白菊花主要成分含量测定实验研究-超声心动论文
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1 材料与方法
1.1 供试品种白菊花引自浙江桐乡。
1.2 供试肥料和试验设计控释肥料为金正大公司生产的两种4%的树脂包膜控释复合肥（CRF），N∶P2O5∶K2O比例分别14∶14∶14的CRF1和20∶8∶10的CRF2；常规肥料（CCF）N∶P2O5∶K2O比例为15∶15∶15。
试验于2007年在山东农业大学东校区树木园进行，土壤类型为砂质壤土，土壤基本养分状况为碱解氮104.41 mg/kg，有效磷49.12 mg/kg，有效钾134.24 mg/kg。试验设计为6个处理：①空白对照（CK），不施肥料；②习惯施肥（CCF），按每盆6 g施氮量施入CCF；③等氮素用量控释肥1（CRF11），施入与CCF等氮素用量的CRF1；④1/2氮素用量控释肥1（CRF12），按等于CCF一半氮素用量施入CRF1；⑤等氮素用量控释肥2（CRF21），施入与CCF等氮素用量的CRF2；⑥1/2氮素用量控释肥2（CRF22），施入等于CCF一半氮素用量的CRF2，磷、钾肥按养分比例施入。盆栽试验采用塑料花盆，每盆装土10 kg，将称好的土与肥料充分混匀后装盆，2007-04-25选取生长状况一致的白菊花根蘖苗移栽，每盆3株，每处理10盆，3次重复，共180盆，常规管理。
1.3 样品采集试验期间，每隔30 d取土壤样品用碱扩散法测定土壤中碱解氮含量，同时定株测定白菊花株高和茎粗；白菊花生长旺盛期、孕蕾期、开花期分别采主茎上第5个叶片用乙醇提取法测定叶绿素含量。当白菊花头状花序的中心小花70%开放时分批采收，120℃杀青10 min，55℃烘干，测定干花产量，并将各样品磨细装袋备用。
1.4 白菊花主要成分含量测定
1.4.1 总黄酮含量测定
标准曲线的绘制：参考李鹏等［10］的方法并稍作修改，准确称取芦丁对照品6.44 mg，用甲醇溶解并定容至25 ml，摇匀。精密吸取对照品0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分置于25 ml容量瓶中，各加水至6 ml，加5%亚硝酸钠溶液1.0 ml，摇匀放置6 min；加10%硝酸铝溶液1.0 ml，摇匀放置6 min，加10%氢氧化钠试液10 ml，加水至刻度，摇匀，放置15 min后，在512 nm处测定吸光度，以浓度为横坐标（X），吸光度为纵坐标（Y），得标准曲线，回归方程为：Y=0.010 78X-0.192（r=0.999 3）。芦丁在10.30～51.52 μg/ml范围内，浓度与吸收度呈良好的线性关系。
供试品溶液的制备：参考刘大会等［7］的方法精密称取白菊花粉末0.500 g，置150 ml具塞三角瓶中，准确加99.5%甲醇25 ml浸泡过夜，常温下超声提取30 min，滤过，滤液即为供试品溶液。 然后按照“1.4.1”项标准曲线制作方法进行测定。
1.4.2 绿原酸含量测定
高效液相色谱测定条件：高效液相色谱Water 600E，2966二级管阵列检测器，色谱柱为Symmetry C18 （4.6mm×150 mm, 5 μm），柱温35 ℃，流动相为MeOH-H2O（0.1% H3PO4）=20∶80，流速0.8 ml/min，检测波长为325 nm，进样量20 μl。
标准曲线的绘制：参考叶丛进等［11］的方法并稍作修改，准确称取绿原酸对照品3.56 mg，用甲醇溶解并定容至10 ml，摇匀。用微量进样器吸取对照品溶液4，6，8，10，12，14，16 μl，按照上述色谱条件分别进样。以峰面积为纵坐标（Y），进样量为横坐标（X），得标准曲线，回归方程为：Y = 60 213X + 81 796（r2=0.999 1）。绿原酸在1.40～5.60 μg范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系。
供试品溶液的制备：参考叶丛进［11］等的方法并稍作修改，取白菊花粉末（过1号筛）1.0 g,精密称定，置干燥烧瓶中，准确加入50.0 ml甲醇，称定重量，水浴加热回流提取2 h，冷却，用甲醇调至原重，摇匀，过滤，精密吸取滤液10 ml于烧杯中，水浴蒸干，残渣加入5 ml氯仿浸泡3 min，弃去氯仿液，挥干氯仿，加甲醇适量使其溶解，并转移至25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，滤液即为供试品溶液。
低氮可提高白菊花中绿原酸、总黄酮的含量，当施氮量超过一定限度后，白菊花中绿原酸、总黄酮含量呈下降趋势。不施氮肥也不利于白菊花绿原酸、总黄酮的合成，虽然低氮可提高白菊花中绿原酸、总黄酮的含量，但不利于提高单位面积白菊花总黄酮的产量。因此，以中等施氮水平3g/盆白菊花总黄酮产量最高。
