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沙枣黄酮类化合物含量测定方法-有关精神科护理的论文

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1  材料
  1.1  试剂乙醇(A.R),氢氧化钠(A.R),亚硝酸钠(A.R),硝酸铝(A.R),pH 8.2 Tris-HCl缓冲液(A.R),0.02%双氧水(A.R);7 mmol· L-1邻苯三酚(A.R);pH 7.4磷酸盐缓冲溶液(PBS,A.R);1.5 mmol· L-1邻二氮菲(A.R);2×10-4mol·L-1的DPPH(二苯基苦基苯肼,Sigma公司生产)。
  1.2 仪器TDL-5型低速台式离心机(上海隆拓仪器设备有限公司);赛多利斯电子天平(德国Sartorius);岛津UV-2401PC型紫外分光光度计(日本岛津公司生产);R-200型旋转薄膜蒸发器(瑞士BUCHI );eppendorf手动可调程单道移液器(德国艾本德股份公司);DL-360A型超声波清洗器(上海之信仪器有限公司);SHZ-C型循环水真空泵(河南豫华仪器有限公司);HH-S型恒温水浴锅(陕西太康生物科技有限公司)。
  2  方法
  2.1  黄酮的含量测定方法
  2.1.1  对照品溶液的制备精密称取芦丁标准品适量,用甲醇溶解,定容于50 ml容量瓶中,制得浓度为0.2 mg· ml-1的对照品溶液。
  2.1.2  最大吸收峰的确定精确吸取芦丁对照品溶液2 ml,加5%亚硝酸钠溶液0.3 ml,摇匀后静置6 min,加10%硝酸铝溶液0.3 ml,摇匀后静置6 min,加10%氢氧化钠溶液4.0 ml,用蒸馏水定容至10 ml,摇匀,放置15 min,于400~600 nm波长处扫描,结果在510 nm处有最大吸收。
  2.1.3  标准曲线的绘制精确吸取0.20 mg·ml-1芦丁对照品溶液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 ml,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3 ml摇匀,放置6 min,再加入10%硝酸铝溶液0.3 ml摇匀,放置6 min,最后加入10%氢氧化钠溶液4.0 ml,用蒸馏水定容至10 ml,摇匀,放置15 min,在510 nm处测定其吸光度值。以吸收度为纵坐标,对照品溶液的浓度(mg·ml-1)为横坐标,得线性回归方程:Y=9.735X -0.011 5,r=0.999 9。
  2.1.4  黄酮的提取准确称取粉末30.00 g,按料液比1∶10加入70%乙醇浸泡30 min,超声提取1 h, 过滤后得滤液和滤渣。滤渣再按上述方法提取2次,浓缩,定溶至50 ml容量瓶,作为试样液。
  2.1.5  黄酮的含量测定取试样液2 ml于10 ml容量瓶中,加入5%亚硝酸钠溶液0.3 ml,摇匀,放置6 min;再加入10%硝酸铝溶液0.3 ml,摇匀,放置6 min;最后加入10%氢氧化钠溶液4.0 ml,用蒸馏水定容至10 ml,摇匀,放置15 min;在510 nm处测定其吸光度值。根据标准曲线计算得沙枣果肉黄酮含量为0.928%。
  本研究表明,沙枣黄酮对·OH、O-2·和DPPH·均具有明显的清除作用,而且对自由基的清除作用随着黄酮液浓度的增加而增强。当浓度为0.4 mg·ml-1时,其清除率·OH为76.07%,O-2·为79.53%,DPPH·为93.91%。沙枣黄酮有很强的抗氧化活性,对自由基的清除能力总体强弱趋势是:DPPH·>O-2·>·OH。
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