0.03 ml以诱发炎症，左耳不涂二甲苯作为对照；立即尾静脉注射0.5%伊文思蓝（0.1 ml/10 g）。30 min后将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下双耳，用直径为8 mm的打孔器在左、右耳同一部位打下圆耳片、称重，右耳与左耳重量之差即为肿胀度。采用SPSS软件统计分析，比较药物的抗炎作用，计算肿胀抑制率。结果表明，Ⅰ、Ⅳ各剂量均能显着降低二甲苯致小鼠耳片肿胀度，且呈现一定的量效关系，其中高、中剂量效果尤为显着，优于消炎痛；Ⅲ无明显的作用。结果见表3。表3 高良姜各药液对二甲苯致小鼠耳片肿胀度的影响（略）
2.3.2 对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响
上述实验称重之后，将左右耳片剪碎，浸入2 ml丙酮-生理盐水（7∶3）的溶液中，在38℃水浴48 h条件下浸出染料；离心，上清液于590 nm处比色，测光密度值。采用SPSS软件统计分析，比较药物对毛细血管通透性的影响。结果显示，Ⅰ、Ⅳ各剂量均能有效地抑制小鼠毛细血管通透性，且其抑制效果随剂量呈现一定的量效关系，其中Ⅳ高剂量效果尤为显着，优于消炎痛；Ⅲ无明显的作用。结果见表4。
2.4 体外抗菌实验
将Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ用灭菌MH（沙保）液体培养基稀释为100 mg/ml生药（双黄连为400 mg/ml）的溶液作为原液，备用。采用液体试管二倍稀释法，将各药液用MH（沙保）液体培养基连续稀释至第10管，第11管不加药液作为阳性对照，然后分别接种金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌107CFU，40 μl，第12管不加药液和菌液作为阴性对照，各2个平行。置37℃恒温箱中培养24 h（48 h），观察各菌的生长情况。以无肉眼可见菌生长的最低药物浓度为该药的最低抑菌浓度（MIC）。
将上述未见菌生长各管的培养物混匀后，吸取0.1 ml均匀涂布于MH或沙保琼脂平板上，各2个平行，置37℃恒温箱中培养24 h（48 h），观察结果。以菌落平均数少于5个的最低药物浓度作为该药的最低杀菌浓度（MBC）。结果表明，Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ对金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌及白色念珠菌有不同程度的抑菌和杀菌作用，其中Ⅳ的作用最强，Ⅰ次之，Ⅲ较差，作用均强于双黄连；但Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ对大肠杆菌均无作用。
3 结果
本实验成功地将高良姜提取物Ⅰ中的辣味物质分离出来，并对分离后各部分的镇痛、抗炎、抗菌活性进行了比较分析。实验表明，高良姜提取物Ⅳ有显着的镇痛和抗炎作用，且活性呈剂量依赖性，对金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌及白色念珠菌具有较强的抑菌和杀菌作用，其作用与提取物Ⅰ基本相当。由此可以得出结论：高良姜芳香类化合物的抗菌、镇痛和抗炎活性成分主要为黄酮类化合物，辣味部位可分离出来另作特色开发，这样更有利于拓宽高良姜药用资源的用途
临床内科杂志核心期刊 http://www.qikanba.com/
1 材料
1.1 材料与试剂
高良姜，人工种植3年，采于广东徐闻龙塘镇八角村。注射用双黄连冻干粉剂（哈药集团中药二厂）；消炎痛（山西云鹏制药有限公司）；伊文思蓝（Fluka，进口分装）；牛肉膏、蛋白胨、水解酪蛋白、琼脂粉（北京奥博星生物技术有限责任公司）；醋酸乙酯、无水乙醇、石油醚等均为国产分析纯。
1.2 动物
SPF级KM雌性小鼠，（20±2）g，1～1.5月龄，由本院实验动物中心提供。
1.3 菌种
金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，白色念珠菌，由本院病原生物学实验室提供。其中金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌和大肠杆菌采用MH培养基，培养24 h；白色念珠菌采用沙保培养基，培养48 h。
