蚂蟥冻干粉针的含量测定实验报告-中专护理毕业论文
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1 仪器与材料
岛津LC－10AT高效液相色谱系统，包括SPD－10A紫外检测器和Anastar色谱工作站；whitmanin对照品，本研究室自制（纯度 > 98%）；蚂蟥药材（长沙县医药公司提供，经沈阳药科大学崔征教授鉴定）；乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。
2.3 蚂蟥冻干粉针的含量测定
2.3.1 测定波长的选择分别取whitmanin和甘露醇的水溶液，在200～400 nm的波长范围内进行紫外扫描，结果甘露醇溶液在此范围内无吸收，对样品测定无干扰，whitmanin水溶液在220 nm和 280 nm波长处有吸收峰。因220 nm处存在末端吸收，因此选择280 nm作为检测波长。whitmanin的扫描图谱见图1。
2.3.2 对照品溶液的制备
精密称取whitmanin对照品适量，加重蒸去离子水配制成 1 mg·ml-1的溶液，作为对照品储备液。
2.3.3色谱条件与系统适应性实验色谱柱为Hypersil－C18（200 mm × 4.6 mm，5 μm，300 。A）（依利特公司，大连）；流动相为乙腈-水（2∶98），加入0.03%的KH2PO4，再用36%的醋酸调pH值3.80；检测波长280 nm；流速1.0 ml·min-1；柱温35℃；进样量20 μl。理论塔板数按whitmanin计算不低于4 000，whitmnin与相邻峰的分离度大于1.5。whitmanin对照品和蚂蟥冻干粉针的HPLC图谱见图2。
2.3.4 方法可行性研究
标准曲线与线性关系考察：取“2.3.2”项下对照品溶液，用重蒸去离子水稀释成浓度为0.186，0.371，0.561，0.743，0.942 mg·ml-1的系列溶液，依“2.3.3”项进样。以whitmanin峰面积为纵坐标（A），whitmanin质量浓度（mg·ml-1）为横坐标（C），绘制标准曲线，得回归方程：A = 2.266 × 106 C－5.429 × 103，r = 0.999 5。说明在0.186～0.942 mg·ml-1内线性关系良好。
加样回收率实验：取已知含量的冻干粉针6份，分别置于2 ml容量瓶中，加少量水溶解后稀释至刻度，摇匀。分别向6个容量瓶中按高、中、低3个浓度分别加入对照品，加入量分别相当于注射液中whitmanin含量的80％，100％和120％，按“2.2.3”项下进行测定，计算回收率和RSD。结果平均回收率为99.8%，RSD＝1.8%。
精密度实验：取同一批新制备样品，按“2.2.3”项下方法连续测定6次，结果吸光度的RSD为1.2%，重复性实验：取同一批冻干粉针若干支，制备6份样品溶液，并按“2.2.3”项下方法进行测定，结果吸光度的RSD为1.9%，稳定性实验：取同一批新制备样品，分别于0，2，4，6，8，12，24 h按“2.2.3”项下方法测定，结果样品溶液在24 h内稳定。
2.3.5 样品含量测定取3批样品各2支，分别置于2 ml容量瓶中，各加少量水溶解后稀释至刻度，摇匀，按“2.2.3”项下方法进样，记录色谱图，取峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中whitmanin的含量。结果见表1。
2.4 蚂蟥冻干粉针的稳定性考察将蚂蟥冻干粉针在温度（25 ± 2）°C，相对湿度（60 ± 10）%的条件下放置12个月，分别考察0，1，2，3，6，12月6个时间点的稳定性情况。结果，蚂蟥冻干粉针的形状、溶液澄明度、溶液pH值及主成分whitmanin的含量在12个月之中变化非常小，表明蚂蟥冻干粉针的稳定性良好。
3结果
由于蚂蟥活性成分溶液pH值呈酸性，因此本制品在酸性条件下稳定性强于碱性条件。加入冻干保护剂氯化钠后，制剂在pH达到7时仍很稳定，但为了制剂的安全，作者选定在冻干前将提取液的pH值调节为（6.0 ± 0.5）。将蚂蟥提取液制成冻干粉针，并对其进行了含量测定和稳定性考察。结果表明，蚂蟥冻干粉针性质稳定，且制备工艺和方法适宜推广应用。
