木耳粗多糖中糖含量的测定研究-本科护理论文
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本实验的提取剂采用蒸馏水，尽管木耳粗多糖得率低于酸碱及各种酶参与的提取，但环保且提取的木耳多糖没有有害物质的残留，而且含糖量比较高，适合应用于保健及治疗过程。通过正交实验对木耳多糖的提取工艺条件进行优化，在料水比为1∶45、水提温度为80℃，水提时间为1 h，水提次数为3次的条件下比批量生产木耳多糖的产率高出3～5倍。
1 仪器与材料
电子天平；HH-601超级恒温水浴；GYS-2不锈钢电热恒温水浴箱；HZQ-C空气浴震荡器；GZX-DH-50X55-S电热恒温干燥箱；双蒸水器；T6 新世纪紫外分光光度计；721可见分光光度计；pH计；粉碎机等；所有试剂均为分析纯。
木耳购自本市超市，产地吉林蛟河。Wistar大鼠，雌性，体质量（200±20）g，购自吉林大学基础医学院，许可证号：SCXK-（吉）2003-001。
2 方法与结果
2.1 因素及水平考察根据前期摸索实验得知木耳的粒度决定料水比例，粒度越小，黏度越低。将木耳磨成粉状，在粒度固定的情况下，采取相同的浸泡时间，影响提取的主要因素有料水比、温度、提取次数以及提取时间。每个因素选择3水平，进行正交实验设计L9（34）［2］，考察上述4个因素对木耳多糖提取效率的影响，实验因素水平如表1所示。
2.2 提取方法取木耳子实体10 g，按L9（34）正交表设计方案进行实验，蒸馏水煎煮，合并煎液，过滤，滤液浓缩至50 ml，sevag法脱蛋白3次，根据木耳粗多糖的分子量选择10 000～12 000的透析袋，蒸馏水透析3 d，浓缩后，用2倍于浓缩液的无水乙醇进行醇沉，根据乙醇的挥发温度在80℃水浴下挥干，得灰白色片状物。蒽酮法测定多糖含量。正交结果见表2。结合对正交实验数据的分析可得出提取工艺为A2B2C1D3，即料水比为1∶45，水提温度为80℃，水提时间为1 h，水提次数为3次。根据极差值可知，各因素对提取率影响的大小依次为水提次数、水提时间、料水比和水提温度。
2.3 木耳粗多糖中糖含量的测定
2.3.1 对照品溶液的制备称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.102 0 g，置于100 ml容量瓶中，分别吸取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 ml定容至10 ml，即得不同浓度的标准液。
2.3.2 样品溶液的制备分别精密称取不同条件下提取的木耳粗多糖10 mg，置于100 ml的容量瓶中，80℃恒温水浴溶解，定容，即得样品。
2.3.3 绘制标准曲线分别取不同浓度标准液2 ml，加入2%的蒽酮-硫酸试剂（内含1%硫脲，下同）5 ml，沸水浴中加热10 min，取出后流水冷却，在620 nm波长下比色，得回归方程：Y=6.880 4X+0.001， R2 =0.991 4 ， 浓度与A值所做标准曲线如图1。
2.3.4 样品中糖的含量的测定精确称取不同条件下木耳粗多糖1 ml+1 ml H2O，加入2%的蒽酮-硫酸试剂5 ml，沸水浴中加热10min，取出后流水冷却，在620 nm波长下比色（见表3）。木耳粗多糖中平均总含糖量为50.1%。
2.4 木耳多糖对血清SOD及肝脏体外脂质过氧化的影响Wistar大鼠10只，购回后在紫外消毒、温度23℃的室内自由喂清洁级大鼠专用饲料和水进行1周的适应性饲养后，随机分空白组和药物组，药物组每天给予1.5 ml浓度为1%的木耳多糖溶液（按15 mg/kg体重，为人类摄取木耳中木耳多糖的10倍），5 d后乌拉坦麻醉，腹主动脉取血并取肝脏。
2.4.1 对血清SOD的影响血清SOD的制备及SOD测定液的配制［3］，取0.4 ml血清，加入0.4 ml乙醇-氯仿混合液（两者体积比为5∶3），振荡2 min，4 000 r/min离心5 min以除去蛋白质，上清液为SOD抽提液。试剂及反应条件：取3支试管，分别为对照管、样品管1和2（正常和药物实验动物血清）。反应条件如下：样品管分别取SOD 抽取液100 μl，加入4.8 ml的pH 8.2Tris-HCl缓冲液（含0.1 mmol/EDTA），对照管加入4.9 ml的pH8.2Tris-HCl缓冲液（含0.1 mmol/EDTA），混匀，在25℃恒温水浴中保存10 min后各加入6 mmol/L邻苯三酚100 μl，邻苯三酚加入后，摇匀，5 min内测定对照管和样品管的吸光率A对照和A样品，测定波长为320 nm，利用邻苯三酚法测定SOD抽取液的A值并计算抑制率。抑制率越高，SOD活性越高，否则相反。实验结果的值进行t检验。
