山茱萸含量测定方法研究-护理管理杂志投稿
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1 仪器与试药
1.1 试剂与药材薄层色谱用硅胶G 、硅胶H、羧甲基纤维素钠（大连海洋化工厂）；丹皮酚对照品（批号：0708-9704），熊果酸对照品（批号：110742-200516），盐酸小檗碱对照品（批号：0713-9906），菝契皂苷元对照品（批号：11074-200401），马钱苷对照品（批号：11640-200502）均由中国药品生物制品检定所提供，阴性样品由厂家提供。甲醇、乙腈（色谱纯）；知柏地黄丸（河南宛西制药股份有限公司；其它试剂均为AR级。
1.2 仪器岛津LC-2010C高效液相色谱系统（日本岛津公司；包括：真空脱气机，四元梯度泵，自动进样器，DAD二极管阵列检测器），Solution色谱工作站（日本岛津公司）；FA2104电子天平（上海精密仪器科学有限公司）。
2.2 含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取马钱苷对照品，加80%甲醇制成每毫升含马钱苷30 μg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备取本品粉末约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25 ml，称定重量，超声处理（功率 250 W，频率 40 kHz）20 min，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺山茱萸的阴性样品适量，按供试品溶液的制备方法制备，即得。
2.2.4 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），ODS预柱；四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05％磷酸溶液（1∶6∶4∶89）为流动相；检测波长236 nm；流速1.0 ml/min；柱温40℃；理论塔板数按马钱苷峰计算不低于4 500。
2.2.5 专属性试验照上述色谱条件，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液20 μl，分别注入液相色谱仪。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照色谱在此保留时间无干扰，证明本法可行。结果见图1～3。
2.2.6 标准曲线与线性范围精密称取常温减压干燥24 h的马钱苷对照品10.13 mg，置25 ml量瓶中，用80%甲醇溶解并稀释至刻度，即得含马钱苷0.405 2 mg/ml的马钱苷对照品母液，并稀释成不同浓度的马钱苷对照品子液。结果表明马钱苷在0.040 52～4.052μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，其回归方程为Y=2E+06x+5 664.1（r=1.000 0）。
2.2.7 进样重复性分别精密吸取对照品溶液20 μl，连续进样6次，测得峰面积的RSD<1.5％。
2.2.8 精密度实验
中间精密度：分别取供试品溶液在0，1，2，4，6，10，12 h，分别进样20 μl，测得峰面积的RSD<1.5％，表明供试品溶液较稳定。重复性实验：取同一批供试样品，按样品测定项下方法，连续测定6次，测得含量结果的RSD<1.5％。表明样品重现性良好。 加样回收率实验精密称取已知含量的样品约0.25 g，分别定量加入对照品，照供试品溶液制备方法和样品项下的方法测定。样品测定结果精密称取3批样品，制成供试品溶液，分别吸取对照品溶液、供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，依法测定，计算马钱苷含量，结果分别为0.774 2，0.779 5，0.776 4 mg/g （n=3） 。
3 结果
有关山茱萸含量测定方法的研究颇多，主要是以熊果酸、齐墩果酸和马钱苷等为含量检测指标。山茱萸中熊果酸含量测定的文献报道虽比较多，但熊果酸存在于许多药材如山楂、马鞭草、车前草、紫珠、女贞子、怀牛膝等，非山茱萸的特有成分，并且熊果酸与齐墩果酸这两种成分在天然植物中又是共生共存的。熊果酸与齐墩果酸均属三萜酸，在化学结构上是差向异构体，两者极性几乎无差别。有实验表明，在薄层板上应用《中国药典》条件无法分离开，应用《中国药典》条件测得的熊果酸含量，实际为按熊果酸计算熊果酸与齐墩果酸含量的总和。马钱苷为山茱萸主要有效成分，测定其含量，可为山茱萸及其制剂提供质量控制的有效手段。实验过程中曾采用甲醇－水、乙腈－水、四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05％磷酸溶液等流动相系统。结果以四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05％磷酸溶液（1∶6∶4∶89）作为流动相能够将马钱苷峰与杂质峰较好的分离。
