不同桔实中橙皮苷含量测定-护士实习毕业论文范文
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1 仪器与材料
1.1 仪器BS124型电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；HD型恒温水浴锅（上海分析仪器厂）；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；UV-9100紫外/可见分光光度计（北京瑞利分析仪器有限公司）；研磨机（上海灿坤实业有限公司）。
1.2 试剂盐酸（37%，南京化学试剂有限公司）；乙醇（97.0%，南京化学试剂有限公司）；七水合硫酸亚铁（99.0%，广东·汕头市西陇化工厂）；水杨酸（99.5%，南京化学试剂有限公司）；氢氧化钠（99.0%，南京化学试剂有限公司）；硝酸铝（96.0%，南京化学试剂有限公司）；30%过氧化氢（南京化学试剂有限公司）。以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。
分别将试剂配成如下使用液：氢氧化钠溶液（0.1 mol/L）；稀盐酸（体积分数7%）；Al（NO3）3溶液（质量体积分数5%）；乙醇：（体积分数100%，70%，40%）；硫酸亚铁溶液（3.0nmol/L）；过氧化氢溶液（2.5nmol/L）；水杨酸-乙醇溶液（3.0nmol/L）。
1.3 供试药橙皮苷标准品（98%，西安小草植物科技有限公司提供）；橘皮、贡桔皮、甜橙皮、芦柑皮、青橙皮、柠檬皮、佛手皮（均为市售），将上述7种鲜果皮自然风干，分别粉碎后密封备用。
2.2 橙皮苷提取实验条件优化
2.2.1 橙皮苷提取工艺流程准确称取5 g左右干橘皮粉与相应料液比的不同浓度的乙醇溶液，置于装有回流装置的圆底烧瓶中，在相应的温度下保温一定时间后，过滤得橙皮苷滤液，取其滤液测定其吸光度。由于橙皮苷样品未经脱色，本身有杂质黄色，在测定时设置试剂空白作对照，用总吸光度减去非黄酮类物质在400 nm处的吸光度。
2.2.2 正交设计与结果测定影响橙皮苷提取效果的主要因素有浸提剂浓度、料液比、浸提温度、浸提时间等，按以上确定的条件结合参考文献，采用表4所示的正交实验因素水平表，做4因素3水平的正交实验［8～10］，实验结果如表5所示。表4 正交因素水平，表5 L9（34）正交实验与结果实验号A乙醇浓度（略）
2.2.3 正交实验结果分析由表5中极差R项可知，上述4种影响因素的主次顺序为：B ＞D ＞A ＞C,本实验最佳浸提条件是A2B1C1D2，即以70%乙醇为提取溶剂，采用料液比1∶20（g:ml），在50 ℃下提取3 h，测定吸光度，得到橘皮中橙皮苷含量为4.77%。
2.2.4 浸提加搅拌提取法采用浸提加搅拌提取法，以与浸提法相同的实验条件：以70%乙醇为提取剂，料液比为1∶20（g:ml），在50 ℃下保温3 h，同时中速搅拌粉末，测定吸光度，得到橘皮中橙皮苷含量为5.70%。结果证明，在浸提过程中加以搅拌操作，可有效提高橘皮中橙皮苷的提取率。
2.3 不同桔实中橙皮苷含量测定
2.3.1 橙皮苷提取工艺准确称取不同桔皮粉末5 g和100 ml 70%乙醇溶液置于装有回流装置的圆底烧瓶中，在50 ℃下提取3 h，同时中速搅拌。定容至100 ml容量瓶中（C样品质量/提取液体积=50 mg/ml），测定不同桔皮中橙皮苷的含量。
2.4 桔实皮中黄酮类物质清除·OH的研究
2.4.1 实验方法参照Fenton反应原理及李贵荣［11］的方法改进后进行测定。利用H2O2与Fe2+混合产出·OH,但由于·OH具有很高的反应活性，存活时间短，若在反应体系中加入水杨酸，就能有效地捕捉·OH，并产生有色物质。反应如下：
H2O2+ Fe2+→Fe3++·OH+OH-
此产物在508nm处有强吸收，若在此反应体系中加入具有清除·OH功能的被测物，被测物便会与水杨酸竞争·OH，从而使有色物质生产量减少。将配制好3.0 nmol/L硫酸亚铁溶液、2.5 nmol/L过氧化氢溶液、3.0 nmol/L水杨酸-乙醇溶液、一定浓度的不同桔实提取液，按表7的顺序加入到10 ml的比色管中，加蒸馏水至刻度，振荡静置10 min后以蒸馏水为参比，于508 nm处测吸光度值，代入公式计算清除率。其计算公式为：
清除率（%）=［A对照-（A样品-A0）］/A对照×100%，式中：A对照为没有加样品的吸光值；A样品为加样品的吸光值；A0为没有加显色剂的吸光值。测定了不同桔实中橙皮苷的含量，研究发现橘皮中橙皮苷含量最高为5.70%，其次是贡桔皮5.59%和甜橙皮5.00%，佛手皮中含量仅为3.25%。综合橙皮苷的提取率和生产经济费用，工业生产企业可以选择橙皮苷含量较高的橘皮、贡桔皮、甜橙皮作为生产原材料。
