蜂胶对喉癌Hep-2细胞凋亡的影响实验结果分析-药学论文范文
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蜂胶是蜜蜂从植物的幼芽及树干上采集的树脂，并混入其上腭腺分泌物、蜂蜡和少量的花粉加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物。目前，已知蜂胶中所含抗癌有效成分有：黄酮类、萜烯类、多糖物质、酯类化合物等及其他化合物的天然组合，它们之间相互协调作用，赋予了蜂胶的抗癌作用［1］。实验表明，蜂胶可抑制由化学致癌物诱发的基因突变［2］。由于放疗、化疗在杀伤肿瘤细胞的同时，也会损伤机体的免疫活性细胞及造血细胞，因此，强化机体免疫、对抗放疗、化疗引起的副作用，是当今肿瘤防治工作重要任务之一。
目前，喉癌的治疗是以手术为主的综合治疗，化疗是其中重要的组成部分，用于喉癌的化疗药物尚缺乏理想的选择性。蜂胶是蜜蜂从植物的幼芽及树木的枝条上采集树脂类物质，与其唾液混合加工成一种芳香性胶状固体物，含有多种黄酮、槲皮素、肉桂酸衍生物、多糖、氨基酸等有药理活性的化合物［1］。它不仅具有抗病原微生物、抗氧化、抗炎、护肝等作用，还具有抗肿瘤作用。为进一步探讨其抗癌作用机理，我们观察了蜂胶对喉癌Hep-2细胞凋亡的影响。
大量研究表明，蜂胶是一种天然的免疫强化剂，同时又兼有抗肿瘤、抗病毒、抗菌的活性［3］。本实验表明蜂胶对Hep-2细胞具有明显的抑制作用，可诱导Hep-2细胞凋亡，且对细胞周期有一定的影响，既可影响细胞周期G1期向S期转变，又可影响S期向G2M期的转变过程，导致肿瘤细胞凋亡，非特异性阻滞细胞周期的全过程。在此基础上，用TUNEL法定量观察蜂胶诱导Hep-2细胞凋亡的规律。Hep-2细胞有一定的自然凋亡率，但蜂胶组中的阳性细胞数明显多于对照组，且具有时间、剂量的依赖性。随着蜂胶浓度的增加，对癌细胞的杀伤作用也在增强。
原位末端标记法（TUNEL）定量检测分别于各剂量药物作用后24，48，72 h收集细胞，PBS洗2次，细胞涂片，室温干燥。按原位细胞凋亡检测试剂盒说明进行操作，用普通光镜计算凋亡率（AI）。计算方法：随机选取5个高倍视野，分别计阳性细胞数及总细胞数，代入下式：AI=阳性细胞数/总细胞数×100%。
2.4 Hep-2细胞内Ca2+变化的激光共聚焦显微镜检测对数生长期Hep-2细胞，用D-Hanks液洗涤2次，于37℃避光条件下Fluo-3/AM（10 μmol/L）荷载。40 min后用D-Hanks液洗涤细胞3次，洗去细胞外残余染料，最后保留少许细胞外D-Hanks缓冲液，平衡10 min。经不同浓度蜂胶作用不同时间，在激光共聚焦显微镜下扫描细胞内荧光强度，激发波长488 nm，发射波长526 nm，以本底荧光强度为参照（0），检测细胞内Ca2+荧光强度。
Ca2+信号传导在细胞凋亡机制研究中的作用日益受到人们重视。大多数细胞在凋亡过程中，细胞内Ca2+均有所增加［4～6］。本实验结果显示，蜂胶作用后Hep-2细胞内Ca2+相对荧光强度明显高于对照组，且随着药物浓度的增高，Ca2+荧光强度亦增高。提示Ca2+的变化在蜂胶诱导Hep-2细胞凋亡中起重要作用，可能系其诱导凋亡的关键机制之一。本实验揭示，蜂胶能够抑制喉癌细胞的生长，其抑制作用是通过凋亡机制起作用的。
