银杏萜类内酯含量测定研究-大专护士护理毕业论文
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1 器材
1.1 材料与试剂银杏叶由浙江康恩贝制药股份有限公司提供；银杏萜类内酯（白果内酯及银杏内酯A、B、C）标准品购自中国药品生物制品检定所；HPLC甲醇为色谱纯试剂；乙醇为分析纯试剂。
1.2 仪器DFY-500摇摆式粉碎机（上海鼎广机械设备有限公司制造）；DZF真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司制造）；RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂制造）；FSH22可调闪式提取器（郑州金星科技有限公司制造）；Waters液相色谱仪（安捷伦科技有限公司制造）。
2 方法
2.1 银杏萜类内酯的闪式提取采用正交实验L9（34）进行闪式提取银杏萜类内酯的研究，正交实验的因素水平表见表1。称取粉碎后的干燥银杏叶粉末40 g倒入到闪式提取器的铁罐中，加入适量乙醇溶液，打开闪式提取器，破碎细胞壁。实验完成后取出，冷却，过滤，经旋转蒸发仪浓缩至无醇味即得浸膏。
2.2 色谱条件色谱柱为Diamonsil（TM）C18（250 mm×4.6 mm, 5 μm）；流动相为甲醇-水（30∶70），流速0.8 ml/min；蒸发光散射检测器（ELSD）：漂移管温度104 ℃，载气流速2.9 ml/min；柱温为30℃。表1 因素水平（略）
2.3 线性范围考察分别精密称取对照品GA，GB，GC，BB 各3，3，3，4 mg置于10 ml量瓶中甲醇加至刻度，摇匀即得混合对照品溶液，取5，2.50，0.50，0.25，0.05 ml,分别置于10 ml量瓶中加甲醇到刻度，摇匀，即得混合对照品溶液，分别吸取溶液20 μl，注入HPLC仪测定。以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。
2.4 样品溶液的制备取实验得到浸膏，加10 ml水和1滴2%盐酸，用醋酸乙酯振摇萃取4次（15，10，10，10 ml）。合并后用5%醋酸钠20 ml洗涤，洗涤液用10 ml醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯萃取液后用水洗涤两次，20 ml/次。合并水层，用10 ml醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯萃取液，回收醋酸乙酯后加10 ml甲醇，用于进样。
2.5 精密度实验取最小浓度对照品溶液，重复进样5次，记录色谱峰面积，计算RSD。重复性实验精密称取同批银杏叶粉末40 g，共5份，按“样品溶液的制备”项下方法操作，制备样品溶液6份，进行含量测定，计算RSD。稳定性实验取一个样品，每隔2 h进样1次，共进样5次，考察供试品溶液的稳定性。回收率实验取已测知含量的样品5份，分别精密加入对照品适量，依HPLC法测定，计算回收率，RSD。最佳工艺验证按照优化工艺条件操作，测定银杏萜类内酯含量。
3 结果
3.1 HPLC结果及标准品线性关系在前述色谱条件下，各种银杏内酯能够很好地分离（见图1），以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。回归方程为：白果内酯Y=0.563 12X-2.567 32，R=0.998；银杏内酯A Y = 0.34856X-3.15764，R=0.997；银杏内酯B Y = 0.456 78X-4.456 24，R=0.997；银杏内酯C Y=0.323 55X-3.234 13，R=0.999。
3.2 闪式提取银杏萜内酯正交实验结果在本实验范围内见表2，各因素对提取效果的影响程度依次为：A（颗粒大小）>B（提取时间）>C（乙醇浓度）>D（液固比）。A因素影响差异有高度显着性，B和C因素影响差异有显着性。比较k值，得较好的因素水平组合为A2B1C3D2，与单因素实验的最优因子组合一致。即颗粒大小为50目，提取时间为5 min，乙醇浓度为60%，液固比为20∶1。
3.3 工艺验证实验根据优化的正交实验结果颗粒大小为50目，提取时间为5 min，乙醇浓度为60%，液固比为20∶1，进行3批银杏叶的萜类内酯提取率分别是1.700，1.716，1.720 mg/g。平均提取率为1.712 mg/g，说明正交设计筛选的工艺是合理的。
