分光光度法测定橙皮苷含量的实验条件优化-实习护士毕业论文范文
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1 仪器与材料
1.1 仪器BS124型电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；HD型恒温水浴锅（上海分析仪器厂）；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；UV-9100紫外/可见分光光度计（北京瑞利分析仪器有限公司）；研磨机（上海灿坤实业有限公司）。
1.2 试剂盐酸（37%，南京化学试剂有限公司）；乙醇（97.0%，南京化学试剂有限公司）；七水合硫酸亚铁（99.0%，广东·汕头市西陇化工厂）；水杨酸（99.5%，南京化学试剂有限公司）；氢氧化钠（99.0%，南京化学试剂有限公司）；硝酸铝（96.0%，南京化学试剂有限公司）；30%过氧化氢（南京化学试剂有限公司）。以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。
分别将试剂配成如下使用液：氢氧化钠溶液（0.1 mol/L）；稀盐酸（体积分数7%）；Al（NO3）3溶液（质量体积分数5%）；乙醇：（体积分数100%，70%，40%）；硫酸亚铁溶液（3.0nmol/L）；过氧化氢溶液（2.5nmol/L）；水杨酸-乙醇溶液（3.0nmol/L）。
1.3 供试药橙皮苷标准品（98%，西安小草植物科技有限公司提供）；橘皮、贡桔皮、甜橙皮、芦柑皮、青橙皮、柠檬皮、佛手皮（均为市售），将上述7种鲜果皮自然风干，分别粉碎后密封备用。
2 方法与结果
2.1 分光光度法测定橙皮苷含量的实验条件优化
2.1.1 橙皮苷标准溶液的制备准确称取橙皮苷标准品，在超声波作用下于无水乙醇中完全溶解并定容至100 ml,橙皮苷储备液浓度为200 μg/ml。
2.1.2 最大吸收波长的测定橙皮苷在Al（NO3）3的蒸馏水体系中，于80 ℃反应15 min后形成黄色络合物，测其最大吸收波长［5］。准确移取2.00 ml橙皮苷储备液于10 ml比色管中，加入1.00 ml 5%的Al（NO3）3溶液，于80 ℃水浴中加热15 min后，加入蒸馏水定容至10 ml，以试剂做空白，测定不同波长下的吸光值，如图1所示橙皮苷的最大吸收波长为400 nm。
2.1.3 正交设计及测定结果分光光度法测定橙皮苷络合物的吸光度，对显色反应影响较大的因素主要有：溶剂类型、pH值、显色时间、温度和显色剂用量［6，7］，本实验采用正交筛选法选出最佳的实验条件，各因素水平见表1所设计。分别移取橙皮苷使用液0，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50 ml置于10 ml比色管中，按照表2所设条件，加入相应Al（NO3）3溶液后，用相应的溶剂定容，配成浓度分别为0，10.0，20.0，30.0，40.0，50.0 μg/ml的使用液，显色后在400 nm下测吸光度，重复3次，取其平均值，绘制曲线可得吸光度A与橙皮苷浓度C（μg/ml）的线性回归方程。
2.1.4 实验结果与讨论根据表2极差可得，上述4种因素的主次顺序为： C ＞A ＞D ＞B，本实验最好的线形条件是A3B1C1D3，即以蒸馏水为显色体系，加入5%（m:V）的Al（NO3）3溶液1.00 ml,在20 ℃反应20 min，得到的标准曲线图2所示，其线性回归方程为：A=0.003C-0.009，r=0.999 7 ，说明橙皮苷的浓度C在10.0～50.0 μg/ml浓度范围内与吸光度A之间有较好的线性关系。
2.1.5 加样回收率实验取同一批橘皮样品4份，分别加入橙皮苷标准品，按供试品制备，测其吸光度，计算得回收率为99.5%～103%，平均回收率101%，RAD=1.1%（n=4），结果如表3所示。
橙皮苷是构成Vp的主要成分，有保护毛细血管，降低毛细血管的脆性，防止微血管破裂出血的作用，作为医药工业用作治疗高血压病和心肌梗塞的药物被广泛使用［1～3］。橙皮苷不溶于乙醚、苯、丙酮及氯仿，难溶于水，微溶于乙醇、甲醇，可溶于吡啶、甘油、稀碱溶液，常用的提取方法有溶剂提取法、碱提酸沉法、超声波提取法、微波提取法和酶解法［4］，其中溶剂提取法和碱提酸沉法操作简单而经济，提取率也较高。橙皮苷结构式中存在3-羟基、C-4位羰基能与三氯化铝或硝酸铝生成黄色络合物，可用分光光度法检测［4］。