发表医学论文 http://www.qikanba.com/
1 仪器与试药
1.1 试剂与药材薄层色谱用硅胶G 、硅胶H、羧甲基纤维素钠（大连海洋化工厂）；丹皮酚对照品（批号：0708-9704），熊果酸对照品（批号：110742-200516），盐酸小檗碱对照品（批号：0713-9906），菝契皂苷元对照品（批号：11074-200401），马钱苷对照品（批号：11640-200502）均由中国药品生物制品检定所提供，阴性样品由厂家提供。甲醇、乙腈（色谱纯）；知柏地黄丸（河南宛西制药股份有限公司；其它试剂均为AR级。
1.2 仪器岛津LC-2010C高效液相色谱系统（日本岛津公司；包括：真空脱气机，四元梯度泵，自动进样器，DAD二极管阵列检测器），Solution色谱工作站（日本岛津公司）；FA2104电子天平（上海精密仪器科学有限公司）。
2.2 含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取马钱苷对照品，加80%甲醇制成每毫升含马钱苷30 μg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备取本品粉末约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25 ml，称定重量，超声处理（功率 250 W，频率 40 kHz）20 min，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺山茱萸的阴性样品适量，按供试品溶液的制备方法制备，即得。
2.2.4 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），ODS预柱；四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05％磷酸溶液（1∶6∶4∶89）为流动相；检测波长236 nm；流速1.0 ml/min；柱温40℃；理论塔板数按马钱苷峰计算不低于4 500。
2.2.5 专属性试验照上述色谱条件，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液20 μl，分别注入液相色谱仪。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照色谱在此保留时间无干扰，证明本法可行。结果见图1～3。
2.2.6 标准曲线与线性范围精密称取常温减压干燥24 h的马钱苷对照品10.13 mg，置25 ml量瓶中，用80%甲醇溶解并稀释至刻度，即得含马钱苷0.405 2 mg/ml的马钱苷对照品母液，并稀释成不同浓度的马钱苷对照品子液。结果表明马钱苷在0.040 52～4.052μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，其回归方程为Y=2E+06x+5 664.1（r=1.000 0）。
2.2.7 进样重复性分别精密吸取对照品溶液20 μl，连续进样6次，测得峰面积的RSD<1.5％。
2.2.8 精密度实验
中间精密度：分别取供试品溶液在0，1，2，4，6，10，12 h，分别进样20 μl，测得峰面积的RSD<1.5％，表明供试品溶液较稳定。重复性实验：取同一批供试样品，按样品测定项下方法，连续测定6次，测得含量结果的RSD<1.5％。表明样品重现性良好。 加样回收率实验精密称取已知含量的样品约0.25 g，分别定量加入对照品，照供试品溶液制备方法和样品项下的方法测定。样品测定结果精密称取3批样品，制成供试品溶液，分别吸取对照品溶液、供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，依法测定，计算马钱苷含量，结果分别为0.774 2，0.779 5，0.776 4 mg/g （n=3） 。
3 结果
有关山茱萸含量测定方法的研究颇多，主要是以熊果酸、齐墩果酸和马钱苷等为含量检测指标。山茱萸中熊果酸含量测定的文献报道虽比较多，但熊果酸存在于许多药材如山楂、马鞭草、车前草、紫珠、女贞子、怀牛膝等，非山茱萸的特有成分，并且熊果酸与齐墩果酸这两种成分在天然植物中又是共生共存的。熊果酸与齐墩果酸均属三萜酸，在化学结构上是差向异构体，两者极性几乎无差别。有实验表明，在薄层板上应用《中国药典》条件无法分离开，应用《中国药典》条件测得的熊果酸含量，实际为按熊果酸计算熊果酸与齐墩果酸含量的总和。马钱苷为山茱萸主要有效成分，测定其含量，可为山茱萸及其制剂提供质量控制的有效手段。实验过程中曾采用甲醇－水、乙腈－水、四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05％磷酸溶液等流动相系统。结果以四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05％磷酸溶液（1∶6∶4∶89）作为流动相能够将马钱苷峰与杂质峰较好的分离。
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