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发表论文 梗阻性结直肠癌患者术前外周血细胞免瘦水平检测及其临床意义

　　为观察梗阻性和非梗阻性结直肠癌患者术前细胞免疫水平的变化，为治疗术式选择提供参考，我科应用流式细胞仪检测63例结直肠癌患者术前外周血细胞免疫活性，并选取15例健康志愿者作为对照，进行对比分析，报告如下。

　　1资料与方法

　　1. 1临床资料:选取2005-2010年接受手术治疗 且病理检查证实为结直肠癌的患者63例，其中梗阻性结直肠癌II例，非梗阻性结直肠癌52例，术前均元肠坏死、肠穿孔、体克，且围手术期未应用其他抗肿瘤治疗。梗阻性结直肠癌组中，男性8例，女性3例;年龄31 - 80岁，平均57. I岁;均行术中肠道减压、I期切除吻合术。非梗阻性结直肠癌组中，男性43例，女性9例;年龄25 -75岁，平均50.4岁;行根 治术48例，姑息性手术4例。选取同期健康志愿者15例作为对照组，其中男性10例，女性5例;年龄 31 -64岁，平均46.2岁;均签知情同意书。

　　1.2试剂和仪器: PE Mouse Anti - Human NKp46， anti - mouse CDl6/CD32、PE Mouse IgG I，k Isotype Control、FIrc - CD3均购自Coulter - Immunotech公 司。流式细胞仪为F ACS - Calibur，购自美国BD公司。

　　1.3方法:结直肠癌患者均于术前采血，对照组健 康志愿者F清晨空腹采血。采血量均为3mL，分装ImL和2mL两管，肝素抗凝。检测前取100?L抗 凝全血，加入50?L荧光标记的相应单克隆抗体，混匀、避光孵育30min，至振荡器中按程序自动加人红细胞裂解液，振荡裂解红细胞，再依次加人淋巴细胞保养液、细胞稀释液，制成细胞浓度为( 106 -lOS )/mL的待测标本，进入流式细胞仪读取结果。

　　1.4统计学方法:应用SPSSII. 0版本软件进行分 析。计量数据以X ± s表示，多组间比较采用F检验，两两比较采用q检验。P <0. 05为差异资料有统计学意义。
 

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　　2结果

　　与对照组比较，梗阻性结直肠癌组和非梗阻性结直肠癌组外周血T细胞亚群CD3+、CD4+细胞均减少，CDS+细胞均增多，CD4 + /CD8+比值均下降，自然杀伤(natural killer， NK)细胞比例均明显下降(P<O.OI);但梗阻性结直肠癌组与非梗阻性结直 肠癌组比较，r细胞各亚群和NK细胞比例差异均无统计学意义(P >0. 05)。提示梗阻性因素并不影响结直肠癌患者术前外周血细胞免疫水平，从而对结直肠癌患者行I期切除吻合术式的选择无影响。见表101.3方法:结直肠癌患者均于术前采血，对照组健 康志愿者F清晨空腹采血。采血量均为3mL，分装ImL和2mL两管，肝素抗凝。检测前取100?L抗 凝全血，加入50?L荧光标记的相应单克隆抗体，混匀、避光孵育30min，至振荡器中按程序自动加人红细胞裂解液，振荡裂解红细胞，再依次加人淋巴细胞保养液、细胞稀释液，制成细胞浓度为( 106 -lOS )/mL的待测标本，进入流式细胞仪读取结果。

　　机体的抗肿瘤免疫效应机制包括细胞免疫和体液免疫两方面，其中细胞免疫起主要作用。机体正常的免疫机制有赖于辅助性T细胞与抑制性T细胞比值的协调，故NK细胞、T淋巴细胞及其亚群能够直接反映机体细胞免疫的状态[l]。T细胞的免疫调节作用主要由CD4+和CD8 + 2个亚群完成，CD4+细胞协调B细胞分化产生抗体，具有协助体 液免疫及细胞免疫的功能;CD8+细胞则抑制抗体的合成、分泌及T细胞的增殖，是人体抗肿瘤免疫的主要部分离。CD4+/CD8+比值反映机体细胞免疫功能状态是否稳定，比值降低代表细胞免疫功能降低，因此，两者的稳态维持着机体正常的免疫应答[气NK细胞是一种非特异性的免疫活性细胞，它参与免疫巡逻并向宿主"报告"损伤，其内在的抗肿瘤活性，包括溶解肿瘤细胞和释放细胞因子，阻断血管发生以阻碍肿瘤生长。NK细胞是机体抗肿瘤的第1道防线，其数量的减少可致机体免疫减弱。有研究[4j发现，结直肠癌患者术前NK细胞活性明显低于对照组，且随着结直肠癌Ducke分期的增高，NK细胞活性逐渐降低，提示结直肠癌发生过程中 存在NK细胞功能的抑制，继而促进肿瘤的发展。恶性肿瘤患者免疫功能低下时，CD4+细胞减少、CD8+细胞增多、CD4 + /CD8+比值下降、NK细胞明 显减少等，都与肿瘤细胞分泌免疫抑制因子有关。当T细胞亚群的数量和功能发生异常时，机体的免疫功能受损，免疫杀伤肿瘤细胞的作用降低，为肿瘤迅速生长、转移、继发感染创造了条件，直接影响肿瘤发展和患者预后。

　　近年来，我国结直肠癌发生率明显增高，且并发肠梗阻者十分多见。传统观点问]认为，急性左半结肠梗阻行I期切除吻合易发生吻合口瘦，于术病死率较高。尽管对于右半结肠癌合并肠梗阻应行I期根治性切除吻合术，学者们已达成共识，但对左半结肠癌合并肠梗阻，多数仍认为宜行肿瘤切除E期吻合术，或行肿瘤近端肠管造口解除梗阻，II期切除肿瘤吻合术问。本结果显示，与对照组相比，梗阻性结直肠癌患者和非梗阻性结直肠癌患者T细胞亚群、NK细胞比例有明显变化，表现为CD3+、CD4+、NK细胞减少，CD8+细胞增多，CD4+/CD8+比值降 低，提示梗阻性和非梗阻性结直肠癌患者细胞免疫功能均显著下降，与文献[3J报道相吻合。

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