探究白蚁菌圃提取物对小鼠肝脏保护机制-护士毕业论文题目
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四氯化碳CCl4是经典的化学性肝损伤动物模型制备毒剂，被广泛用于肝坏死或肝损伤的在体和离体研究。CCl4进入肝细胞后，经肝微粒体细胞色素P450激活，生成自由基（·CCl3等），引起肝微粒体、溶酶体、细胞膜等生物膜脂质过氧化反应［3］。也有研究认为，·CCl3还可抑制细胞膜上的钙泵，致使细胞内钙离子增多而使细胞死亡［4］。当肝细胞膜因脂质过氧化反应而功能受损、结构破坏时，细胞内的ALT，AST等会释放入血，所以检测血清中ALT，AST的活性可以判断肝脏损伤的程度和药物治疗肝损伤的效果。
MDA是脂质过氧化的最终产物，其含量与脂质过氧化反应呈正比；而作为抗氧化酶系统主要物质之一的SOD含量的高低反映了机体清除氧自由基的能力。经大孔树脂处理后的白蚁菌圃提取物富含熊果酸等三萜类化合物［5］。这些三萜类化合物能够使四氯化碳所致的急性肝损伤的大鼠血清ALT显着降低，可以使肝损伤动物肝糖原明显增加，同时证明，经药物治疗动物的甘油三酯含量明显减少，血清中β脂肪蛋白含量增加，有明显降脂作用；肝脏组织学研究表明，经这类化合物治疗的动物，肝细胞变性、坏死均能明显改善，大部分都能够恢复正常［6］。
1 材料与仪器
1.1 动物清洁级健康昆明种小鼠，雌雄各半，体质量（20±2）g （江西中医学院动物实验中心，动物合格证号：JZDW No：2008-0113）。室温调节在（24±2）℃，自由摄食与饮水。
1.2 药品与试剂MFG采自江西安福，由安福白蚁防治所周投奎工程师鉴定。MFG粗粉用95%乙醇提取3次，减压浓缩，采用大孔树脂进行富集，得30%、60%和95% 3个梯度的乙醇溶液洗脱物，浓缩，4℃保存备用；联苯双酯滴丸（biphenyl dimethyl dicarboxylate,BDD, 1.5 mg×250丸，浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批号：070803）；CCl4（分析纯，天津市博迪化工有限公司），用时以精制橄榄油配制成0.2%液备用；谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
1.3 仪器紫外可见分光光度计（TU-1800S,北京普析通用仪器有限公司）；高速低温离心机（EVOLUTION,美国KENDRO公司）；恒温水浴锅（上海益恒实验仪器有限公司）。
2 方法
2.1 分组及给药昆明种小鼠84只，雌雄各半，将小鼠随机分成6组，每组14只。分别为正常对照组，CCl4模型组，阳性药对照组（BDD组， 200 mg·kg-1），MFG30%乙醇洗脱部分 （MFG1，180g·kg-1）、MFG60%乙醇洗脱部分（MFG2，120g·kg-1）、MFG95%乙醇洗脱部分（MFG3，50g·kg-1）3个剂量组， ig给药。实验开始时，MFG1、MFG2、MFG3 3个剂量组和阳性药对照组给药7d，1次/d，同时模型组和正常对照组分别ig给予同体积生理盐水。于第7天给药2h后，每鼠ip 10 ml· kg-1的0.2% CCl4橄榄油溶液，正常对照组给等量的橄榄油。造模16 h后，摘眼球取血（取血前12 h禁食，不禁水），分离血清待测。采血后，快速断头处死，取肝脏称重，取肝右叶组织约0.5 g，在冰冷的生理盐水中漂洗，滤纸拭干，用0.9%生理盐水制成10%肝组织匀浆，离心，取上清待测。同时取左叶肝脏，10%甲醛固定作病理切片。
3 结果
血清生化指标检测结果表明，腹腔注射CCl4可引起小鼠急性肝损伤，表现在血清中ALT和AST活性明显升高。MFG2和MFG3组可使其升高的ALT和AST活性显着降低（P<0.05和P<0.01），提示MFG对CCl4引起的小鼠急性肝损伤有很好的保护作用见表1。
肝组织匀浆生化指标检测从实验结果可见，模型组小鼠肝组织中MDA含量明显升高（P<0.01）且SOD活性显着下降（P<0.01），提示肝脏出现脂质过氧化。而MFG3和MFG2可显着抑制肝组织中MDA的升高及SOD活性的降低（P<0.01和P<0.05），提示MFG有较强的抗氧化及清除氧自由基的作用见表2。
肝脏组织病理观察正常对照组小鼠肝脏外观呈红褐色，质地软而富有弹性；在光镜下可以观察到肝小叶结构完整，细胞排列整齐，大小均匀，分界清楚。模型组小鼠肝脏体积增大，质脆，边缘模糊；镜下见肝小叶结构破坏，肝细胞普遍浊肿，出现以中央静脉为中心的局灶性肝细胞变性、坏死和炎细胞浸润。BDD组和MFG3组肝脏略有水肿，质地柔软；镜下见肝小叶结构基本完整，细胞排列较整齐，只有少量的炎细胞浸润，较模型组有明显改善。MFG2组较模型组也有所改善，但是不如MFG3组效果好。