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蜂胶是蜜蜂从植物的幼芽及树干上采集的树脂，并混入其上腭腺分泌物、蜂蜡和少量的花粉加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物。目前，已知蜂胶中所含抗癌有效成分有：黄酮类、萜烯类、多糖物质、酯类化合物等及其他化合物的天然组合，它们之间相互协调作用，赋予了蜂胶的抗癌作用［1］。实验表明，蜂胶可抑制由化学致癌物诱发的基因突变［2］。由于放疗、化疗在杀伤肿瘤细胞的同时，也会损伤机体的免疫活性细胞及造血细胞，因此，强化机体免疫、对抗放疗、化疗引起的副作用，是当今肿瘤防治工作重要任务之一。
目前，喉癌的治疗是以手术为主的综合治疗，化疗是其中重要的组成部分，用于喉癌的化疗药物尚缺乏理想的选择性。蜂胶是蜜蜂从植物的幼芽及树木的枝条上采集树脂类物质，与其唾液混合加工成一种芳香性胶状固体物，含有多种黄酮、槲皮素、肉桂酸衍生物、多糖、氨基酸等有药理活性的化合物［1］。它不仅具有抗病原微生物、抗氧化、抗炎、护肝等作用，还具有抗肿瘤作用。为进一步探讨其抗癌作用机理，我们观察了蜂胶对喉癌Hep-2细胞凋亡的影响。
大量研究表明，蜂胶是一种天然的免疫强化剂，同时又兼有抗肿瘤、抗病毒、抗菌的活性［3］。本实验表明蜂胶对Hep-2细胞具有明显的抑制作用，可诱导Hep-2细胞凋亡，且对细胞周期有一定的影响，既可影响细胞周期G1期向S期转变，又可影响S期向G2M期的转变过程，导致肿瘤细胞凋亡，非特异性阻滞细胞周期的全过程。在此基础上，用TUNEL法定量观察蜂胶诱导Hep-2细胞凋亡的规律。Hep-2细胞有一定的自然凋亡率，但蜂胶组中的阳性细胞数明显多于对照组，且具有时间、剂量的依赖性。随着蜂胶浓度的增加，对癌细胞的杀伤作用也在增强。
原位末端标记法（TUNEL）定量检测分别于各剂量药物作用后24，48，72 h收集细胞，PBS洗2次，细胞涂片，室温干燥。按原位细胞凋亡检测试剂盒说明进行操作，用普通光镜计算凋亡率（AI）。计算方法：随机选取5个高倍视野，分别计阳性细胞数及总细胞数，代入下式：AI=阳性细胞数/总细胞数×100%。
2.4 Hep-2细胞内Ca2+变化的激光共聚焦显微镜检测对数生长期Hep-2细胞，用D-Hanks液洗涤2次，于37℃避光条件下Fluo-3/AM（10 μmol/L）荷载。40 min后用D-Hanks液洗涤细胞3次，洗去细胞外残余染料，最后保留少许细胞外D-Hanks缓冲液，平衡10 min。经不同浓度蜂胶作用不同时间，在激光共聚焦显微镜下扫描细胞内荧光强度，激发波长488 nm，发射波长526 nm，以本底荧光强度为参照（0），检测细胞内Ca2+荧光强度。
Ca2+信号传导在细胞凋亡机制研究中的作用日益受到人们重视。大多数细胞在凋亡过程中，细胞内Ca2+均有所增加［4～6］。本实验结果显示，蜂胶作用后Hep-2细胞内Ca2+相对荧光强度明显高于对照组，且随着药物浓度的增高，Ca2+荧光强度亦增高。提示Ca2+的变化在蜂胶诱导Hep-2细胞凋亡中起重要作用，可能系其诱导凋亡的关键机制之一。本实验揭示，蜂胶能够抑制喉癌细胞的生长，其抑制作用是通过凋亡机制起作用的。
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