丹芪合剂对末期肾衰竭的干预作用研究-中国医药期刊
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1 材料
1.1 动物24只雄性SD大鼠，体质量174～204g，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司［SCXK（沪） 2003-0002］。
1.2 药物和试剂链脲佐菌素（streptozotocin，STZ，美国Sigma）；依那普利（扬子江制药厂）。丹芪合剂为丹参、黄芪等中药提取物干粉，自制。血糖、甘油三酯、总胆固醇、肌酐和尿蛋白检测试剂盒（迈克科技有限公司）。山羊抗大鼠BMP-7多克隆抗体（Santa cruz），兔抗大鼠FN多克隆抗体和生物素化山羊抗兔IgG （武汉Boster公司）， Ultra SensitiveTMSP超敏试剂盒（KIT-9709/9719）和DAB显色试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司）；。
2 方法
2.1 糖尿病模型的制备大鼠尾静脉注射溶于pH 4.5，0.01 mol/L的无菌柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的链脲佐菌素，剂量为50mg/kg，正常对照组于尾静脉注射STZ溶媒；注射后48 h尾静脉采血测血糖 ,凡血糖值大于或等于16.7 mmol/ L的大鼠作为糖尿病大鼠。
2.2 分组分为正常对照组（A组） 、糖尿病组（B组） 、糖尿病丹芪合剂组（C组）， 按2 g·kg -1·d -1给药和糖尿病依那普利组（D组）， 按10 mg·kg - 1·d - 1给药，各组均为6只。喂以普通饲料，自由饮水。
2.3 血、尿及肾组织采集于实验12周处死各组大鼠，处死前代谢笼收集24 h尿；心脏穿刺采血；肾脏经反复灌洗后，称重，一侧肾脏置-80℃冰箱保存供RT-PCR检测用，另一侧肾脏用4%多聚甲醛固定，供石蜡切片用。
2.4 免疫组织化学3 μm厚肾组织石蜡切片，微波修复抗原，采用SP法检测BMP-7和SABC法检测FN，以PBS作阴性对照，DAB染色。BMP-7在高倍镜（400×）下计数10个视野的阳性肾小管数，取均值；FN在显微镜测微尺（0.5网形目镜尺）下计数十字交叉点与FN阳性染色表达重合的点数，计数十个视野（400×），取均值。
2.6 用氧化酶法测血糖CHOD-PAP法测总胆固醇，GPO-POD法测甘油三酯，不去蛋白终点法测血肌酐，考马斯亮蓝法测尿蛋白，按试剂盒说明书操作。
3 结果
各组生化指标及肾脏指数的变化糖尿病组的血糖、甘油三酯和总胆固醇、血肌酐及肾脏指数均显着高于正常对照组（P< 0.01或P< 0.05），出现明显的尿蛋白（P< 0.01）；丹芪合剂和依那普利组与糖尿病组比较，除血糖外，甘油三酯和总胆固醇、血肌酐及肾脏指数均明显下降，有显着性差异（P< 0.01），但丹芪合剂和依那普利组之间无显着性差异。肾组织形态学变化PAS染色显示糖尿病组大鼠部分肾小管腔扩张，肾小管上皮细胞空泡变性，细胞萎缩和脱落，伴PAS染色阳性物质沉积增多；而丹芪合剂和依那普利治疗组病变较糖尿病组大鼠相对较轻。丹芪合剂和依那普利对BMP-7和FN蛋白表达的影响免疫组化结果显示正常对照组BMP-7蛋白高表达于集合管和肾小管胞浆，肾间质及肾血管外膜也有少量表达，但肾小球未见阳性表达；FN沿肾小管基膜呈线性表达；糖尿病组大鼠肾组织BMP-7的表达明显低于正常对照组，而FN蛋白的表达明显增多。丹芪合剂和依那普利治疗组，肾小管BMP-7蛋白的表达高于糖尿病组，差异有统计学意义。同时FN蛋白的表达丹芪合剂和依那普利治疗组明显低于糖尿病组。
制药学论文发表 http://www.qikanba.com/
