克瘤丸抑制肿瘤细胞生长效率研究-七彩医学论文
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1 材料
1.1 实验细胞株人肺腺癌A549细胞株由本实验室常规培养，生长于含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液中，37℃恒温，5%CO2，饱和湿度培养箱中生长。取对数生长期细胞用于实验。
1.2 试剂RPMI1640培养液（GIBCO公司产品）；MTT（sigma公司产品，以生理盐水配制成5 mg/ml浓度）；二甲基亚砜（DMSO，上海凌峰公司产品，分析纯）。
1.3 克瘤丸购自江苏省中医院药房，批号20041201。
2 方法及结果
2.1 克瘤丸不同提取物的制备
2.1.1 样品Ⅰ组合提取法，取200 g粗粉CO2超临界萃取后，药渣醇提（70％乙醇）后合并提取液，微波真空干燥，即为样品I的浸膏（4.39 g粗粉/g）。
2.1.2 样品Ⅱ半仿生提取法，取200 g粗粉加pH为1酸水提取再加pH为8碱水提取，合并提取液，浓缩成稠膏后微波真空干燥（5.13 g粗粉/g）。
2.1.3 样品Ⅲ水提法，取200 g粗粉加水提取滤过，浓缩成浸膏，再微波真空干燥（3.9 g粗粉/g）。
称取适量各样品，蒸馏水配置至1 g/ml（相当于生药）。灭菌备用。
配药：将上药用完全培养液于实验前稀释后得5种终浓度： 20，10，5，2.5，1.25 mg/ml供实验用。以上药物均实验前新鲜配用。
2.2 四甲基偶氮唑蓝（MTT）显色法在含10%小牛血清的1640培养液中培养细胞，在细胞达到指数增长期时用于实验。记数细胞浓度为2.5×104/ml，接种于无菌的96孔培养板中。每孔加入肿瘤细胞悬液200 μl，培养24 h后吸去原有的培养液，分别加入各200 μl的5种不同浓度克瘤丸，设空白对照孔加完全培养液，实验对照孔加肿瘤细胞，每组均为5复孔。混匀后置于37℃，5% CO2培养箱中继续培养24 h。于结束前4 h每孔加入20 μl浓度为5mg/ml MTT，继续培养4 h后吸去全部上清液，每孔加入二甲基亚砜200 μl溶解液，微型混合器振荡10～15 min，充分溶解，用酶联免疫检测仪于620 nm波长处测定光密度OD值，按抑制率计算公式计算抑制肺癌细胞的百分率。
2.3 肿瘤细胞抑瘤率计算公式：抑瘤率（%）=1-（OD实验组-OD空白组）（OD实验组-OD空白组）×100%
本研究还显示克瘤丸对细胞生长的抑制成一定时间的依赖性： 克瘤丸对细胞的作用随着时间的增加逐渐增强，从而肯定克瘤丸对肺癌细胞株的体外抑制作用。我们将进一步研究其体内的抑瘤作用及机理。
七彩中国医学论文 http://www.qikanba.com/
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1.1 实验细胞株人肺腺癌A549细胞株由本实验室常规培养，生长于含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液中，37℃恒温，5%CO2，饱和湿度培养箱中生长。取对数生长期细胞用于实验。
1.2 试剂RPMI1640培养液（GIBCO公司产品）；MTT（sigma公司产品，以生理盐水配制成5 mg/ml浓度）；二甲基亚砜（DMSO，上海凌峰公司产品，分析纯）。
1.3 克瘤丸购自江苏省中医院药房，批号20041201。
2 方法及结果
2.1 克瘤丸不同提取物的制备
2.1.1 样品Ⅰ组合提取法，取200 g粗粉CO2超临界萃取后，药渣醇提（70％乙醇）后合并提取液，微波真空干燥，即为样品I的浸膏（4.39 g粗粉/g）。
2.1.2 样品Ⅱ半仿生提取法，取200 g粗粉加pH为1酸水提取再加pH为8碱水提取，合并提取液，浓缩成稠膏后微波真空干燥（5.13 g粗粉/g）。
2.1.3 样品Ⅲ水提法，取200 g粗粉加水提取滤过，浓缩成浸膏，再微波真空干燥（3.9 g粗粉/g）。
称取适量各样品，蒸馏水配置至1 g/ml（相当于生药）。灭菌备用。
配药：将上药用完全培养液于实验前稀释后得5种终浓度： 20，10，5，2.5，1.25 mg/ml供实验用。以上药物均实验前新鲜配用。
2.2 四甲基偶氮唑蓝（MTT）显色法在含10%小牛血清的1640培养液中培养细胞，在细胞达到指数增长期时用于实验。记数细胞浓度为2.5×104/ml，接种于无菌的96孔培养板中。每孔加入肿瘤细胞悬液200 μl，培养24 h后吸去原有的培养液，分别加入各200 μl的5种不同浓度克瘤丸，设空白对照孔加完全培养液，实验对照孔加肿瘤细胞，每组均为5复孔。混匀后置于37℃，5% CO2培养箱中继续培养24 h。于结束前4 h每孔加入20 μl浓度为5mg/ml MTT，继续培养4 h后吸去全部上清液，每孔加入二甲基亚砜200 μl溶解液，微型混合器振荡10～15 min，充分溶解，用酶联免疫检测仪于620 nm波长处测定光密度OD值，按抑制率计算公式计算抑制肺癌细胞的百分率。
2.3 肿瘤细胞抑瘤率计算公式：抑瘤率（%）=1-（OD实验组-OD空白组）（OD实验组-OD空白组）×100%
本研究还显示克瘤丸对细胞生长的抑制成一定时间的依赖性： 克瘤丸对细胞的作用随着时间的增加逐渐增强，从而肯定克瘤丸对肺癌细胞株的体外抑制作用。我们将进一步研究其体内的抑瘤作用及机理。
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