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1 仪器与材料
1.1 仪器BS124型电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；HD型恒温水浴锅（上海分析仪器厂）；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；UV-9100紫外/可见分光光度计（北京瑞利分析仪器有限公司）；研磨机（上海灿坤实业有限公司）。
1.2 试剂盐酸（37%，南京化学试剂有限公司）；乙醇（97.0%，南京化学试剂有限公司）；七水合硫酸亚铁（99.0%，广东·汕头市西陇化工厂）；水杨酸（99.5%，南京化学试剂有限公司）；氢氧化钠（99.0%，南京化学试剂有限公司）；硝酸铝（96.0%，南京化学试剂有限公司）；30%过氧化氢（南京化学试剂有限公司）。以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。
分别将试剂配成如下使用液：氢氧化钠溶液（0.1 mol/L）；稀盐酸（体积分数7%）；Al（NO3）3溶液（质量体积分数5%）；乙醇：（体积分数100%，70%，40%）；硫酸亚铁溶液（3.0nmol/L）；过氧化氢溶液（2.5nmol/L）；水杨酸-乙醇溶液（3.0nmol/L）。
1.3 供试药橙皮苷标准品（98%，西安小草植物科技有限公司提供）；橘皮、贡桔皮、甜橙皮、芦柑皮、青橙皮、柠檬皮、佛手皮（均为市售），将上述7种鲜果皮自然风干，分别粉碎后密封备用。
2 方法与结果
2.1 分光光度法测定橙皮苷含量的实验条件优化
2.1.1 橙皮苷标准溶液的制备准确称取橙皮苷标准品，在超声波作用下于无水乙醇中完全溶解并定容至100 ml,橙皮苷储备液浓度为200 μg/ml。
2.1.2 最大吸收波长的测定橙皮苷在Al（NO3）3的蒸馏水体系中，于80 ℃反应15 min后形成黄色络合物，测其最大吸收波长［5］。准确移取2.00 ml橙皮苷储备液于10 ml比色管中，加入1.00 ml 5%的Al（NO3）3溶液，于80 ℃水浴中加热15 min后，加入蒸馏水定容至10 ml，以试剂做空白，测定不同波长下的吸光值，如图1所示橙皮苷的最大吸收波长为400 nm。
2.1.3 正交设计及测定结果分光光度法测定橙皮苷络合物的吸光度，对显色反应影响较大的因素主要有：溶剂类型、pH值、显色时间、温度和显色剂用量［6，7］，本实验采用正交筛选法选出最佳的实验条件，各因素水平见表1所设计。分别移取橙皮苷使用液0，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50 ml置于10 ml比色管中，按照表2所设条件，加入相应Al（NO3）3溶液后，用相应的溶剂定容，配成浓度分别为0，10.0，20.0，30.0，40.0，50.0 μg/ml的使用液，显色后在400 nm下测吸光度，重复3次，取其平均值，绘制曲线可得吸光度A与橙皮苷浓度C（μg/ml）的线性回归方程。
2.1.4 实验结果与讨论根据表2极差可得，上述4种因素的主次顺序为： C ＞A ＞D ＞B，本实验最好的线形条件是A3B1C1D3，即以蒸馏水为显色体系，加入5%（m:V）的Al（NO3）3溶液1.00 ml,在20 ℃反应20 min，得到的标准曲线图2所示，其线性回归方程为：A=0.003C-0.009，r=0.999 7 ，说明橙皮苷的浓度C在10.0～50.0 μg/ml浓度范围内与吸光度A之间有较好的线性关系。
2.1.5 加样回收率实验取同一批橘皮样品4份，分别加入橙皮苷标准品，按供试品制备，测其吸光度，计算得回收率为99.5%～103%，平均回收率101%，RAD=1.1%（n=4），结果如表3所示。
橙皮苷是构成Vp的主要成分，有保护毛细血管，降低毛细血管的脆性，防止微血管破裂出血的作用，作为医药工业用作治疗高血压病和心肌梗塞的药物被广泛使用［1～3］。橙皮苷不溶于乙醚、苯、丙酮及氯仿，难溶于水，微溶于乙醇、甲醇，可溶于吡啶、甘油、稀碱溶液，常用的提取方法有溶剂提取法、碱提酸沉法、超声波提取法、微波提取法和酶解法［4］，其中溶剂提取法和碱提酸沉法操作简单而经济，提取率也较高。橙皮苷结构式中存在3-羟基、C-4位羰基能与三氯化铝或硝酸铝生成黄色络合物，可用分光光度法检测［4］。
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