对干姜大孔树脂吸附纯化工艺的深入研究-护理自考本科论文
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1 仪器与试药
LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津公司）；CLASS-VP工作站（日本岛津公司）；BP211D电子分析天平（十万分之一），BP121S电子分析天平（万分之一）（德国Sartorius公司）；W201B恒温水浴锅（上海申胜生物技术有限公司）。
甲醇、乙腈（色谱纯，TEDIA公司），其它试剂均为分析纯（成都市科龙化工试剂厂）。辣椒碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0773-9506，含量测定用）。DM301，D101，DA201大孔吸附树脂（天津农药有限公司树脂分公司），D140大孔吸附树脂（晨光化工研究院） ，AB-8大孔吸附树脂（天津市光复精细化工研究所）。干姜药材2008-01购自四川犍为干姜GAP基地。
2 方法及结果
2.1 色谱条件的建立色谱条件：色谱柱为Hypersil BDS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特分析仪器有限公司）；流动相为乙腈∶0.1%磷酸水∶甲醇（55∶44∶1）；检测波长为280 nm；柱温为30℃；流速为1.0 ml·min-1。
2.2 对照品溶液的配制及标准曲线的制备辣椒素对照品溶液的制备：精密称取辣椒碱对照品适量，置同一量瓶中，加甲醇制成每毫升含辣椒碱0.26mg的溶液，即得。系统适应性溶液的制备：分别精密吸取1 ml辣椒碱对照品溶液及1 ml供试品溶液混合均匀，即可。
2.3.1 树脂的预处理与装柱取大孔吸附树脂用乙醇浸泡24 h，乙醇湿法装柱，乙醇洗脱，检测流出的乙醇液，至乙醇液与水混合（1∶5） 不呈白色浑浊，再以蒸馏水洗至无醇味。
2.3.2 大孔吸附树脂类型的选择以吸附量和解吸率为指标，对D101 ，DA201 ，DM301，D140，AB-8大孔吸附树脂进行考察，以确定纯化干姜姜酚类物质的大孔吸附树脂类型。各类大孔吸附树脂物理性能见表1。精密量取各型树脂（干重约1g）置150 ml具塞锥形瓶中，分别精密加入川芎提取液75 ml（约含生药量0.1 g·ml-1）静置24 h，充分吸附后，滤过，测定滤液中剩余姜酚量，计算吸附量；将吸附平衡后的树脂转移至锥形瓶中，用100 ml 95%的乙醇解吸，测定解吸液中姜酚的含量，计算解吸率。吸附量=上样液中姜酚量（mg）-泄漏液中姜酚量（mg），解吸率（%） =［解吸液姜酚量（mg）/吸附量（mg）］×100%
2.3.3 上柱药液浓度的确定量取一定体积的药液，分别稀释成不同浓度，通过装有约6 g AB-8树脂的吸附柱中，以2～3 ml·min-1流速进行吸附，收集流出液，测定姜酚量，计算树脂比吸附量见表3。结果表明，上柱药液生药浓度为0.15 g·ml-1时，AB-8大孔吸附树脂对姜酚的比吸附量最大，故确定上柱药液生药浓度为0.15 g·ml-1。
2.3.4 比上柱量的确定比上柱量表示达吸附终点时，单位质量干树脂吸附夹带成分的总和，表示树脂吸附、承载的总体能力，比上柱量越大则树脂的承载能力越强。将总体积为120 ml的药液（生药0.15 g·ml-1）通过约6 g AB-8型树脂柱，以2～3 ml·min-1的流速进行动态吸附，分段收集流出液，每份10 ml。测定流出液中姜酚量，绘制动态泄漏曲线（见图1），由泄露曲线确定比上柱量为 2.25 g·g-1（药材：干树脂）。
2.3.5 洗脱溶媒的确定按上述确定的工艺条件，精密量取上样药液90 ml（生药0.15 g·ml-1），依法上柱，先用蒸馏水6 BV洗脱，再依次用30％乙醇，50％乙醇，60％乙醇，70％乙醇，80％乙醇，95％乙醇各5 BV洗脱，收集洗脱液，测定姜酚量及固形物量，计算洗脱率。见表4。洗脱率（%）=［洗脱液中姜酚量（mg）/树脂吸附姜酚量（mg）］×100%。
结果表明，50%以上浓度的乙醇都可将姜酚不同程度的洗脱下来，且80％乙醇能将大部分姜酚洗脱下来，故确定以80％乙醇作为干姜姜酚类成分的洗脱溶媒；蒸馏水、30％乙醇洗脱时均有一定量的固形物存在，说明蒸馏水、30％乙醇洗脱达到纯化了姜酚类成分。
2.6 工艺验证实验上述确定的工艺条件，量取3份0.15 g·ml-1药液90 ml进行验证实验。结果见表6。精制度（%）=（80%乙醇洗脱液固形物中姜酚含量/上柱液固形物中姜酚含量）× 100 。结果表明，干姜提取物经大孔树脂纯化后有效地降低了固形物的含量，提高了姜酚的含量，且该工艺稳定、可行。干姜主要有效成分有挥发油、姜酚类、二苯基庚烷三大类成分［2］。其中姜酚是干姜呈多种药理作用的主要功能因子［3～5］。本文对大孔吸附树脂纯化干姜姜酚类成分的工艺条件进行了研究。