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1 仪器与材料
岛津LC－10AT高效液相色谱系统，包括SPD－10A紫外检测器和Anastar色谱工作站；whitmanin对照品，本研究室自制（纯度 > 98%）；蚂蟥药材（长沙县医药公司提供，经沈阳药科大学崔征教授鉴定）；乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。
2.3 蚂蟥冻干粉针的含量测定
2.3.1 测定波长的选择分别取whitmanin和甘露醇的水溶液，在200～400 nm的波长范围内进行紫外扫描，结果甘露醇溶液在此范围内无吸收，对样品测定无干扰，whitmanin水溶液在220 nm和 280 nm波长处有吸收峰。因220 nm处存在末端吸收，因此选择280 nm作为检测波长。whitmanin的扫描图谱见图1。
2.3.2 对照品溶液的制备
精密称取whitmanin对照品适量，加重蒸去离子水配制成 1 mg·ml-1的溶液，作为对照品储备液。
2.3.3色谱条件与系统适应性实验色谱柱为Hypersil－C18（200 mm × 4.6 mm，5 μm，300 。A）（依利特公司，大连）；流动相为乙腈-水（2∶98），加入0.03%的KH2PO4，再用36%的醋酸调pH值3.80；检测波长280 nm；流速1.0 ml·min-1；柱温35℃；进样量20 μl。理论塔板数按whitmanin计算不低于4 000，whitmnin与相邻峰的分离度大于1.5。whitmanin对照品和蚂蟥冻干粉针的HPLC图谱见图2。
2.3.4 方法可行性研究
标准曲线与线性关系考察：取“2.3.2”项下对照品溶液，用重蒸去离子水稀释成浓度为0.186，0.371，0.561，0.743，0.942 mg·ml-1的系列溶液，依“2.3.3”项进样。以whitmanin峰面积为纵坐标（A），whitmanin质量浓度（mg·ml-1）为横坐标（C），绘制标准曲线，得回归方程：A = 2.266 × 106 C－5.429 × 103，r = 0.999 5。说明在0.186～0.942 mg·ml-1内线性关系良好。
加样回收率实验：取已知含量的冻干粉针6份，分别置于2 ml容量瓶中，加少量水溶解后稀释至刻度，摇匀。分别向6个容量瓶中按高、中、低3个浓度分别加入对照品，加入量分别相当于注射液中whitmanin含量的80％，100％和120％，按“2.2.3”项下进行测定，计算回收率和RSD。结果平均回收率为99.8%，RSD＝1.8%。
精密度实验：取同一批新制备样品，按“2.2.3”项下方法连续测定6次，结果吸光度的RSD为1.2%，重复性实验：取同一批冻干粉针若干支，制备6份样品溶液，并按“2.2.3”项下方法进行测定，结果吸光度的RSD为1.9%，稳定性实验：取同一批新制备样品，分别于0，2，4，6，8，12，24 h按“2.2.3”项下方法测定，结果样品溶液在24 h内稳定。
2.3.5 样品含量测定取3批样品各2支，分别置于2 ml容量瓶中，各加少量水溶解后稀释至刻度，摇匀，按“2.2.3”项下方法进样，记录色谱图，取峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中whitmanin的含量。结果见表1。
2.4 蚂蟥冻干粉针的稳定性考察将蚂蟥冻干粉针在温度（25 ± 2）°C，相对湿度（60 ± 10）%的条件下放置12个月，分别考察0，1，2，3，6，12月6个时间点的稳定性情况。结果，蚂蟥冻干粉针的形状、溶液澄明度、溶液pH值及主成分whitmanin的含量在12个月之中变化非常小，表明蚂蟥冻干粉针的稳定性良好。
3结果
由于蚂蟥活性成分溶液pH值呈酸性，因此本制品在酸性条件下稳定性强于碱性条件。加入冻干保护剂氯化钠后，制剂在pH达到7时仍很稳定，但为了制剂的安全，作者选定在冻干前将提取液的pH值调节为（6.0 ± 0.5）。将蚂蟥提取液制成冻干粉针，并对其进行了含量测定和稳定性考察。结果表明，蚂蟥冻干粉针性质稳定，且制备工艺和方法适宜推广应用。
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