复方中药和含药血清的药效研究-门诊护士论文
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1 材料与仪器
1.1 对象雄性Sprague-dawley大鼠，体质量（250±20）g，购于山东中医药大学动物中心，符合国家二级实验动物标准；人脐静脉内皮细胞系（hUVECs，购自山东省医学科学院，自美国组织培养库ATTCCCRI－1998引进）。
1.2 试剂1640培养基（GIBCO公司产品）、胎牛血清（FBS，Hyclone公司产品）；四氮唑蓝（美国SIGMA）；二甲基亚砜（北京世纪银丰科技有限公司）。
1.3 仪器 JJT-1300超净工作台（北京半导体设备一厂）；5%CO2恒温培养箱（Forma Scientific 公司）；倒置相差显微镜（美国AO Sientific Instrument；酶标仪）；EL340I 全自动酶标仪（美国Biotok公司产品）。
2 方法
2.1 药物的配制和含药血清的制备化浊行血汤由荷叶、焦山楂、决明子、赤芍、酒大黄、路路通、虎杖、何首乌，制水蛭粉组成（全部药材来源于山东中医药大学附属医院），为水煎醇沉工艺制作浸膏，4℃贮存备用。
取SD大鼠按8.25 g/kg灌服化浊行血汤。中药A组大鼠按照每日灌胃两次连续3 d，中药B组大鼠按照灌胃1次/d，连续5 d，空白组灌服等量生理盐水，末次给药前禁食12 h，给药后30，60，90，150 min腹主动脉取血，分离血清并灭活、过滤除菌，置－20℃保存备用。
2.2 内皮细胞体外缺血、缺氧模型的建立和实验分组选择生长良好的内皮细胞，以5×104/ml 密度接种于96孔板，培养24 h后，分为正常对照组、模型组及药物（缺氧）各剂量组进行缺血、缺氧造模及干预。 ①正常组：换1640培养基（1640 90%，正常大鼠血清10%），并始终在正常条件下培养。②模型组：以2006年叶武等［1］报告的方法稍加改进。缺氧时先将缺氧罐（由干燥皿改装）提前10 min充入氮气（流速4.5 L／min），以保证缺氧罐内气体的纯度，罐周边封凡士林密闭，然后置于37℃生化培养箱中，备用。将培养板中内皮细胞换缺氧无血清1640培养基（用前预先向培养基通入氮气3 min）；将其放入缺氧罐内。缺氧6h后，将培养液换为含10％正常大鼠血清的1640培养液，置于培养箱中（空气+5%CO2）继续培养18 h，然后进行检测。③中药各剂量组：造模同模型组，缺氧6 h后，将培养液换成含10％SD大鼠药物血清的1640培养液，置于培养箱中（空气+5% CO2）继续培养18 h，然后进行检测。
2.3 四氮唑蓝（MTT）检测各组内皮细胞两次，各加入1640 100 μl，MTT 15 μl，继续置培养箱中孵育4 h。吸弃孔内液体，每孔加入二甲基亚砜（DMSO）100 μl，终止反应。振荡器振荡10 min，全自动酶标仪490 nm波长，空白孔调零，测定各孔吸光度（OD）值。
3 结果
各组内皮细胞形态特征变化镜下观察正常组内皮细胞展开贴壁，形态无明显改变。体外模拟缺氧6 h后模型组内皮细胞回缩，间隙变大，变圆细胞增多，常规培养18 h后大量内皮细胞变圆并呈团漂浮，折光性增强。中剂量中药各组镜下观察缺氧并经含药血清干预后也可见细胞回缩，部分细胞变圆并漂浮；但各组仍见贴壁的内皮细胞数量明显多于模型组，漂浮变圆细胞明显少于模型组。
人力资源管理激励论文 http://www.qikanba.com/
1 材料与仪器
1.1 对象雄性Sprague-dawley大鼠，体质量（250±20）g，购于山东中医药大学动物中心，符合国家二级实验动物标准；人脐静脉内皮细胞系（hUVECs，购自山东省医学科学院，自美国组织培养库ATTCCCRI－1998引进）。
1.2 试剂1640培养基（GIBCO公司产品）、胎牛血清（FBS，Hyclone公司产品）；四氮唑蓝（美国SIGMA）；二甲基亚砜（北京世纪银丰科技有限公司）。
1.3 仪器 JJT-1300超净工作台（北京半导体设备一厂）；5%CO2恒温培养箱（Forma Scientific 公司）；倒置相差显微镜（美国AO Sientific Instrument；酶标仪）；EL340I 全自动酶标仪（美国Biotok公司产品）。
2 方法
2.1 药物的配制和含药血清的制备化浊行血汤由荷叶、焦山楂、决明子、赤芍、酒大黄、路路通、虎杖、何首乌，制水蛭粉组成（全部药材来源于山东中医药大学附属医院），为水煎醇沉工艺制作浸膏，4℃贮存备用。
取SD大鼠按8.25 g/kg灌服化浊行血汤。中药A组大鼠按照每日灌胃两次连续3 d，中药B组大鼠按照灌胃1次/d，连续5 d，空白组灌服等量生理盐水，末次给药前禁食12 h，给药后30，60，90，150 min腹主动脉取血，分离血清并灭活、过滤除菌，置－20℃保存备用。
2.2 内皮细胞体外缺血、缺氧模型的建立和实验分组选择生长良好的内皮细胞，以5×104/ml 密度接种于96孔板，培养24 h后，分为正常对照组、模型组及药物（缺氧）各剂量组进行缺血、缺氧造模及干预。 ①正常组：换1640培养基（1640 90%，正常大鼠血清10%），并始终在正常条件下培养。②模型组：以2006年叶武等［1］报告的方法稍加改进。缺氧时先将缺氧罐（由干燥皿改装）提前10 min充入氮气（流速4.5 L／min），以保证缺氧罐内气体的纯度，罐周边封凡士林密闭，然后置于37℃生化培养箱中，备用。将培养板中内皮细胞换缺氧无血清1640培养基（用前预先向培养基通入氮气3 min）；将其放入缺氧罐内。缺氧6h后，将培养液换为含10％正常大鼠血清的1640培养液，置于培养箱中（空气+5%CO2）继续培养18 h，然后进行检测。③中药各剂量组：造模同模型组，缺氧6 h后，将培养液换成含10％SD大鼠药物血清的1640培养液，置于培养箱中（空气+5% CO2）继续培养18 h，然后进行检测。
2.3 四氮唑蓝（MTT）检测各组内皮细胞两次，各加入1640 100 μl，MTT 15 μl，继续置培养箱中孵育4 h。吸弃孔内液体，每孔加入二甲基亚砜（DMSO）100 μl，终止反应。振荡器振荡10 min，全自动酶标仪490 nm波长，空白孔调零，测定各孔吸光度（OD）值。
3 结果
各组内皮细胞形态特征变化镜下观察正常组内皮细胞展开贴壁，形态无明显改变。体外模拟缺氧6 h后模型组内皮细胞回缩，间隙变大，变圆细胞增多，常规培养18 h后大量内皮细胞变圆并呈团漂浮，折光性增强。中剂量中药各组镜下观察缺氧并经含药血清干预后也可见细胞回缩，部分细胞变圆并漂浮；但各组仍见贴壁的内皮细胞数量明显多于模型组，漂浮变圆细胞明显少于模型组。
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