1.4 仪器
高效液相色谱-质谱联用仪（岛津LCMS-8000α型），旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司）；超声清洗仪（上海必能信超声有限公司）；电热恒温水浴锅（上海悦丰仪器有限公司）；752C紫外可见分光光度计（上海第三分析仪器厂）；电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）。
2.3 抗炎实验
2.3.1 对二甲苯致小鼠耳片肿胀的影响
雌性小鼠99只，（20±2）g，随机分为11组。按剂量腹腔注射给药，给药后30 min，于每只小鼠右耳片（两面）均匀涂抹二甲苯0.03 ml以诱发炎症，左耳不涂二甲苯作为对照；立即尾静脉注射0.5%伊文思蓝（0.1 ml/10 g）。30 min后将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下双耳，用直径为8 mm的打孔器在左、右耳同一部位打下圆耳片、称重，右耳与左耳重量之差即为肿胀度。采用SPSS软件统计分析，比较药物的抗炎作用，计算肿胀抑制率。结果表明，Ⅰ、Ⅳ各剂量均能显着降低二甲苯致小鼠耳片肿胀度，且呈现一定的量效关系，其中高、中剂量效果尤为显着，优于消炎痛；Ⅲ无明显的作用。结果见表3。表3 高良姜各药液对二甲苯致小鼠耳片肿胀度的影响（略）
2.3.2 对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响
上述实验称重之后，将左右耳片剪碎，浸入2 ml丙酮-生理盐水（7∶3）的溶液中，在38℃水浴48 h条件下浸出染料；离心，上清液于590 nm处比色，测光密度值。采用SPSS软件统计分析，比较药物对毛细血管通透性的影响。结果显示，Ⅰ、Ⅳ各剂量均能有效地抑制小鼠毛细血管通透性，且其抑制效果随剂量呈现一定的量效关系，其中Ⅳ高剂量效果尤为显着，优于消炎痛；Ⅲ无明显的作用。结果见表4。
2.4 体外抗菌实验
将Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ用灭菌MH（沙保）液体培养基稀释为100 mg/ml生药（双黄连为400 mg/ml）的溶液作为原液，备用。采用液体试管二倍稀释法，将各药液用MH（沙保）液体培养基连续稀释至第10管，第11管不加药液作为阳性对照，然后分别接种金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌107CFU，40 μl，第12管不加药液和菌液作为阴性对照，各2个平行。置37℃恒温箱中培养24 h（48 h），观察各菌的生长情况。以无肉眼可见菌生长的最低药物浓度为该药的最低抑菌浓度（MIC）。
将上述未见菌生长各管的培养物混匀后，吸取0.1 ml均匀涂布于MH或沙保琼脂平板上，各2个平行，置37℃恒温箱中培养24 h（48 h），观察结果。以菌落平均数少于5个的最低药物浓度作为该药的最低杀菌浓度（MBC）。结果表明，Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ对金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌及白色念珠菌有不同程度的抑菌和杀菌作用，其中Ⅳ的作用最强，Ⅰ次之，Ⅲ较差，作用均强于双黄连；但Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ对大肠杆菌均无作用。
3 结果
本实验成功地将高良姜提取物Ⅰ中的辣味物质分离出来，并对分离后各部分的镇痛、抗炎、抗菌活性进行了比较分析。实验表明，高良姜提取物Ⅳ有显着的镇痛和抗炎作用，且活性呈剂量依赖性，对金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌及白色念珠菌具有较强的抑菌和杀菌作用，其作用与提取物Ⅰ基本相当。由此可以得出结论：高良姜芳香类化合物的抗菌、镇痛和抗炎活性成分主要为黄酮类化合物，辣味部位可分离出来另作特色开发，这样更有利于拓宽高良姜药用资源的用途
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