蜂房中羟基苯甲酸和原儿茶酸含量的测定研究-护理学杂志核心期刊
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1 仪器与试药
高效液相色谱仪：Waters600E泵，WatersPAD996二极管阵列检测器；旋转蒸发仪（SB–1000,N–1000,日本东京理化株式会社）；紫外分光光度仪（UV–2501PC，日本Shimadzu公司）；电子分析天平（UV120D，日本Shimadzu公司）。高效液相色谱用试剂：甲醇（色谱纯），水（三蒸水），三氟乙酸（分析纯）；没食子酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110836-200302、110648-200318、110754-200307）。实验室用药材，由沈阳药科大学中药教研室孙启时教授鉴定为蜂房（Nidus Vespae）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Kromasil ODS-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇（A） 水（三氟乙酸调pH至5）（B）；梯度洗脱程序：0 min （0% A），15 min （8% A），18 min （12% A），30 min （15% A），45 min （18% A）；体积流量：1.0 ml／min；检测波长254 nm；柱温25℃。色谱图见图1。
2.2 供试品溶液的制备称取剪碎的蜂房药材（辽宁沈阳）2 g，用20倍水煎煮3次，水煎液用滤纸过滤，所得滤液浓缩至约10 ml；将浓缩液醇沉12 h，之后过滤得醇沉液；醇沉液减压浓缩至无醇味，用水25 ml分次定量转移至分液漏斗中，正丁醇等体积萃取3次，萃取液合并，旋转蒸发至干，用甲醇溶解并定容至10 ml容量瓶中，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备精密称没食子酸对照品8.0 mg、对羟基苯甲酸对照品7.6 mg和原儿茶酸对照品11.1 mg,分别置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶液并稀释到刻度，摇匀即得，作为对照品储备液。分别精密吸取上述贮备液1.0 ml，置同一10 ml量瓶中，用甲醇溶液并稀释到刻度，摇匀即得，作为对照品溶液。
2.4 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液0.04，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，1.8 ml，分别置于2 ml量瓶中，用甲醇溶液并稀释到刻度，摇匀，分别进样5 μl。以各成分峰面积为纵坐标（Y），质量浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，计算回归方程：Y没食子酸=8.97×106X+7 317.1, r=0.999 6,线性范围1.6～72.0 μg/ml；Y对羟基苯甲酸=1.95×107X-73 247,r=0.999 5,线性范围1.52～68.4 μg/ml；Y原儿茶酸=5.01×107X-169 012，r=0.999 8，线性范围2.22～99.9 μg/ml。精密度实验取同一供试品溶液，分别连续进样6次，测定没食子酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸峰面积，结果RSD分别为0.41％，0.56%和0.72％，均小于2％，表明仪器精密度良好。
2.5 重复性实验取同一批蜂房样品6份（辽宁沈阳），按供试品溶液的制备方法制备成6份，分别进样5 μl，结果，没食子酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸峰面积的RSD分别为0.83％，0.74%和0.95％，均小于2％，表明方法重复性良好。稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，24 h进样5 μl。结果，没食子酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸的峰面积的RSD分别为1.72％，1.61%和2.19％，均小于5％，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.6 回收率实验精密称取6份已知含量的辽宁沈阳蜂房（没食子酸含量0.256 mg·g-1，对羟基苯甲酸0.365 mg·g-1，原儿茶酸0.327 mg·g-1）1 g,分别加入没食子酸、对羟基苯甲酸和原儿茶酸对照品溶液适量，按“2.2”项下操作，计算回收率。结果没食子酸平均回收率98.9%，RSD=1.01%；对羟基苯甲酸平均回收率98.4%，RSD=1.18%；原儿茶酸平均回收97.3%，RSD=1.18%。不同产地样品测定分别取不同产地的蜂房1 g，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别进样5 μl，测定峰面积，根据标准曲线计算样品中没食子酸、对羟基苯甲酸和原儿茶酸的含量。
畜牧兽医杂志核心期刊 http://www.qikanba.com/