护士论文发表 http://www.qikanba.com/
四氯化碳CCl4是经典的化学性肝损伤动物模型制备毒剂，被广泛用于肝坏死或肝损伤的在体和离体研究。CCl4进入肝细胞后，经肝微粒体细胞色素P450激活，生成自由基（·CCl3等），引起肝微粒体、溶酶体、细胞膜等生物膜脂质过氧化反应［3］。也有研究认为，·CCl3还可抑制细胞膜上的钙泵，致使细胞内钙离子增多而使细胞死亡［4］。当肝细胞膜因脂质过氧化反应而功能受损、结构破坏时，细胞内的ALT，AST等会释放入血，所以检测血清中ALT，AST的活性可以判断肝脏损伤的程度和药物治疗肝损伤的效果。
MDA是脂质过氧化的最终产物，其含量与脂质过氧化反应呈正比；而作为抗氧化酶系统主要物质之一的SOD含量的高低反映了机体清除氧自由基的能力。经大孔树脂处理后的白蚁菌圃提取物富含熊果酸等三萜类化合物［5］。这些三萜类化合物能够使四氯化碳所致的急性肝损伤的大鼠血清ALT显着降低，可以使肝损伤动物肝糖原明显增加，同时证明，经药物治疗动物的甘油三酯含量明显减少，血清中β脂肪蛋白含量增加，有明显降脂作用；肝脏组织学研究表明，经这类化合物治疗的动物，肝细胞变性、坏死均能明显改善，大部分都能够恢复正常［6］。
1 材料与仪器
1.1 动物清洁级健康昆明种小鼠，雌雄各半，体质量（20±2）g （江西中医学院动物实验中心，动物合格证号：JZDW No：2008-0113）。室温调节在（24±2）℃，自由摄食与饮水。
1.2 药品与试剂MFG采自江西安福，由安福白蚁防治所周投奎工程师鉴定。MFG粗粉用95%乙醇提取3次，减压浓缩，采用大孔树脂进行富集，得30%、60%和95% 3个梯度的乙醇溶液洗脱物，浓缩，4℃保存备用；联苯双酯滴丸（biphenyl dimethyl dicarboxylate,BDD, 1.5 mg×250丸，浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批号：070803）；CCl4（分析纯，天津市博迪化工有限公司），用时以精制橄榄油配制成0.2%液备用；谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
1.3 仪器紫外可见分光光度计（TU-1800S,北京普析通用仪器有限公司）；高速低温离心机（EVOLUTION,美国KENDRO公司）；恒温水浴锅（上海益恒实验仪器有限公司）。
2 方法
2.1 分组及给药昆明种小鼠84只，雌雄各半，将小鼠随机分成6组，每组14只。分别为正常对照组，CCl4模型组，阳性药对照组（BDD组， 200 mg·kg-1），MFG30%乙醇洗脱部分 （MFG1，180g·kg-1）、MFG60%乙醇洗脱部分（MFG2，120g·kg-1）、MFG95%乙醇洗脱部分（MFG3，50g·kg-1）3个剂量组， ig给药。实验开始时，MFG1、MFG2、MFG3 3个剂量组和阳性药对照组给药7d，1次/d，同时模型组和正常对照组分别ig给予同体积生理盐水。于第7天给药2h后，每鼠ip 10 ml· kg-1的0.2% CCl4橄榄油溶液，正常对照组给等量的橄榄油。造模16 h后，摘眼球取血（取血前12 h禁食，不禁水），分离血清待测。采血后，快速断头处死，取肝脏称重，取肝右叶组织约0.5 g，在冰冷的生理盐水中漂洗，滤纸拭干，用0.9%生理盐水制成10%肝组织匀浆，离心，取上清待测。同时取左叶肝脏，10%甲醛固定作病理切片。
3 结果
血清生化指标检测结果表明，腹腔注射CCl4可引起小鼠急性肝损伤，表现在血清中ALT和AST活性明显升高。MFG2和MFG3组可使其升高的ALT和AST活性显着降低（P<0.05和P<0.01），提示MFG对CCl4引起的小鼠急性肝损伤有很好的保护作用见表1。
肝组织匀浆生化指标检测从实验结果可见，模型组小鼠肝组织中MDA含量明显升高（P<0.01）且SOD活性显着下降（P<0.01），提示肝脏出现脂质过氧化。而MFG3和MFG2可显着抑制肝组织中MDA的升高及SOD活性的降低（P<0.01和P<0.05），提示MFG有较强的抗氧化及清除氧自由基的作用见表2。
肝脏组织病理观察正常对照组小鼠肝脏外观呈红褐色，质地软而富有弹性；在光镜下可以观察到肝小叶结构完整，细胞排列整齐，大小均匀，分界清楚。模型组小鼠肝脏体积增大，质脆，边缘模糊；镜下见肝小叶结构破坏，肝细胞普遍浊肿，出现以中央静脉为中心的局灶性肝细胞变性、坏死和炎细胞浸润。BDD组和MFG3组肝脏略有水肿，质地柔软；镜下见肝小叶结构基本完整，细胞排列较整齐，只有少量的炎细胞浸润，较模型组有明显改善。MFG2组较模型组也有所改善，但是不如MFG3组效果好。
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