半夏蛋白性质与提取分离研究-医药销售毕业论文
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半夏蛋白的一般性质
目前，主要采用凝胶渗透色谱分析、光谱测定、SDS-聚丙烯酰胺凝胶、圆二色性等技术对半夏蛋白的成分结构和性质进行了的研究。研究表明半夏蛋白的分子量约为44 kD，含有两个色氨酸，两个酪氨酸和一对二硫键；它可以解聚成四个亚基，各亚基之间以氢键彼此连接维持稳定的构象，其 N- 端存在着多个氨基酸残基，不含己糖。从掌叶半夏中提取的半夏蛋白却含有 18 种氨基酸，其中天冬氨酸含量高，半胱氨酸含量较低，氨基末端为丙氨酸，其pI值在 4.3 至 8.15 之间，具有较强的热稳定性和抗酶解能力［3，4，7］。
半夏蛋白中 α- 螺旋含量较少，β- 折叠和 β- 转角含量较多，一定浓度的 SDS 能使 α- 螺旋的含量急剧增加，认为是它们构成了半夏蛋白的主要骨架。6 mol/L 盐酸胍可使半夏蛋白解聚，又可以用递减式分步透析法使变性解聚的半夏蛋白重天然化，且重天然化的半夏蛋白分子大小、亚基结构、肽键构型和生物活性也保持不变［7，8］。
半夏蛋白的紧密结构及晶体结构是由分子中的氢键、二硫键、范德华力等多种次级键共同维系的，故具有较强的热稳定性和抗酶解能力。然而，半夏蛋白的真实空间构象与功能的关系，各亚基在聚集体中的空间排列以及亚基之间的接触位点和作用等诸多的问题还需更深入的研究。
半夏蛋白的分离与纯化
最早研究半夏蛋白分离提取的是20世纪 80 年代陶宗晋等［4］，其所采用的硫酸铵盐析与温差结晶相结合的方法被认为是提取半夏蛋白的经典之作。其操作步骤是榨取三叶半夏块茎鲜汁，冻融去除不溶物；加饱和的硫酸铵沉淀，在室温下盐析后过滤，再经透析处理，溶液置于 10℃ 过夜，离心得到蛋白质溶液；然后在 28～30℃ 下结晶，24 h 开始出现晶体，一星期便可完全结晶；将所得结晶蛋白用硫酸铵透析平衡去除去沉淀，再用磷酸缓冲液透析， 在室温下半夏蛋白晶体便可沿透析袋壁析出。
首次从掌叶半夏中提取出半夏蛋白的是上海医科大学的孙光星等［5］，其方法与前不同的是利用了有机溶剂分离沉淀法。首先将块茎洗净去皮用生理盐水匀浆，离心所得上清液冷却至 4℃后，加入 2 倍体积 4℃ 丙酮进行沉淀；所得粗蛋白溶解于0.9%NaCl 溶液后，在 4℃ 下对蒸馏水透析 48 h，离心除去沉淀得上清液；最后用冰冻真空干燥得到半夏蛋白。
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半夏蛋白的一般性质
目前，主要采用凝胶渗透色谱分析、光谱测定、SDS-聚丙烯酰胺凝胶、圆二色性等技术对半夏蛋白的成分结构和性质进行了的研究。研究表明半夏蛋白的分子量约为44 kD，含有两个色氨酸，两个酪氨酸和一对二硫键；它可以解聚成四个亚基，各亚基之间以氢键彼此连接维持稳定的构象，其 N- 端存在着多个氨基酸残基，不含己糖。从掌叶半夏中提取的半夏蛋白却含有 18 种氨基酸，其中天冬氨酸含量高，半胱氨酸含量较低，氨基末端为丙氨酸，其pI值在 4.3 至 8.15 之间，具有较强的热稳定性和抗酶解能力［3，4，7］。
半夏蛋白中 α- 螺旋含量较少，β- 折叠和 β- 转角含量较多，一定浓度的 SDS 能使 α- 螺旋的含量急剧增加，认为是它们构成了半夏蛋白的主要骨架。6 mol/L 盐酸胍可使半夏蛋白解聚，又可以用递减式分步透析法使变性解聚的半夏蛋白重天然化，且重天然化的半夏蛋白分子大小、亚基结构、肽键构型和生物活性也保持不变［7，8］。
半夏蛋白的紧密结构及晶体结构是由分子中的氢键、二硫键、范德华力等多种次级键共同维系的，故具有较强的热稳定性和抗酶解能力。然而，半夏蛋白的真实空间构象与功能的关系，各亚基在聚集体中的空间排列以及亚基之间的接触位点和作用等诸多的问题还需更深入的研究。
半夏蛋白的分离与纯化
最早研究半夏蛋白分离提取的是20世纪 80 年代陶宗晋等［4］，其所采用的硫酸铵盐析与温差结晶相结合的方法被认为是提取半夏蛋白的经典之作。其操作步骤是榨取三叶半夏块茎鲜汁，冻融去除不溶物；加饱和的硫酸铵沉淀，在室温下盐析后过滤，再经透析处理，溶液置于 10℃ 过夜，离心得到蛋白质溶液；然后在 28～30℃ 下结晶，24 h 开始出现晶体，一星期便可完全结晶；将所得结晶蛋白用硫酸铵透析平衡去除去沉淀，再用磷酸缓冲液透析， 在室温下半夏蛋白晶体便可沿透析袋壁析出。
首次从掌叶半夏中提取出半夏蛋白的是上海医科大学的孙光星等［5］，其方法与前不同的是利用了有机溶剂分离沉淀法。首先将块茎洗净去皮用生理盐水匀浆，离心所得上清液冷却至 4℃后，加入 2 倍体积 4℃ 丙酮进行沉淀；所得粗蛋白溶解于0.9%NaCl 溶液后，在 4℃ 下对蒸馏水透析 48 h，离心除去沉淀得上清液；最后用冰冻真空干燥得到半夏蛋白。
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