蒲公英多糖的药力作用研究-医学论文写作指导

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1   材料与仪器
　　1.1   材料蒲公英，采自黑龙江省五大连池市。
　　1.2 器材UEIP503、UEOS503型中空纤维膜组件，752N紫外可见分光光度计。
　　2 方法
　　2.1 多糖提取工艺流程蒲公英根干粉→热水浸提→离心分离→微滤→超滤分离→乙醇沉淀→脱蛋白→真空干燥→蒲公英粗多糖。
　　2.2 超滤及其预处理浸提液在超滤前用0.45 μm微滤膜除去粗提液中的固形物以降低对超滤膜的污染。控制超滤压力为0.08 MPa，将蒲公英多糖的浸提液先用孔径10 KDa的超滤膜进行超滤处理。滤过液继续采用6KDa的超滤膜进行超滤处理，分别测定10 KDa超滤膜的截留液、6 KDa超滤膜的截留液、6 KDa超滤膜的滤过液中的总糖、还原糖含量，计算各部分多糖含量，分析蒲公英多糖的大致分子量分布情况。图1显示了各部分的比例和含量。
　　2.3 多糖含量的测定总糖含量的测定采用蒽酮－浓硫酸法［4］；还原糖含量的测定采用3,5－二硝基水杨酸比色法［4，5］。多糖含量=总糖含量-还原糖含量［6］
　　2.4 蛋白含量的检测蒲公英粗多糖溶液经木瓜蛋白酶和三氯乙酸（TCA）脱蛋白后，测定其在260 nm和280 nm处的吸光值［7］。
　　2.5 多糖清除·OH的测定清除·OH试验的方法：采用Fenton反应体系［8］。清除率E（%）计算公式为：E（%）=［A0－（Ax－Ai）/A0 ］×100%
　　式中：A0为空白对照液的吸光度；Ax为加入多糖溶液后的吸光度；Ai为不加显色剂H2O2 多糖溶液的本底的吸光度。
　　2.6 多糖清除O2-·的测定多糖清除O2-·的试验采用邻苯三酚自氧化法［9］。清除率E（%）计算公式为：E（%）=（A对照－A样品）/（A对照－A空白）式中：A空白空白组的吸光度；A对照为对照组的吸光度；A样品为多糖液的吸光度。
　　3 结果
　　蒲公英多糖清除·OH的作用分别配5 mg/ml DP1、DP2溶液，根据Fenton反应，其对·OH的清除率见表1及图2。由表1、图2可知，蒲公英多糖DP1、 DP2对·OH有清除作用，并随着多糖加入量的增加清除率上升，即清除率与多糖的用量之间存在一定的量-效关系。其中DP2的清除率高于DP1，当浓度达到5 mg/ml时 DP2的清除率达到61.21%而DP1为49.78%。
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