葶苈生脉方治疗心衰的临床效果研究-大专护理专业毕业论文
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1 材料与仪器
1.1 药物葶苈生脉方由葶苈子、红参、黄芪、五味子、丹参等组成，实验时用蒸馏水分别配成含生药1.5 g/ml（低剂量）和3.0 g/ml（高剂量）的混悬液；心宝丸，实验时研磨成细末，用蒸馏水配成浓度为0.024 g/ml的水溶液，放置4℃冰箱贮存备用。
1.2 仪器与试剂FJ-2020型γ射线免疫计数器（国营262厂），MSE-25型高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂），LAUDA-C3型循环恒温水浴箱（泰克仪器有限公司），Motic6.0数码医学图象分析系统（厦门麦克奥迪仪器仪表有限公司）。IL-6、TNF-α试剂盒，均由解放军总医院科技开发中心放免所提供（批号：071125）。
2 方法
2.1 动物模型的建立、分组与给药健康成年Wistar大鼠60只，雌雄各半，体质量（180±20）g（河北省实验动物中心提供）。随机分为5组：假手术组、模型组、高剂量组、低剂量组、心宝丸组，每组12只。采用腹主动脉缩窄法造模，用丝线将模型组、各给药组大鼠腹主动脉缩窄至7号针头粗细，假手术组丝线穿过腹主动脉，不结扎，其它操作相同。于造模4周后开始给药，高剂量组、低剂量组分别按30，15 g/kg的标准灌服，心宝丸组按0.24 g/kg的标准灌服，假手术组和模型组灌服等量生理盐水，1次/d，每次用药体积均按1 ml/100 g计算，持续4周。实验过程中假手术组、模型组、高剂量组、低剂量组、心宝丸组各死亡0，3，2，2，3只，最后进入检测的动物分别为12，9，10，10，9只。
2.2 检测指标
2.2.1 TNF-α和、IL-6表达的放射免疫法检测于末次灌胃后禁食12 h，麻醉状态下股动脉取血，严格按试剂盒说明书检测血清TNF-α和IL-6。 心肌胶原容积分数（CVF）分析取部分左室心肌组织固定，组织切片行Masson染色，采用Motic6.0数码图象分析系统分析CVF，每个标本选取3张切片，每切片观察5个视野，最后计算平均值。统计学处理所有数据均采用SPSS 12 .0统计软件包进行分析，数据结果以±s，组间比较用单因素方差分析。
3 结果
结果显示，模型组大鼠血清TNF-α、IL-6及心肌CVF较假手术组明显升高（P<0.01）；各治疗组血清TNF-α、IL-6及心肌CVF均明显低于模型组（P<0.01）；且高剂量组优于低剂量组（P<0.01）。慢性心衰属于祖国医学的胸痹、心悸、怔忡、水肿等病证的范畴。气虚、血瘀、水停为其主要病机，益气活血，强心利水为其主要治则。临床实践证实，葶苈生脉方具有益气、活血、利水之功效，是治疗心力衰竭的有效方药。
大量研究报道炎症细胞因子活化可破坏心脏结构和功能，使心衰进一步恶化，TNF-α是核心，此外还包括IL-1β和IL-6。本实验结果表明，心衰大鼠模型血清TNF-α、IL-6含量升高，证实了上述观点。提示以TNF-α、IL-6升高为标志的炎症机制参与了CHF的进程，它们可能通过抑制心脏收缩、促进心肌细胞的凋亡、促进心室重构等途径参与CHF的发生发展。TNF-α主要来源于激活的单核巨噬细胞，正常心肌细胞不能产生TNF-α，慢性心衰时在多种因素刺激下，心肌细胞产生大量TNF-α，它一方面可通过激活基质金属蛋白酶（MMPs）和抑制基质金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）表达参与细胞外基质重塑，导致渐进性的左室扩张、左室泵衰竭和心肌细胞收缩功能障碍 ，另一方面又可直接作用于成纤维细胞导致胶原纤维的合成分泌增多［2］。
此外，TNF-α还能促进其他炎性细胞因子IL-6的表达和释放。IL-6是一种具有多向性作用的细胞因子，主要由单核细胞、内皮细胞和成纤维细胞等产生。有研究表明IL-6可增加间质纤维化和胶原增生，且IL-6水平的增高与Ⅰ型和Ⅲ型胶原沉积密切相关［3］。心肌胶原是细胞外基质的主要成分，它在维持心脏结构和功能方面起重要作用。正常时胶原的生成和降解在体内处于动态平衡状态，病理条件下，胶原的增多或减少都会引起心室重构及心肌纤维化，加重心衰。