超声医学影像论文 http://www.qikanba.com/
1 材料与方法
1.1 供试品种白菊花引自浙江桐乡。
1.2 供试肥料和试验设计控释肥料为金正大公司生产的两种4%的树脂包膜控释复合肥（CRF），N∶P2O5∶K2O比例分别14∶14∶14的CRF1和20∶8∶10的CRF2；常规肥料（CCF）N∶P2O5∶K2O比例为15∶15∶15。
试验于2007年在山东农业大学东校区树木园进行，土壤类型为砂质壤土，土壤基本养分状况为碱解氮104.41 mg/kg，有效磷49.12 mg/kg，有效钾134.24 mg/kg。试验设计为6个处理：①空白对照（CK），不施肥料；②习惯施肥（CCF），按每盆6 g施氮量施入CCF；③等氮素用量控释肥1（CRF11），施入与CCF等氮素用量的CRF1；④1/2氮素用量控释肥1（CRF12），按等于CCF一半氮素用量施入CRF1；⑤等氮素用量控释肥2（CRF21），施入与CCF等氮素用量的CRF2；⑥1/2氮素用量控释肥2（CRF22），施入等于CCF一半氮素用量的CRF2，磷、钾肥按养分比例施入。盆栽试验采用塑料花盆，每盆装土10 kg，将称好的土与肥料充分混匀后装盆，2007-04-25选取生长状况一致的白菊花根蘖苗移栽，每盆3株，每处理10盆，3次重复，共180盆，常规管理。
1.3 样品采集试验期间，每隔30 d取土壤样品用碱扩散法测定土壤中碱解氮含量，同时定株测定白菊花株高和茎粗；白菊花生长旺盛期、孕蕾期、开花期分别采主茎上第5个叶片用乙醇提取法测定叶绿素含量。当白菊花头状花序的中心小花70%开放时分批采收，120℃杀青10 min，55℃烘干，测定干花产量，并将各样品磨细装袋备用。
1.4 白菊花主要成分含量测定
1.4.1 总黄酮含量测定
标准曲线的绘制：参考李鹏等［10］的方法并稍作修改，准确称取芦丁对照品6.44 mg，用甲醇溶解并定容至25 ml，摇匀。精密吸取对照品0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分置于25 ml容量瓶中，各加水至6 ml，加5%亚硝酸钠溶液1.0 ml，摇匀放置6 min；加10%硝酸铝溶液1.0 ml，摇匀放置6 min，加10%氢氧化钠试液10 ml，加水至刻度，摇匀，放置15 min后，在512 nm处测定吸光度，以浓度为横坐标（X），吸光度为纵坐标（Y），得标准曲线，回归方程为：Y=0.010 78X-0.192（r=0.999 3）。芦丁在10.30～51.52 μg/ml范围内，浓度与吸收度呈良好的线性关系。
供试品溶液的制备：参考刘大会等［7］的方法精密称取白菊花粉末0.500 g，置150 ml具塞三角瓶中，准确加99.5%甲醇25 ml浸泡过夜，常温下超声提取30 min，滤过，滤液即为供试品溶液。 然后按照“1.4.1”项标准曲线制作方法进行测定。
1.4.2 绿原酸含量测定
高效液相色谱测定条件：高效液相色谱Water 600E，2966二级管阵列检测器，色谱柱为Symmetry C18 （4.6mm×150 mm, 5 μm），柱温35 ℃，流动相为MeOH-H2O（0.1% H3PO4）=20∶80，流速0.8 ml/min，检测波长为325 nm，进样量20 μl。
标准曲线的绘制：参考叶丛进等［11］的方法并稍作修改，准确称取绿原酸对照品3.56 mg，用甲醇溶解并定容至10 ml，摇匀。用微量进样器吸取对照品溶液4，6，8，10，12，14，16 μl，按照上述色谱条件分别进样。以峰面积为纵坐标（Y），进样量为横坐标（X），得标准曲线，回归方程为：Y = 60 213X + 81 796（r2=0.999 1）。绿原酸在1.40～5.60 μg范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系。
供试品溶液的制备：参考叶丛进［11］等的方法并稍作修改，取白菊花粉末（过1号筛）1.0 g,精密称定，置干燥烧瓶中，准确加入50.0 ml甲醇，称定重量，水浴加热回流提取2 h，冷却，用甲醇调至原重，摇匀，过滤，精密吸取滤液10 ml于烧杯中，水浴蒸干，残渣加入5 ml氯仿浸泡3 min，弃去氯仿液，挥干氯仿，加甲醇适量使其溶解，并转移至25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，滤液即为供试品溶液。
低氮可提高白菊花中绿原酸、总黄酮的含量，当施氮量超过一定限度后，白菊花中绿原酸、总黄酮含量呈下降趋势。不施氮肥也不利于白菊花绿原酸、总黄酮的合成，虽然低氮可提高白菊花中绿原酸、总黄酮的含量，但不利于提高单位面积白菊花总黄酮的产量。因此，以中等施氮水平3g/盆白菊花总黄酮产量最高。
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