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1 器材
1.1 材料与试剂银杏叶由浙江康恩贝制药股份有限公司提供；银杏萜类内酯（白果内酯及银杏内酯A、B、C）标准品购自中国药品生物制品检定所；HPLC甲醇为色谱纯试剂；乙醇为分析纯试剂。
1.2 仪器DFY-500摇摆式粉碎机（上海鼎广机械设备有限公司制造）；DZF真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司制造）；RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂制造）；FSH22可调闪式提取器（郑州金星科技有限公司制造）；Waters液相色谱仪（安捷伦科技有限公司制造）。
2 方法
2.1 银杏萜类内酯的闪式提取采用正交实验L9（34）进行闪式提取银杏萜类内酯的研究，正交实验的因素水平表见表1。称取粉碎后的干燥银杏叶粉末40 g倒入到闪式提取器的铁罐中，加入适量乙醇溶液，打开闪式提取器，破碎细胞壁。实验完成后取出，冷却，过滤，经旋转蒸发仪浓缩至无醇味即得浸膏。
2.2 色谱条件色谱柱为Diamonsil（TM）C18（250 mm×4.6 mm, 5 μm）；流动相为甲醇-水（30∶70），流速0.8 ml/min；蒸发光散射检测器（ELSD）：漂移管温度104 ℃，载气流速2.9 ml/min；柱温为30℃。表1 因素水平（略）
2.3 线性范围考察分别精密称取对照品GA，GB，GC，BB 各3，3，3，4 mg置于10 ml量瓶中甲醇加至刻度，摇匀即得混合对照品溶液，取5，2.50，0.50，0.25，0.05 ml,分别置于10 ml量瓶中加甲醇到刻度，摇匀，即得混合对照品溶液，分别吸取溶液20 μl，注入HPLC仪测定。以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。
2.4 样品溶液的制备取实验得到浸膏，加10 ml水和1滴2%盐酸，用醋酸乙酯振摇萃取4次（15，10，10，10 ml）。合并后用5%醋酸钠20 ml洗涤，洗涤液用10 ml醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯萃取液后用水洗涤两次，20 ml/次。合并水层，用10 ml醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯萃取液，回收醋酸乙酯后加10 ml甲醇，用于进样。
2.5 精密度实验取最小浓度对照品溶液，重复进样5次，记录色谱峰面积，计算RSD。重复性实验精密称取同批银杏叶粉末40 g，共5份，按“样品溶液的制备”项下方法操作，制备样品溶液6份，进行含量测定，计算RSD。稳定性实验取一个样品，每隔2 h进样1次，共进样5次，考察供试品溶液的稳定性。回收率实验取已测知含量的样品5份，分别精密加入对照品适量，依HPLC法测定，计算回收率，RSD。最佳工艺验证按照优化工艺条件操作，测定银杏萜类内酯含量。
3 结果
3.1 HPLC结果及标准品线性关系在前述色谱条件下，各种银杏内酯能够很好地分离（见图1），以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。回归方程为：白果内酯Y=0.563 12X-2.567 32，R=0.998；银杏内酯A Y = 0.34856X-3.15764，R=0.997；银杏内酯B Y = 0.456 78X-4.456 24，R=0.997；银杏内酯C Y=0.323 55X-3.234 13，R=0.999。
3.2 闪式提取银杏萜内酯正交实验结果在本实验范围内见表2，各因素对提取效果的影响程度依次为：A（颗粒大小）>B（提取时间）>C（乙醇浓度）>D（液固比）。A因素影响差异有高度显着性，B和C因素影响差异有显着性。比较k值，得较好的因素水平组合为A2B1C3D2，与单因素实验的最优因子组合一致。即颗粒大小为50目，提取时间为5 min，乙醇浓度为60%，液固比为20∶1。
3.3 工艺验证实验根据优化的正交实验结果颗粒大小为50目，提取时间为5 min，乙醇浓度为60%，液固比为20∶1，进行3批银杏叶的萜类内酯提取率分别是1.700，1.716，1.720 mg/g。平均提取率为1.712 mg/g，说明正交设计筛选的工艺是合理的。
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