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：Waters600E泵，WatersPAD996二极管阵列检测器；旋转蒸发仪（SB–1000,N–1000,日本东京理化株式会社）；紫外分光光度仪（UV–2501PC，日本Shimadzu公司）；电子分析天平（UV120D，日本Shimadzu公司）。高效液相色谱用试剂：甲醇（色谱纯），水（三蒸水），三氟乙酸（分析纯）；没食子酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110836-200302、110648-200318、110754-200307）。实验室用药材，由沈阳药科大学中药教研室孙启时教授鉴定为蜂房（Nidus Vespae）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Kromasil ODS-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇（A） 水（三氟乙酸调pH至5）（B）；梯度洗脱程序：0 min （0% A），15 min （8% A），18 min （12% A），30 min （15% A），45 min （18% A）；体积流量：1.0 ml／min；检测波长254 nm；柱温25℃。色谱图见图1。
2.2 供试品溶液的制备称取剪碎的蜂房药材（辽宁沈阳）2 g，用20倍水煎煮3次，水煎液用滤纸过滤，所得滤液浓缩至约10 ml；将浓缩液醇沉12 h，之后过滤得醇沉液；醇沉液减压浓缩至无醇味，用水25 ml分次定量转移至分液漏斗中，正丁醇等体积萃取3次，萃取液合并，旋转蒸发至干，用甲醇溶解并定容至10 ml容量瓶中，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备精密称没食子酸对照品8.0 mg、对羟基苯甲酸对照品7.6 mg和原儿茶酸对照品11.1 mg,分别置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶液并稀释到刻度，摇匀即得，作为对照品储备液。分别精密吸取上述贮备液1.0 ml，置同一10 ml量瓶中，用甲醇溶液并稀释到刻度，摇匀即得，作为对照品溶液。
2.4 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液0.04，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，1.8 ml，分别置于2 ml量瓶中，用甲醇溶液并稀释到刻度，摇匀，分别进样5 μl。以各成分峰面积为纵坐标（Y），质量浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，计算回归方程：Y没食子酸=8.97×106X+7 317.1, r=0.999 6,线性范围1.6～72.0 μg/ml；Y对羟基苯甲酸=1.95×107X-73 247,r=0.999 5,线性范围1.52～68.4 μg/ml；Y原儿茶酸=5.01×107X-169 012，r=0.999 8，线性范围2.22～99.9 μg/ml。精密度实验取同一供试品溶液，分别连续进样6次，测定没食子酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸峰面积，结果RSD分别为0.41％，0.56%和0.72％，均小于2％，表明仪器精密度良好。
2.5 重复性实验取同一批蜂房样品6份（辽宁沈阳），按供试品溶液的制备方法制备成6份，分别进样5 μl，结果，没食子酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸峰面积的RSD分别为0.83％，0.74%和0.95％，均小于2％，表明方法重复性良好。稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，24 h进样5 μl。结果，没食子酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸的峰面积的RSD分别为1.72％，1.61%和2.19％，均小于5％，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.6 回收率实验精密称取6份已知含量的辽宁沈阳蜂房（没食子酸含量0.256 mg·g-1，对羟基苯甲酸0.365 mg·g-1，原儿茶酸0.327 mg·g-1）1 g,分别加入没食子酸、对羟基苯甲酸和原儿茶酸对照品溶液适量，按“2.2”项下操作，计算回收率。结果没食子酸平均回收率98.9%，RSD=1.01%；对羟基苯甲酸平均回收率98.4%，RSD=1.18%；原儿茶酸平均回收97.3%，RSD=1.18%。不同产地样品测定分别取不同产地的蜂房1 g，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别进样5 μl，测定峰面积，根据标准曲线计算样品中没食子酸、对羟基苯甲酸和原儿茶酸的含量。
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