1 材料
1.1 动物24只雄性SD大鼠，体质量174～204g，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司［SCXK（沪） 2003-0002］。
1.2 药物和试剂链脲佐菌素（streptozotocin，STZ，美国Sigma）；依那普利（扬子江制药厂）。丹芪合剂为丹参、黄芪等中药提取物干粉，自制。血糖、甘油三酯、总胆固醇、肌酐和尿蛋白检测试剂盒（迈克科技有限公司）。山羊抗大鼠BMP-7多克隆抗体（Santa cruz），兔抗大鼠FN多克隆抗体和生物素化山羊抗兔IgG （武汉Boster公司）， Ultra SensitiveTMSP超敏试剂盒（KIT-9709/9719）和DAB显色试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司）；。
2 方法
2.1 糖尿病模型的制备大鼠尾静脉注射溶于pH 4.5，0.01 mol/L的无菌柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的链脲佐菌素，剂量为50mg/kg，正常对照组于尾静脉注射STZ溶媒；注射后48 h尾静脉采血测血糖 ,凡血糖值大于或等于16.7 mmol/ L的大鼠作为糖尿病大鼠。
2.2 分组分为正常对照组（A组） 、糖尿病组（B组） 、糖尿病丹芪合剂组（C组）， 按2 g·kg -1·d -1给药和糖尿病依那普利组（D组）， 按10 mg·kg - 1·d - 1给药，各组均为6只。喂以普通饲料，自由饮水。
2.3 血、尿及肾组织采集于实验12周处死各组大鼠，处死前代谢笼收集24 h尿；心脏穿刺采血；肾脏经反复灌洗后，称重，一侧肾脏置-80℃冰箱保存供RT-PCR检测用，另一侧肾脏用4%多聚甲醛固定，供石蜡切片用。
2.4 免疫组织化学3 μm厚肾组织石蜡切片，微波修复抗原，采用SP法检测BMP-7和SABC法检测FN，以PBS作阴性对照，DAB染色。BMP-7在高倍镜（400×）下计数10个视野的阳性肾小管数，取均值；FN在显微镜测微尺（0.5网形目镜尺）下计数十字交叉点与FN阳性染色表达重合的点数，计数十个视野（400×），取均值。
2.6 用氧化酶法测血糖CHOD-PAP法测总胆固醇，GPO-POD法测甘油三酯，不去蛋白终点法测血肌酐，考马斯亮蓝法测尿蛋白，按试剂盒说明书操作。
3 结果
各组生化指标及肾脏指数的变化糖尿病组的血糖、甘油三酯和总胆固醇、血肌酐及肾脏指数均显着高于正常对照组（P< 0.01或P< 0.05），出现明显的尿蛋白（P< 0.01）；丹芪合剂和依那普利组与糖尿病组比较，除血糖外，甘油三酯和总胆固醇、血肌酐及肾脏指数均明显下降，有显着性差异（P< 0.01），但丹芪合剂和依那普利组之间无显着性差异。肾组织形态学变化PAS染色显示糖尿病组大鼠部分肾小管腔扩张，肾小管上皮细胞空泡变性，细胞萎缩和脱落，伴PAS染色阳性物质沉积增多；而丹芪合剂和依那普利治疗组病变较糖尿病组大鼠相对较轻。丹芪合剂和依那普利对BMP-7和FN蛋白表达的影响免疫组化结果显示正常对照组BMP-7蛋白高表达于集合管和肾小管胞浆，肾间质及肾血管外膜也有少量表达，但肾小球未见阳性表达；FN沿肾小管基膜呈线性表达；糖尿病组大鼠肾组织BMP-7的表达明显低于正常对照组，而FN蛋白的表达明显增多。丹芪合剂和依那普利治疗组，肾小管BMP-7蛋白的表达高于糖尿病组，差异有统计学意义。同时FN蛋白的表达丹芪合剂和依那普利治疗组明显低于糖尿病组。
制药学论文发表 http://www.qikanba.com/
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