采用高效液相色谱法检测灯盏乙素含量实验研究-卫生核心期刊
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1 仪器与试剂
高效液相色谱仪（日本岛津公司LC2010A型）；KQ-250DE数控超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；电子分析天平BT25S（日本岛津）。灯盏花素（云南植物药业有限公司）；野黄芩苷（对照品110842-200504，中国药品生物制品检定所）；乙醇（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；甲醇（色谱醇，天津市科密欧化学试剂有限公司）；H3PO4（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；NaOH（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；水为双蒸水；其余试剂均为分析纯。
2 方法
精密称取灯盏乙素粗品1g溶于磷酸盐缓冲溶液，加0.2 mol/L的氢氧化钠使之全部溶解（pH<8），加无水乙醇沉淀，过滤，滤渣用60%乙醇溶解，稀盐酸调pH=1值，有沉淀析出，过滤，滤渣水洗，50℃真空干燥，即得高纯度灯盏乙素。
3 结果
3.1 灯盏乙素的测定
3.1.1 色谱条件
色谱柱为C18柱；流动相为甲醇-0.1%磷酸（40∶60）；检测波长335 nm；流速1.0 ml/min；柱温为室温。进样量10 μl。
3.1.2 样品液的测定
精密称取“2方法”项所得灯盏乙素样品用甲醇配成0.1 mg/ml样品溶液。按“3.1.1”项下色谱条件进样。色谱图见图1。
3.1.3 标准曲线的制备
准确称取野黄芩苷对照品10 mg，于比色管中甲醇定容至10 ml，即为浓度为1 mg/ ml对照品溶液。分别取0.25，0.5，1，1.5，2.0，2.5 ml稀释至10 ml，配成0.025，0.05，0.1，0.15，0.2，0.25 mg/ ml系列标准液，进样测定峰面积。以峰面积（Y）与进样浓度（X）进行线性回归，得回归方程为Y=1.0×107X-314 548，r=0.997 7，线性范围25.00～250.00 μg/ml。精密量取0.05，0.1，0.2 mg/ ml的野黄芩苷对照品溶液按上述色谱条件，分别重复测定5次。计算RSD值分别为0.15%，0.19%，0.23%，表明测定方法精密度良好。精密量取“3.1.2”项下样品液分别于0，1，2，4，6，8 h内进样测定。测得RSD值为0.35%，表明灯盏乙素样品液在8 h内稳定。
3.2 正交实验结果分析
根据灯盏乙素碱提酸沉的步骤及初步筛选的结果，正交实验设计考察的的因素确定为沉淀用乙醇用量（A）、溶解沉淀乙醇的浓度（B）、酸沉pH值（C），以灯盏乙素的纯度和得率作为考察指标，采用正交表设计，因素与水平见表1。取灯盏乙素粗品按正交设计方案进行实验，测定，以灯盏乙素的百分含量和产率为综合指标进行分析。综合评分标准：以灯盏花乙素的纯度100%为满分，得率以100%为满分；综合评分按得率占50%，纯度占50%。工艺验证实验以最佳纯化工艺纯化灯盏乙素粗粉5 g，各3份，按最佳提取工艺纯化，母液回收再重结晶，HPLC测定灯盏乙素的含量。
灯盏花素制剂从20世纪70年代开始应用于临床上，主要用于治疗高血压病、脑栓塞、多发性神经炎、慢性视网膜炎及脑血管意外所致的瘫痪症［1］。近年来有文献报道它治疗心脑血管疾病的主要活性成分为灯盏乙素（又名野黄芩苷）［2～4］。现在市售的灯盏花素多为含灯盏乙素90%左右的粗品，其进一步纯化工艺还没有相关文献报道。
卫生类核心期刊 http://www.qikanba.com/
1 仪器与试剂
高效液相色谱仪（日本岛津公司LC2010A型）；KQ-250DE数控超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；电子分析天平BT25S（日本岛津）。灯盏花素（云南植物药业有限公司）；野黄芩苷（对照品110842-200504，中国药品生物制品检定所）；乙醇（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；甲醇（色谱醇，天津市科密欧化学试剂有限公司）；H3PO4（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；NaOH（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；水为双蒸水；其余试剂均为分析纯。
2 方法
精密称取灯盏乙素粗品1g溶于磷酸盐缓冲溶液，加0.2 mol/L的氢氧化钠使之全部溶解（pH<8），加无水乙醇沉淀，过滤，滤渣用60%乙醇溶解，稀盐酸调pH=1值，有沉淀析出，过滤，滤渣水洗，50℃真空干燥，即得高纯度灯盏乙素。
3 结果
3.1 灯盏乙素的测定
3.1.1 色谱条件
色谱柱为C18柱；流动相为甲醇-0.1%磷酸（40∶60）；检测波长335 nm；流速1.0 ml/min；柱温为室温。进样量10 μl。
3.1.2 样品液的测定
精密称取“2方法”项所得灯盏乙素样品用甲醇配成0.1 mg/ml样品溶液。按“3.1.1”项下色谱条件进样。色谱图见图1。
3.1.3 标准曲线的制备
准确称取野黄芩苷对照品10 mg，于比色管中甲醇定容至10 ml，即为浓度为1 mg/ ml对照品溶液。分别取0.25，0.5，1，1.5，2.0，2.5 ml稀释至10 ml，配成0.025，0.05，0.1，0.15，0.2，0.25 mg/ ml系列标准液，进样测定峰面积。以峰面积（Y）与进样浓度（X）进行线性回归，得回归方程为Y=1.0×107X-314 548，r=0.997 7，线性范围25.00～250.00 μg/ml。精密量取0.05，0.1，0.2 mg/ ml的野黄芩苷对照品溶液按上述色谱条件，分别重复测定5次。计算RSD值分别为0.15%，0.19%，0.23%，表明测定方法精密度良好。精密量取“3.1.2”项下样品液分别于0，1，2，4，6，8 h内进样测定。测得RSD值为0.35%，表明灯盏乙素样品液在8 h内稳定。
3.2 正交实验结果分析
根据灯盏乙素碱提酸沉的步骤及初步筛选的结果，正交实验设计考察的的因素确定为沉淀用乙醇用量（A）、溶解沉淀乙醇的浓度（B）、酸沉pH值（C），以灯盏乙素的纯度和得率作为考察指标，采用正交表设计，因素与水平见表1。取灯盏乙素粗品按正交设计方案进行实验，测定，以灯盏乙素的百分含量和产率为综合指标进行分析。综合评分标准：以灯盏花乙素的纯度100%为满分，得率以100%为满分；综合评分按得率占50%，纯度占50%。工艺验证实验以最佳纯化工艺纯化灯盏乙素粗粉5 g，各3份，按最佳提取工艺纯化，母液回收再重结晶，HPLC测定灯盏乙素的含量。
灯盏花素制剂从20世纪70年代开始应用于临床上，主要用于治疗高血压病、脑栓塞、多发性神经炎、慢性视网膜炎及脑血管意外所致的瘫痪症［1］。近年来有文献报道它治疗心脑血管疾病的主要活性成分为灯盏乙素（又名野黄芩苷）［2～4］。现在市售的灯盏花素多为含灯盏乙素90%左右的粗品，其进一步纯化工艺还没有相关文献报道。
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