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1 仪器与试药
LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津公司）；CLASS-VP工作站（日本岛津公司）；BP211D电子分析天平（十万分之一），BP121S电子分析天平（万分之一）（德国Sartorius公司）；W201B恒温水浴锅（上海申胜生物技术有限公司）。
甲醇、乙腈（色谱纯，TEDIA公司），其它试剂均为分析纯（成都市科龙化工试剂厂）。辣椒碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0773-9506，含量测定用）。DM301，D101，DA201大孔吸附树脂（天津农药有限公司树脂分公司），D140大孔吸附树脂（晨光化工研究院） ，AB-8大孔吸附树脂（天津市光复精细化工研究所）。干姜药材2008-01购自四川犍为干姜GAP基地。
2 方法及结果
2.1 色谱条件的建立色谱条件：色谱柱为Hypersil BDS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特分析仪器有限公司）；流动相为乙腈∶0.1%磷酸水∶甲醇（55∶44∶1）；检测波长为280 nm；柱温为30℃；流速为1.0 ml·min-1。
2.2 对照品溶液的配制及标准曲线的制备辣椒素对照品溶液的制备：精密称取辣椒碱对照品适量，置同一量瓶中，加甲醇制成每毫升含辣椒碱0.26mg的溶液，即得。系统适应性溶液的制备：分别精密吸取1 ml辣椒碱对照品溶液及1 ml供试品溶液混合均匀，即可。
2.3.1 树脂的预处理与装柱取大孔吸附树脂用乙醇浸泡24 h，乙醇湿法装柱，乙醇洗脱，检测流出的乙醇液，至乙醇液与水混合（1∶5） 不呈白色浑浊，再以蒸馏水洗至无醇味。
2.3.2 大孔吸附树脂类型的选择以吸附量和解吸率为指标，对D101 ，DA201 ，DM301，D140，AB-8大孔吸附树脂进行考察，以确定纯化干姜姜酚类物质的大孔吸附树脂类型。各类大孔吸附树脂物理性能见表1。精密量取各型树脂（干重约1g）置150 ml具塞锥形瓶中，分别精密加入川芎提取液75 ml（约含生药量0.1 g·ml-1）静置24 h，充分吸附后，滤过，测定滤液中剩余姜酚量，计算吸附量；将吸附平衡后的树脂转移至锥形瓶中，用100 ml 95%的乙醇解吸，测定解吸液中姜酚的含量，计算解吸率。吸附量=上样液中姜酚量（mg）-泄漏液中姜酚量（mg），解吸率（%） =［解吸液姜酚量（mg）/吸附量（mg）］×100%
2.3.3 上柱药液浓度的确定量取一定体积的药液，分别稀释成不同浓度，通过装有约6 g AB-8树脂的吸附柱中，以2～3 ml·min-1流速进行吸附，收集流出液，测定姜酚量，计算树脂比吸附量见表3。结果表明，上柱药液生药浓度为0.15 g·ml-1时，AB-8大孔吸附树脂对姜酚的比吸附量最大，故确定上柱药液生药浓度为0.15 g·ml-1。
2.3.4 比上柱量的确定比上柱量表示达吸附终点时，单位质量干树脂吸附夹带成分的总和，表示树脂吸附、承载的总体能力，比上柱量越大则树脂的承载能力越强。将总体积为120 ml的药液（生药0.15 g·ml-1）通过约6 g AB-8型树脂柱，以2～3 ml·min-1的流速进行动态吸附，分段收集流出液，每份10 ml。测定流出液中姜酚量，绘制动态泄漏曲线（见图1），由泄露曲线确定比上柱量为 2.25 g·g-1（药材：干树脂）。
2.3.5 洗脱溶媒的确定按上述确定的工艺条件，精密量取上样药液90 ml（生药0.15 g·ml-1），依法上柱，先用蒸馏水6 BV洗脱，再依次用30％乙醇，50％乙醇，60％乙醇，70％乙醇，80％乙醇，95％乙醇各5 BV洗脱，收集洗脱液，测定姜酚量及固形物量，计算洗脱率。见表4。洗脱率（%）=［洗脱液中姜酚量（mg）/树脂吸附姜酚量（mg）］×100%。
结果表明，50%以上浓度的乙醇都可将姜酚不同程度的洗脱下来，且80％乙醇能将大部分姜酚洗脱下来，故确定以80％乙醇作为干姜姜酚类成分的洗脱溶媒；蒸馏水、30％乙醇洗脱时均有一定量的固形物存在，说明蒸馏水、30％乙醇洗脱达到纯化了姜酚类成分。
2.6 工艺验证实验上述确定的工艺条件，量取3份0.15 g·ml-1药液90 ml进行验证实验。结果见表6。精制度（%）=（80%乙醇洗脱液固形物中姜酚含量/上柱液固形物中姜酚含量）× 100 。结果表明，干姜提取物经大孔树脂纯化后有效地降低了固形物的含量，提高了姜酚的含量，且该工艺稳定、可行。干姜主要有效成分有挥发油、姜酚类、二苯基庚烷三大类成分［2］。其中姜酚是干姜呈多种药理作用的主要功能因子［3～5］。本文对大孔吸附树脂纯化干姜姜酚类成分的工艺条件进行了研究。
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