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1 仪器与材料
1.1 仪器BS124型电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；HD型恒温水浴锅（上海分析仪器厂）；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；UV-9100紫外/可见分光光度计（北京瑞利分析仪器有限公司）；研磨机（上海灿坤实业有限公司）。
1.2 试剂盐酸（37%，南京化学试剂有限公司）；乙醇（97.0%，南京化学试剂有限公司）；七水合硫酸亚铁（99.0%，广东·汕头市西陇化工厂）；水杨酸（99.5%，南京化学试剂有限公司）；氢氧化钠（99.0%，南京化学试剂有限公司）；硝酸铝（96.0%，南京化学试剂有限公司）；30%过氧化氢（南京化学试剂有限公司）。以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。
分别将试剂配成如下使用液：氢氧化钠溶液（0.1 mol/L）；稀盐酸（体积分数7%）；Al（NO3）3溶液（质量体积分数5%）；乙醇：（体积分数100%，70%，40%）；硫酸亚铁溶液（3.0nmol/L）；过氧化氢溶液（2.5nmol/L）；水杨酸-乙醇溶液（3.0nmol/L）。
1.3 供试药橙皮苷标准品（98%，西安小草植物科技有限公司提供）；橘皮、贡桔皮、甜橙皮、芦柑皮、青橙皮、柠檬皮、佛手皮（均为市售），将上述7种鲜果皮自然风干，分别粉碎后密封备用。
2.2 橙皮苷提取实验条件优化
2.2.1 橙皮苷提取工艺流程准确称取5 g左右干橘皮粉与相应料液比的不同浓度的乙醇溶液，置于装有回流装置的圆底烧瓶中，在相应的温度下保温一定时间后，过滤得橙皮苷滤液，取其滤液测定其吸光度。由于橙皮苷样品未经脱色，本身有杂质黄色，在测定时设置试剂空白作对照，用总吸光度减去非黄酮类物质在400 nm处的吸光度。
2.2.2 正交设计与结果测定影响橙皮苷提取效果的主要因素有浸提剂浓度、料液比、浸提温度、浸提时间等，按以上确定的条件结合参考文献，采用表4所示的正交实验因素水平表，做4因素3水平的正交实验［8～10］，实验结果如表5所示。表4 正交因素水平，表5 L9（34）正交实验与结果实验号A乙醇浓度（略）
2.2.3 正交实验结果分析由表5中极差R项可知，上述4种影响因素的主次顺序为：B ＞D ＞A ＞C,本实验最佳浸提条件是A2B1C1D2，即以70%乙醇为提取溶剂，采用料液比1∶20（g:ml），在50 ℃下提取3 h，测定吸光度，得到橘皮中橙皮苷含量为4.77%。
2.2.4 浸提加搅拌提取法采用浸提加搅拌提取法，以与浸提法相同的实验条件：以70%乙醇为提取剂，料液比为1∶20（g:ml），在50 ℃下保温3 h，同时中速搅拌粉末，测定吸光度，得到橘皮中橙皮苷含量为5.70%。结果证明，在浸提过程中加以搅拌操作，可有效提高橘皮中橙皮苷的提取率。
2.3 不同桔实中橙皮苷含量测定
2.3.1 橙皮苷提取工艺准确称取不同桔皮粉末5 g和100 ml 70%乙醇溶液置于装有回流装置的圆底烧瓶中，在50 ℃下提取3 h，同时中速搅拌。定容至100 ml容量瓶中（C样品质量/提取液体积=50 mg/ml），测定不同桔皮中橙皮苷的含量。
2.4 桔实皮中黄酮类物质清除·OH的研究
2.4.1 实验方法参照Fenton反应原理及李贵荣［11］的方法改进后进行测定。利用H2O2与Fe2+混合产出·OH,但由于·OH具有很高的反应活性，存活时间短，若在反应体系中加入水杨酸，就能有效地捕捉·OH，并产生有色物质。反应如下：
H2O2+ Fe2+→Fe3++·OH+OH-
此产物在508nm处有强吸收，若在此反应体系中加入具有清除·OH功能的被测物，被测物便会与水杨酸竞争·OH，从而使有色物质生产量减少。将配制好3.0 nmol/L硫酸亚铁溶液、2.5 nmol/L过氧化氢溶液、3.0 nmol/L水杨酸-乙醇溶液、一定浓度的不同桔实提取液，按表7的顺序加入到10 ml的比色管中，加蒸馏水至刻度，振荡静置10 min后以蒸馏水为参比，于508 nm处测吸光度值，代入公式计算清除率。其计算公式为：
清除率（%）=［A对照-（A样品-A0）］/A对照×100%，式中：A对照为没有加样品的吸光值；A样品为加样品的吸光值；A0为没有加显色剂的吸光值。测定了不同桔实中橙皮苷的含量，研究发现橘皮中橙皮苷含量最高为5.70%，其次是贡桔皮5.59%和甜橙皮5.00%，佛手皮中含量仅为3.25%。综合橙皮苷的提取率和生产经济费用，工业生产企业可以选择橙皮苷含量较高的橘皮、贡桔皮、甜橙皮作为生产原材料。
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