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1 材料与仪器
1.1 药物葶苈生脉方由葶苈子、红参、黄芪、五味子、丹参等组成，实验时用蒸馏水分别配成含生药1.5 g/ml（低剂量）和3.0 g/ml（高剂量）的混悬液；心宝丸，实验时研磨成细末，用蒸馏水配成浓度为0.024 g/ml的水溶液，放置4℃冰箱贮存备用。
1.2 仪器与试剂FJ-2020型γ射线免疫计数器（国营262厂），MSE-25型高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂），LAUDA-C3型循环恒温水浴箱（泰克仪器有限公司），Motic6.0数码医学图象分析系统（厦门麦克奥迪仪器仪表有限公司）。IL-6、TNF-α试剂盒，均由解放军总医院科技开发中心放免所提供（批号：071125）。
2 方法
2.1 动物模型的建立、分组与给药健康成年Wistar大鼠60只，雌雄各半，体质量（180±20）g（河北省实验动物中心提供）。随机分为5组：假手术组、模型组、高剂量组、低剂量组、心宝丸组，每组12只。采用腹主动脉缩窄法造模，用丝线将模型组、各给药组大鼠腹主动脉缩窄至7号针头粗细，假手术组丝线穿过腹主动脉，不结扎，其它操作相同。于造模4周后开始给药，高剂量组、低剂量组分别按30，15 g/kg的标准灌服，心宝丸组按0.24 g/kg的标准灌服，假手术组和模型组灌服等量生理盐水，1次/d，每次用药体积均按1 ml/100 g计算，持续4周。实验过程中假手术组、模型组、高剂量组、低剂量组、心宝丸组各死亡0，3，2，2，3只，最后进入检测的动物分别为12，9，10，10，9只。
2.2 检测指标
2.2.1 TNF-α和、IL-6表达的放射免疫法检测于末次灌胃后禁食12 h，麻醉状态下股动脉取血，严格按试剂盒说明书检测血清TNF-α和IL-6。 心肌胶原容积分数（CVF）分析取部分左室心肌组织固定，组织切片行Masson染色，采用Motic6.0数码图象分析系统分析CVF，每个标本选取3张切片，每切片观察5个视野，最后计算平均值。统计学处理所有数据均采用SPSS 12 .0统计软件包进行分析，数据结果以±s，组间比较用单因素方差分析。
3 结果
结果显示，模型组大鼠血清TNF-α、IL-6及心肌CVF较假手术组明显升高（P<0.01）；各治疗组血清TNF-α、IL-6及心肌CVF均明显低于模型组（P<0.01）；且高剂量组优于低剂量组（P<0.01）。慢性心衰属于祖国医学的胸痹、心悸、怔忡、水肿等病证的范畴。气虚、血瘀、水停为其主要病机，益气活血，强心利水为其主要治则。临床实践证实，葶苈生脉方具有益气、活血、利水之功效，是治疗心力衰竭的有效方药。
大量研究报道炎症细胞因子活化可破坏心脏结构和功能，使心衰进一步恶化，TNF-α是核心，此外还包括IL-1β和IL-6。本实验结果表明，心衰大鼠模型血清TNF-α、IL-6含量升高，证实了上述观点。提示以TNF-α、IL-6升高为标志的炎症机制参与了CHF的进程，它们可能通过抑制心脏收缩、促进心肌细胞的凋亡、促进心室重构等途径参与CHF的发生发展。TNF-α主要来源于激活的单核巨噬细胞，正常心肌细胞不能产生TNF-α，慢性心衰时在多种因素刺激下，心肌细胞产生大量TNF-α，它一方面可通过激活基质金属蛋白酶（MMPs）和抑制基质金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）表达参与细胞外基质重塑，导致渐进性的左室扩张、左室泵衰竭和心肌细胞收缩功能障碍 ，另一方面又可直接作用于成纤维细胞导致胶原纤维的合成分泌增多［2］。
此外，TNF-α还能促进其他炎性细胞因子IL-6的表达和释放。IL-6是一种具有多向性作用的细胞因子，主要由单核细胞、内皮细胞和成纤维细胞等产生。有研究表明IL-6可增加间质纤维化和胶原增生，且IL-6水平的增高与Ⅰ型和Ⅲ型胶原沉积密切相关［3］。心肌胶原是细胞外基质的主要成分，它在维持心脏结构和功能方面起重要作用。正常时胶原的生成和降解在体内处于动态平衡状态，病理条件下，胶原的增多或减少都会引起心室重构及心肌纤维化，加重心衰。
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