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本实验的提取剂采用蒸馏水，尽管木耳粗多糖得率低于酸碱及各种酶参与的提取，但环保且提取的木耳多糖没有有害物质的残留，而且含糖量比较高，适合应用于保健及治疗过程。通过正交实验对木耳多糖的提取工艺条件进行优化，在料水比为1∶45、水提温度为80℃，水提时间为1 h，水提次数为3次的条件下比批量生产木耳多糖的产率高出3～5倍。
1 仪器与材料
电子天平；HH-601超级恒温水浴；GYS-2不锈钢电热恒温水浴箱；HZQ-C空气浴震荡器；GZX-DH-50X55-S电热恒温干燥箱；双蒸水器；T6 新世纪紫外分光光度计；721可见分光光度计；pH计；粉碎机等；所有试剂均为分析纯。
木耳购自本市超市，产地吉林蛟河。Wistar大鼠，雌性，体质量（200±20）g，购自吉林大学基础医学院，许可证号：SCXK-（吉）2003-001。
2 方法与结果
2.1 因素及水平考察根据前期摸索实验得知木耳的粒度决定料水比例，粒度越小，黏度越低。将木耳磨成粉状，在粒度固定的情况下，采取相同的浸泡时间，影响提取的主要因素有料水比、温度、提取次数以及提取时间。每个因素选择3水平，进行正交实验设计L9（34）［2］，考察上述4个因素对木耳多糖提取效率的影响，实验因素水平如表1所示。
2.2 提取方法取木耳子实体10 g，按L9（34）正交表设计方案进行实验，蒸馏水煎煮，合并煎液，过滤，滤液浓缩至50 ml，sevag法脱蛋白3次，根据木耳粗多糖的分子量选择10 000～12 000的透析袋，蒸馏水透析3 d，浓缩后，用2倍于浓缩液的无水乙醇进行醇沉，根据乙醇的挥发温度在80℃水浴下挥干，得灰白色片状物。蒽酮法测定多糖含量。正交结果见表2。结合对正交实验数据的分析可得出提取工艺为A2B2C1D3，即料水比为1∶45，水提温度为80℃，水提时间为1 h，水提次数为3次。根据极差值可知，各因素对提取率影响的大小依次为水提次数、水提时间、料水比和水提温度。
2.3 木耳粗多糖中糖含量的测定
2.3.1 对照品溶液的制备称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.102 0 g，置于100 ml容量瓶中，分别吸取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 ml定容至10 ml，即得不同浓度的标准液。
2.3.2 样品溶液的制备分别精密称取不同条件下提取的木耳粗多糖10 mg，置于100 ml的容量瓶中，80℃恒温水浴溶解，定容，即得样品。
2.3.3 绘制标准曲线分别取不同浓度标准液2 ml，加入2%的蒽酮-硫酸试剂（内含1%硫脲，下同）5 ml，沸水浴中加热10 min，取出后流水冷却，在620 nm波长下比色，得回归方程：Y=6.880 4X+0.001， R2 =0.991 4 ， 浓度与A值所做标准曲线如图1。
2.3.4 样品中糖的含量的测定精确称取不同条件下木耳粗多糖1 ml+1 ml H2O，加入2%的蒽酮-硫酸试剂5 ml，沸水浴中加热10min，取出后流水冷却，在620 nm波长下比色（见表3）。木耳粗多糖中平均总含糖量为50.1%。
2.4 木耳多糖对血清SOD及肝脏体外脂质过氧化的影响Wistar大鼠10只，购回后在紫外消毒、温度23℃的室内自由喂清洁级大鼠专用饲料和水进行1周的适应性饲养后，随机分空白组和药物组，药物组每天给予1.5 ml浓度为1%的木耳多糖溶液（按15 mg/kg体重，为人类摄取木耳中木耳多糖的10倍），5 d后乌拉坦麻醉，腹主动脉取血并取肝脏。
2.4.1 对血清SOD的影响血清SOD的制备及SOD测定液的配制［3］，取0.4 ml血清，加入0.4 ml乙醇-氯仿混合液（两者体积比为5∶3），振荡2 min，4 000 r/min离心5 min以除去蛋白质，上清液为SOD抽提液。试剂及反应条件：取3支试管，分别为对照管、样品管1和2（正常和药物实验动物血清）。反应条件如下：样品管分别取SOD 抽取液100 μl，加入4.8 ml的pH 8.2Tris-HCl缓冲液（含0.1 mmol/EDTA），对照管加入4.9 ml的pH8.2Tris-HCl缓冲液（含0.1 mmol/EDTA），混匀，在25℃恒温水浴中保存10 min后各加入6 mmol/L邻苯三酚100 μl，邻苯三酚加入后，摇匀，5 min内测定对照管和样品管的吸光率A对照和A样品，测定波长为320 nm，利用邻苯三酚法测定SOD抽取液的A值并计算抑制率。抑制率越高，SOD活性越高，否则相反。实验结果的值进行t检验。
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